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《中国医学创新》第 12 卷 第 34 期（总第 352 期）2015 年 12 月　　医学综合 Yixuezonghe
Medical Innovation of China Vol.12, No.34 Dec,2015
中华苦荬菜提取物Chinensiolide A的体外
抗肿瘤活性*
周黎①　赵颖①　王玉①　李丽波②　张树军③　李涛①
　　【摘要】　目的：探究中华苦荬菜提取物 Chinensiolide A（C15H18O4）对肺腺 A549 细胞、肝癌 Ble-7402 细胞
及结直肠腺癌 LoVo 细胞的抗肿瘤活性。方法：用不同浓度的 Chinensiolide A 处理体外培养的肺腺癌 A549 细胞、
肝癌 Ble-7402 细胞及结直肠腺癌 LoVo 细胞 24 h 后，采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT 法）检测 Chinensiolide
A 对该 3 种细胞生长的影响，计算细胞生长抑制率得出半数抑制浓度（IC50），并观察形态学变化。结果：在
1~50 μmol/L 浓度范围内，Chinensiolide A 对肺腺癌 A549 细胞、肝癌 Ble-7402 细胞及结直肠腺癌 LoVo 细
胞都有较强的抑制率，且随着浓度的增大，抑制作用越强，IC50 分别是 17.79 μmol/L、25.75 μmol/L、13.6
μmol/L。形态学结果显示，Chinensiolide A 对上述 3 种肿瘤细胞均有不同程度的杀伤作用，其作用随浓度的增
加而增强。结论：中华苦荬菜提取物 Chinensiolide A 在体外可有效的抑制肺腺癌 A549 细胞、肝癌 Ble-7402 细
胞及 LoVo 细胞的生长，具有较强的抗肿瘤活性。
　　【关键词】　Chinensiolide A；　MTT 法；　抗肿瘤药；　细胞系；　肿瘤；　体外研究
　　In Vitro Anti-tumor Activity of Extract Chinensiolide A from the Ixeris Chinensis/ZHOU Li，ZHAO Ying，
WANG Yu，et al.//Medical Innovation of China，2015，12（34）：109-111
　　【Abstract】　Objective：To explore the antitumor activity of extract Chinensiolide A from the Ixeris chinensis on
A549 cells，Ble-7402 cells and LoVo cells.Method：Chinensiolide A was treated with different concentrations of A549
lung adenocarcinoma cells，Ble-7402 liver cancer cells and LoVo cells of colorectal adenocarcinoma after 24 h，the MTT
method was used to detect Chinensiolide A influence the three kinds of cell on growth， half inhibitory concentration （IC50）
was calculated by cell growth inhibition rate， and the morphological changes were observed.Result：In 1 to 50 μmol/L
concentration range， Chinensiolide A on lung adenocarcinoma A549 cell， Ble-7402 cells of liver cancer and colorectal
adenocarcinoma LoVo cells had strong inhibition rate， and with the increase of concentration， the stronger the inhibition，
the IC50 was respectively 17.79 μmol/L，25.75 μmol/L and 13.6 μmol/L.Conclusion：Chinensiolide A can effectively
inhibit the growth on A549 cells， Ble-7402 cells and LoVo cells in vitro ，it has stronger antitumor activity.
