全 文 ：分光光度法测定矮丛风毛菊中总黄酮的含量
昝建华
(青海交通职业技术学院 ,青海西宁　810003)
摘　要:目的:对矮丛风毛菊中的总黄酮进行提取及含量测定.方法:通过正交实验确定提取黄酮的优化条件 ,用分光光度法测
定黄酮的含量.结果:矮丛风毛菊中黄酮的含量为 6.81%.结论:该方法操作简便 、结果准确可靠.
关键词:分光光度法;矮丛风毛菊;黄酮;提取;含量测定
中图分类号:O657.32　　　　文献标识码:A　　　　文章编号:1001-7542(2007)02-0060-03
矮丛风毛菊(saussurea eopygmaea hand -mazz)为菊科植物 ,藏语称为“巴冒卡” ,是青藏高原藏医常用
的一种藏药材.多年生草本 ,高 5-40厘米 ,根茎部密披褐色枯存叶柄 ,茎直立 ,单一 ,常紫褐色 ,披白色
绢状毛.头状花序通常单生茎端 ,总苞多层 ,外层披针形至卵状披针形 ,先端长渐尖 ,背面披白色粗毛[ 1] .
产于青海 、甘肃 ,生于海拔 3400-5000米的高山草地和灌木丛中.藏医用干燥的全草或头状花序入药 ,
花期采全草 ,洗去根部泥土晾干 ,或采头状花序晾干[ 2] .性味凉 、苦 、微甘 ,用于治疗黄疸 、胆囊炎 、脉病 、
结膜炎 、疖肿及传染病引起的热病.香港科技大学化学系研究报道 ,西藏医学中用于治疗黄疸病 、腹泻及
发烧的菊科植物矮丛风毛菊的 95%乙醇提取物对 S180肉瘤及艾氏腹水癌细胞有细胞毒作用 ,在体内有
抗癌活性.黄酮类化合物具有降脂 、抗血栓 、抗氧化 、降多糖等多种生理活性[ 3] .有关矮丛风毛菊中黄酮
的提取及含量测定的研究未见报道.本文对矮丛风毛菊中黄酮的提取及含量测定进行了研究 ,利用正交
实验确定了最佳的提取条件 ,用分光光度法测定了其中的总黄酮含量.
1　仪器 、试剂和样品
1.1　仪器
HH-4数显恒温水浴锅(国华电器有限公司);721型分光光度计(上海第三分析仪器厂);RE52-98
型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);FZ102S型微型植物粉碎机(天津市秦斯特仪器有限公司).
1.2　试剂
芦丁(对照品)、乙醇 、亚硝酸钠 、硝酸铝 、氢氧化钠均为分析纯.
1.3　样品
矮丛风毛菊:产于青海黄南.
2　方法与结果
2.1　黄酮的提取
　　准确称取经干燥粉碎处理后的矮丛风
毛菊5g ,置于圆底烧瓶中 ,按表 1进行水浴
回流提取 ,连续回流六小时 、过滤 ,滤液用
95%的乙醇定容于 100mL容量瓶中.
选择乙醇浓度 、温度 、料液比为考查因
表 1　因素水平表
水平 乙醇浓度 A 温度(℃)B 料液比 C
1 50 40 1∶12
2 75 60 1∶16
3 95 80 1∶20
收稿日期:2007-01-02
作者简介:昝建华(1962-),男(汉族),安徽太和人 ,高级讲师.
2007年
第 2期 　　　 　　　　　
青海师范大学学报(自然科学版)
Journal of Qinghai Normal University(Natural Science)　　 　　　　　　
2007
No.2
DOI :10.16229/j.cnki.issn1001-7542.2007.02.019
素 ,以黄酮含量为测定指标 ,采用 L9(33)正交试验方法确定黄酮的最佳工艺参数(见表 1 、表2).
表 2　正交试验结果分析
实验号 A B C 黄酮含量(%)
1 1 1 1 6.33
2 1 2 2 4.50
3 1 3 3 6.50
4 2 1 2 4.33
5 2 2 3 6.81
6 2 3 1 4.31
7 3 1 3 3.15
8 3 2 1 6.80
9 3 3 2 2.32
K1 17.33 13.81 17.44
K2 15.45 18.11 11.15
K3 12.27 13.13 16.46
k1 5.77 4.60 5.81
k2 5.15 6.03 3.71
k3 4.09 4.37 5.48
极差 1.68 1.66 2.10
由表 2直观分析可知 , 5号实验结果最好 ,对应的优化组合为 A2B2C3 ,由极差分析表明:A 、B 、C 三因
素对结果影响主次顺序为 C>A>B ,通过正交实验最佳提取条件为:乙醇浓度为 75%、水浴温度为
60℃、料液比为 1∶20.
