全 文 ：紫外可见分光光度法测定抱茎
苦荬菜中总黄酮的含量
刘文辉 ,崔鸿江 ,王静峰
(内蒙古医学院第二附属医院药剂科 ,内蒙古 呼和浩特　010030)
[摘要] 目的:建立测定抱茎苦荬菜中总黄酮含量的测定方法。方法:采用紫外可见分光光度法测定 ,检
测波长为 510 nm 。结果:样品中总黄酮在浓度 10.05 ～ 50.25μg/ml范围内呈良好线性关系。回归方程 Y=
0.0125 X+0.0088 , R2=0.9993 。线性关系良好 ,加样回收率为 99.91%, RSD 为 0.58%。结论:该方法简
便 、灵敏 、准确 ,可用于抱茎苦荬菜中总黄酮的含量测定 。
[关键词] 抱茎苦荬菜;总黄酮;紫外可见分光光度法
　　[ 中图分类号] R734.2　[ 文献标识码] A　[ 论文编号] 1004-0951(2010)09-1042-03
　　抱茎苦荬菜(Ixeris sonchifolia Bge.Hance)为菊
科苦荬菜属植物 ,别名苦碟子 、满天星等 ,我国各地
均有分布 ,盛产于东北 、华北等地。《内蒙古中草药》
记载 ,抱茎苦荬菜味苦 、辛 ,具清热解毒 、排毒 、止痛
之功效[ 1] 。可用于治疗无名肿痛 、乳痈疖肿 、阑尾
炎 、肝炎等各种炎症以及肺热咳嗽 、肺结核等[ 2] ,其
化学成分以黄酮类物质含量最高[ 3] , 因此 ,本文对
其总黄酮进行含量测定研究。
1　仪器与试药
1.1　仪器
Centra-10e 紫外-可见分光光度计(澳大利
亚)。LP123 电子天平(常熟市恒器厂)KQ -500
DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公
司)。
1.2　试　药
乙醇 、石油醚 、硝酸铝 、亚硝酸钠 、氢氧化钠 、三
氯化铝等 ,均为国产分析纯;芦丁对照品(中国药品
生物制品检定所提供 ,批号:10080-200306);抱茎
苦荬菜(采于内蒙古自治区赤峰市)。
2　方　法
2.1　溶液的制备
对照品溶液的制备。称取经五氧化二磷减压干
燥至恒重的芦丁对照品 10 mg ,精密称定 ,用适量的
70%乙醇溶解 ,制成每 1 ml 中含无水芦丁 100 μg
的溶液摇匀即得。
供试品溶液的制备 。精密称取抱茎苦荬菜粉末
1.0 g ,加石油醚 100 ml回流提取 1 h ,放冷 ,弃去石
油醚液 ,将药渣中石油醚挥干 ,药渣加 70%乙醇 40
ml超声提取 2 次 ,每次 30 min ,合并滤液 ,定容于
100 ml的容量瓶中备用[ 4 , 5] 。
2.2　线性关系的考察和标准曲线的制备
精密吸取 1.0 、2.0 、3.0 、4.0 、5.0 ml对照品溶
液于 10 ml量瓶中制成一系列标准溶液 。分别加
5%亚硝酸钠 0.4 ml摇匀 ,静置6 min ,再加 5%硝酸
铝 0.4 m l摇匀 ,静置 6 min ,再加 5%氢氧化钠试液
4.0 ml ,用 70%乙醇稀释至刻度摇匀 ,静置 15 min
后 ,以提取液作为参比溶液 ,照紫外-可见分光光度
法(中国药典 2005年版一部附录 VA),在 510 nm
波长处测定吸收度 。以吸收度对溶液浓度进行回归
分析 ,结果浓度在 10.05 ～ 50.25 μg/ml范围内呈良
好线性关系。回归方程 Y=0.0125 X+0.0088 , R2
=0.9993。结果见附图和表 1 。
表 1　总黄酮测定的标准曲线数据
实验
序号
对照品浓度
(μg/ml)
测得吸收
度值 回归方程 相关系数
1 10.05 0.1289
2 20.10 0.2663
3 30.15 0.3869 Y=0.0125X+0.0088 0.9993
4 40.20 0.5163
5 50.25 0.6331
1042 内蒙古医学杂志 Inner Mongolia Med J 2010年第 42卷第 9期
DOI :10.16096/j.cnki.nmgyxzz.2010.09.004
　附图　总黄酮测定的标准曲线
　图版编号:1004-0951-(2010)09-1043-F1
2.3　测定法
精密量取供试品溶液 1 ml ,置 10 ml量瓶中 ,分
别加 5%亚硝酸钠 0.4 m l摇匀 ,静置 6 min ,再加
5%硝酸铝 0.4 ml摇匀 ,静置6 min ,再加 5%氢氧化
钠试液 4.0 ml ,用 70%乙醇稀释至刻度摇匀 ,静置
15 min 后 ,以提取液作为参比溶液 ,照紫外-可见
分光光度法(中国药典 2005年版一部附录 VA),在
510 nm 波长处测定吸收度。从标准曲线上读出供
试品溶液中芦丁的浓度(μg/ml)计算即得 。
2.4　精密度试验
取同一供试品溶液 ,在 510 nm 处重复测定吸
收度 ,结果见表 2 。
表 2　精密度试验结果
试验序号 吸收度值 平均吸收度 RSD(%)
1 0.4645
2 0.4648
3 0.4639 0.4645 0.1442
4 0.4633
5 0.4637
6 0.4650
2.5　稳定性考察
取同一供试品按测定法操作 ,分别于 0 、5 、10 、