　　【Key words】　Chinensiolide A；　MTT assay；　Antineplastic drugs；　Cell line；　Tumor；　In vitro study
　　First-author’s address：School of Basic Medicine，Qiqihar Medical University，Qiqihar 161006，China
　　doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2015.34.034
　　在现代抗肿瘤药物中，中药占据重要的地位，目
前从中草药资源中寻找选择性高、活性强、作用独特、
毒副作用小的抗肿瘤新药研究方兴未艾 [1]。中华苦荬
菜又名丝叶苦菜、山苦菜，系菊科被子植物，1~2 年
生或多年生草本，叶或茎被折断后有白色乳状物流出，
全草呈苦味，具有清热、解毒、消炎、凉血、止痛、
消肿等功效 [2-3]。本研究首次报道了中药中华苦荬菜根
部提取物 Chinensiolide A（化学结构见图 1）在细胞水
平上对肺腺癌 A549 细胞、人肝癌 Ble-7402 细胞、结
直肠腺癌 LoVo 三种细胞的抑制作用，为该药接下来
的临床应用提供科学依据。
图1　Chinensiolide A化学结构
1　材料与方法
1.1　材料与试剂　中华苦荬菜提取物 Chinensiolide A
* 基金项目：教育部大学生创新创业重点项目（201311230001）
①齐齐哈尔医学院基础医学院　黑龙江　齐齐哈尔　161006
②齐齐哈尔医学院药学院
③齐齐哈尔大学
通信作者：李涛
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医学综合 Yixuezonghe　　《中国医学创新》第 12 卷 第 34 期（总第 352 期）2015 年 12 月
Medical Innovation of China Vol.12, No.34 Dec,2015
由张树军等 [4] 合成，纯度≥ 98%（HPLC），人肺腺癌
A549 细胞、肝癌 Ble-7402 细胞及结直肠腺癌 LoVo 细
胞来自齐齐哈尔医学院基础研究室 [5-6]。DMEM 培养
液购自美国 Gibco 公司；胎牛血清购自 hyclone 公司，
胰蛋白酶、四甲基偶氮唑盐（MTT）及二甲基亚砜
（DMSO）购自 Sigma 公司。
1.2　仪器与设备　Safire2 多功能酶标仪购自奥地利，
洁净操作台购自苏净集团安泰公司，二氧化碳孵箱购
自日本三洋公司，Olympus IX70-SIF2 倒置显微镜；恒
温水浴锅，电子天平购自德国赛多利斯集团，微量移
液器购自 Gilson 公司。
1.3　实验方法
1.3.1　药液配制　精密称取 Chinensiolide A 粉末适量，
转至 1 mL 量瓶中，加入 DMSO 稀释至刻度，充分溶解，
使母液浓度为 55 mmol/L。取母液 10 μL，加入不含血
清的培养基 990 μL，稀释至 550 μmol/L 的工作液。过
滤除菌后使用，现用现配。取上述工作液 10 μL，加
至 100 μL 细胞液中，终浓度为 50 μmol/L，确保
DMSO 的终浓度不超过 0.1%。
1.3.2　细胞培养　将肺腺癌 A549 细胞、肝癌 Ble-
7402 细胞及结直肠腺癌 LoVo 细胞分别置于 5 mL
DMEM 培养液的培养瓶中，在 37 ℃、体积分数为 5％
的 CO2 的培养箱中培养，细胞呈贴壁生长，复苏次日
及隔日更换培养液，待细胞至对数生长期进行传代，
消化液为 0.25% 胰蛋白酶与 0.02% EDTA[7]。实验选择
处于对数生长期的细胞进行研究。
1.3.3　MTT 法测细胞活性　对数生长期的 A549 细胞、
Ble-7402 细胞及 LoVo 细胞，消化后计数制成细胞悬液，
浓度为 4×104 个 /mL，取 100 μL 接种于 96 孔板中，
培养 24 h 后，加入不同浓度的 Chinensiolide A，加样
体积为 10 μL/ 孔，对照孔加 DMSO，继续培养 24 h，
然后每孔加入 6 mg/mL 的 MTT 磷酸缓冲液 10 μL，