2.2　标准工作曲线的绘制
2.2.1　芦丁标准液的配制　精确称取 100℃干燥恒重的芦丁标样 10mg.用 50%乙醇溶解并定容于
50mL容量瓶中 ,摇匀 ,得浓度为 0.2mg mL标准溶液.
2.2.2　吸收曲线绘制　准确移取芦丁标液 3.00mL ,按标准曲线项下的操作方法在 450-600nm 每隔
5nm测一次吸光度.结果见图 1.在 510nm处有最大吸收 ,因此选择 510nm为最大测定波长.
2.2.3　标准工作曲线绘制　分别移取芦丁标液 0.00mL 、1.0mL 、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL、6.0mL、
7.0mL 、8mL 于25mL容量瓶中 ,用 30%乙醇稀释至 10mL ,加入 0.7mL5%亚硝酸钠溶液摇匀 ,立刻加入
0.7mL10%硝酸铝 ,摇匀 ,放置 5 分钟 ,加入 5ml1mol LNaOH 溶液 ,用 30%乙醇定容 ,混合后摇匀 ,放置
5min;以试剂空白为参比 ,在 510nm 处测定吸光度(数据见表 3),求得标准曲线的回归方程为 A=
8.9598C-0.0016 , r=0.9996 ,线性范围为 0.008-0.064mg mL.
表 3　吸光度与芦丁标液浓度的关系
芦丁标液浓度 0.008 0.016 0.024 0.032 0.040 0.048 0.056 0.064
吸光度 0.070 0.141 0.217 0.296 0.368 0.428 0.500 0.573
2.3　精密度实验　同一样品液重复测定 6次 ,RSD=0.012%.
2.4　加标回收率实验　移取同一样品液 0.5mL 若干份 ,分别加入一定量的芦丁标液 ,按标准曲线项下
的方法 ,以试剂空白为参比.在 510mn处测吸光度 ,结果见表 4 ,平均回收率在 99.2%.
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图 1　吸收曲线图　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　图 2　标准曲线图
表 4　回收率实验结果
序号 芦丁加入量(mg) 吸光度(A) 测得量(mg) 回收(%)
1 0.00 0.180
2 0.02 0.187 0.0195 97.5
3 0.1 0.216 0.100 100.1
4 0.2 0.250 0.194 97.6
5 0.6 0.398 0.068 101.3
2.5　样品中黄酮的测定　取样品液两份 ,一份作为样品待测液 ,另一份作为参比液 ,按标准曲线项下
的操作方法 ,在 510nm 处测定吸光度 ,用回归方程求得含量 ,总黄酮含量为 6.81%.
3　小结
本文利用正交实验对矮丛风毛菊中总黄酮进行了提取 ,确定了最佳的提取条件 ,并对总黄酮进行了
测定.为进一步研究矮丛风毛菊中总黄酮提供了理论依据.该法具有线性范围宽 、灵敏度高 、操作简单 、
结果准确等优点.
参考文献:
[ 1] 　中国科学院高原生物研究所.藏药志[ M] .西宁:青海人民出版社.1996 , 258.
[ 2] 　罗达尚.中华藏本草[M] .北京:民族出版社.1997, 124.
[ 3] 　魏永生 ,王永宁 ,石玉平 ,等.分光光度法测定黄酮含量的实验条件研究[ J] .青海大学学报(自然科学版), 2003, 21(3):61-63.
Determination of the total flavonoid from saussurea eopygmaea
hand -mazz by Spectrophotomertry
ZAN J ian-hua
(Qinghai Occupation Technique College , Xining 810003 ,China)
Abstract:Object To determine the content of flavonoids from.saussurea eopygmaea hand-mazz.Methods
The optimal condition was determined by the orthogonal experiment , the content of flavonoids was measured by spec-
trohotometry.Results The flavonoids contained in the saussurea eopygmaea hand-mazz is about 6.81%.Conclusion
The method is easy operation and its result is very accurate.
Key words:Spectrophotometry;saussurea eopygmaea hand-mazz;flavonoids;extraction;content determi-
nation
62　　　　　　　　　　　　　　青海师范大学学报(自然科学版)　　　　　　　　　　2007年