同条件下继续培养 4 h，弃孔内原有液体，加 DMSO
150 μL/ 孔，振荡以充分溶解结晶，用全自动酶标仪
测定 570 nm 处的吸光度（D 值）（参比波长 630 nm）。
以溶剂对照组细胞存活率为 100%，计算不同浓度的
Chinensiolide A 实验组细胞的存活率和抑制率。计算
公式如下：存活率 =（Chinensiolide A 实验组 D 值 / 对
照组 D 值）×100%；抑制率 =100%- 存活率。采用计
算软件（LOGIT 法）计算 Chinensiolide A 的半数抑制
浓度（IC50）值，每个实验重复 3 次。
1.3.4　形态学观察比较法　在加药 24 h 后，加入 MTT
10 μL/ 孔，继续培养 4 h 后，利用倒置显微镜观察实
验组与对照组细胞，进行形态学观察分析。
1.4　统计学处理　使用 SPSS 21.0 统计软件进行分析，
计量资料采用（x-±s）表示，单因素方差分析（one
way ANOVA）进行组间比较，以 P<0.05 为差异有统计
学意义。
2　结果
2.1　Chinensiolide A 对肺腺癌 A549 细胞的影响　在
浓度 1~50 μmol/L 间 Chinensiolide A 对肺腺癌 A549
细胞的抑制作用随浓度的增长而增加，存活率依次
降低。在 10、20 μmol/L 两浓度药物作用下抑制率
差距尤为显著，在 50 μmol/L 时，Chinensiolide A 对
人肺癌 A549 细胞活力的抑制率已高达 98.37%，提示
Chinensiolide A 在低浓度对 A549 细胞也有较强的抑制
作用。Chinensiolide A 对人肺癌 A549 细胞 IC50 值是
17.79 μmol/L，见表 1。
表1　Chinensiolide A对人肺癌A549细胞活力的抑制作用（x-±s）%
组别 存活率 抑制率
空白对照组 99.99±5.06 0.01±5.06
Chinensiolide A 浓度
1 μmol/L 99.57±2.22 0.43±2.22
10 μmol/L 89.32±3.53* 10.68±3.53*
20 μmol/L 59.85±3.32* 40.15±3.32*
30 μmol/L 30.99±3.67* 69.01±3.67*
40 μmol/L 24.46±2.80* 75.54±2.80*
50 μmol/L 1.63±0.45* 98.37±0.45*
　　* 与空白对照组比较，P<0.01；1~50 μmol·L-1Chinensiolide A
各组间两两比较，P<0.01
2.2　Chinensiolide A 对肝癌 Ble-7402 细胞的影响　在
浓度 1~50 μmol/L 浓度范围内，Chinensiolide A 对肝
癌 Ble-7402 细胞的抑制率由 0.68% 升至 85.27%，抑
制作用随药物浓度的增加而增长，且各浓度组间比较
差异均有统计学意义（P<0.05），其浓度依赖关系显
著。Chinensiolide A 对肝癌 Ble-7402 细胞的 IC50 值为
25.75 μmol/L，见表 2。
表2　Chinensiolide A对人肺癌BEL-7402细胞活力的
抑制作用（x-±s）　 　　　　　　　　 %
组别 存活率 抑制率
空白对照组 99.99±1.99 0.01±1.99
Chinensiolide A 浓度
1 μmol/L 99.32±1.18 0.68±1.18
10 μmol/L 84.15±3.53* 15.85±3.53*
20 μmol/L 67.27±2.37* 32.73±2.37*
30 μmol/L 52.83±2.64* 47.17±2.64*
40 μmol/L 34.33±5.04* 66.67±5.04*
50 μmol/L 14.73±3.22* 85.27±3.22*
　　* 与空白对照组比较，P<0.01；1~50 μmol/L Chinensiolide A 各
组间两两比较，P<0.01
2.3　Chinensiolide A 对结直肠腺癌LoVo细胞的影响　在
浓度 1~50 μmol/L 浓度范围内，Chinensiolide A 对结
直肠腺癌 LoVo 细胞的抑制作用随浓度的增长而增
加，抑制作用由 1.12% 增至 99.57%，接近于全部抑
制；且各组之间抑制率变化幅度较大，尤其在浓度
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1、10 μmol/L 浓度和 40、50μmol/L 浓度之间变化近
30 个百分点，说明其抑制作用呈现出一定的浓度依赖
趋势。Chinensiolide A 对结直肠腺癌 LoVo 细胞的 IC50
值为 13.6 μmol/L，见表 3。
表3　Chinensiolide A对人肺癌LoVo细胞活力的抑制作用（x-±s）%
组别 存活率 抑制率
空白对照组 99.99±1.79 0.01±1.79
Chinensiolide A 浓度
1 μmol/L 98.88±2.95 1.12±2.95
10 μmol/L 70.65±4.71* 29.35±4.71*
20 μmol/L 55.39±6.29* 44.61±6.29*
30 μmol/L 43.92±2.96* 56.08±2.96*
40 μmol/L 24.61±3.84* 75.39±3.84*
50 μmol/L 0.43±0.65* 99.57±0.65*
　　* 与空白对照组比较，P<0.01；1~50 μmol·L-1Chinensiolide A
各组间两两比较，P<0.01
2.4　形态学观察　结果显示空白组细胞贴壁正常生
长、分裂，呈不规则形状，部分细胞中有多个细胞核
且细胞核较大，颜色较深，细胞之间紧密排列，生长
状态良好。药物组细胞生长缓慢，部分细胞死亡，药
物对 3 种肿瘤细胞的生长有不同程度的杀伤作用，对
每种肿瘤细胞的抑制作用随浓度的增加作用增强。加
入 MTT 后，能清楚看出存活的细胞，与空白对照组相
比，Chinensiolide A 的浓度在 50μmol/L 时，对 3 种细
胞系抑制作用最强。
3　讨论
　　如今肿瘤俨然成为 21 世纪一大难题，关于治疗肿
瘤疾病的课题也成为世界大热点，中药具有多环节、
多靶点抗肿瘤的作用，并且毒性小，副作用低，源于
自然，药源丰富，国内外对单味中药提取物抗肿瘤作
用进行了广泛而深入的研究 [8-13]。中华苦荬菜具有多
方面的生物活性，包括抗炎、抗烟碱、抗氧化、抗病
毒、抗白血病等，其根部提取物 Chinensiolide A 为愈
创木烷型倍半萜内酯类化合物 [14-15]。本实验通过研
究 Chinensiolide A 在 3 种人源肿瘤细胞系——人肺癌
A549 细胞、人肝癌 BEL-7402 细胞和人结直肠腺癌
LoVo 细胞的抗肿瘤活性，首次探究出其较强的抗肿瘤
活性。
　　本课题组经过在药物浓度 1~1000 μmol/L 范围内
的初步研究，发现 Chinensiolide A 对三种肿瘤细胞系
均有不同程度的抑制作用，且作用显著。在预实验中，
Chinensiolide A 浓度大于 50 μmol/L 时，细胞存活率均
小于 10％，随着浓度的增加存活率明显下降，发现该
药对三种细胞均有不同程度的抑制作用，且作用比较
明显，从而根据数据设计，将浓度确定在 1~50 μmol/L
准确测量，来获得准确的 IC50 数值。结果显示中华苦
荬菜提取物 Chinensiolide A 对肺腺癌 A549 细胞、肝癌
Bel-7402 细胞、结直肠腺癌 LoVo 细胞有明显抑制作用，
IC50 分别是 17.79 μmol/L、25.75 μmol/L、13.6 μmol/L。
　　综上所述，中华苦荬菜提取物 Chinensiolide A 具
有一定的抗肿瘤活性，在对三种细胞系的实验中，
Chinensiolide A 对 A549 细胞、LoVo 细胞的抑制作用
要较对 Bel-7402 细胞显著。因此，Chinensiolide A 在
抗肿瘤方面具有很好的发展前景，值得深入探究，在
接下来的研究中，可以通过抗肿瘤细胞增殖，诱导肿
瘤细胞周期阻滞、凋亡、分化，肿瘤免疫以及动物水
平等各种研究方法来更精确地了解抗肿瘤机制。
参 考 文 献
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（收稿日期：2015-07-11）　（本文编辑：周亚杰）