15 、20 、25 、30 、40 、50 min测定 ,结果见表 3。
表 3　不同时间测定样品中总黄酮的吸收度值
试验序号 时间(min) 吸收度值
1 0 0.4644
2 5 0.4651
3 10 0.4642
4 15 0.4647
5 20 0.4639
6 25 0.4641
7 30 0.4644
8 40 0.4421
9 50 0.4212
从表中数据可见 ,黄酮类化合物显色后 ,稳定时
间比较短 ,在 30 min之内测定时 ,测定结果的稳定
性好。
2.6　重复性试验
取同份供试品 5份 ,每份取样量约 1 g ,精密称
定 ,分别按测定法项下操作测定每份的含量 ,结果见
表 4。
表 4　重复性试验结果
试验序号 称样量(g) 含量(%) 均含量(%) RSD(%)
1 0.9878 3.646
2 0.9926 3.621
3 1.0031 3.652 3.640 0.3243
4 1.0211 3.644
5 1.0114 3.639
2.7　加样回收实验
取已知含量的供试品 1 g , 5 份 ,按供试品溶液
制备项下方法操作 , 制备供试品溶液 , 精密吸取
0.5 ml ,置 10 ml量瓶中 ,精密加入经 P 2O5 减压干
燥至恒重的芦丁对照品适量 ,照测定法项下的方法 ,
依法测定吸收度 ,从标准曲线上读出供试品溶液中
芦丁的浓度(μg/ml),计算回收率 ,结果见表 5 。
表 5　回收率测定结果
试验
序号
供试品
(g)
供试品溶液
(ml)
样品含有量
(mg)
对照品加入量
(mg)
测定总量
(mg)
回收率
(%)
均回收率
(%)
RSD
(%)
1 1.0641 0.5 0.1937 0.1820 0.3657 100.5
2 1.0021 0.5 0.1824 0.1820 0.3647 100.2
3 0.9624 0.5 0.1752 0.1820 0.3646 100.1 99.91 0.5754
4 0.9910 0.5 0.1804 0.1820 0.3637 99.00
5 1.0129 0.5 0.1843 0.1820 0.3631 99.75
1043内蒙古医学杂志 Inner Mongolia Med J 2010年第 42卷第 9期
　　实验结果表明 ,方法的准确度好。
2.8　样品含量测定
取不同批号的供试品 ,按测定法项下的方法操
作并测定 。供试品的测定结果见表 6 。
表 6　不同批号供试品的测定结果
批号 称样量(g) 含量(%) 均含量(%)
1 1.0031 3.682 3.672
1.0058 3.662
2 1.1156 3.542 3.540
1.1168 3.537
3 1.1058 3.558 3.568
1.1069 3.579
由表中数据可见 ,抱茎苦荬菜总黄酮含量在
3.5%以上 ,可知本品含黄酮以芦丁(C6H12O6)计 ,为
3.0%。
3　结　果
3.1　测定波长的选择
抱茎苦荬菜含有黄酮类成分 ,用芦丁为对照 ,用
铝离子显色 ,采用分光光度法进行比色测定。分别
取芦丁标准溶液和抱茎苦荬菜供试品溶液显色 ,以
相应的试剂为空白 ,在 200 ～ 700 nm 波长范围进行
光谱扫描。从光谱图中可见 ,两种溶液的吸收光谱
图一致 ,在波长 510 nm 处具有最大吸收 ,故选择
519 nm 波长作为测定波长 。
3.2　提取方法的选择
3.2.1　索氏提取法
精密称取抱茎苦荬菜粉末 1.0 g ,加 100 ml石
油醚于索氏提取器中提取至石油醚无色放冷 ,弃去
石油醚液 ,将药渣中石油醚挥干 ,后加入 70%乙醇
80 m l提取至提取液无色 、滤过 ,定容于 100 ml容量
瓶中[ 4] 。
3.2.2　回流提取法
精密称取抱茎苦荬菜粉末 1.0 g ,加石油醚 100
ml回流 1 h ,放冷 ,弃去石油醚液 ,将药渣中石油醚
挥干 ,后加入70%乙醇40 ml提取1 h ,滤过 ,残渣再
加入 70%乙醇 40 ml提取 1 h ,滤过 ,合并滤液 ,定容
于 100 ml的容量瓶中[ 4] 。
3.2.3　超声提取法
精密称取抱茎苦荬菜粉末 1.0 g ,加石油醚 100
ml回流 l h ,放冷 ,弃去石油醚液 ,将药渣中石油醚
挥干 ,后加入 70%乙醇 40 ml ,超声提取 30 min ,滤
过 ,残渣再加入70%乙醇40 ml超声提取30 min ,滤
过 ,合并滤液 ,定容于 100 ml的容量瓶中[ 5] 。
各取上述提取液 2 m l ,经显色后测定 。三种提
取方法中 ,超声方法总黄酮含量明显高于索氏和回
流 ,并且超声法的提取速度快 ,效率高 ,而且不用加
热 ,避免高温对黄酮结构的影响 ,故采用超声提取
法 。
4　讨　论
抱茎苦荬菜中总黄酮的含量测定 ,不仅对药品
具有鉴别意义 ,也可反映药品的质量优劣 ,是评价药
品质量的主要指标之一 。本文对抱茎苦荬菜中的总
黄酮含量进行了测定研究。经各项实验研究后 ,本
文认为 ,以超声提取法作为样品前处理 ,在波长 510
nm处采用紫外可见分光光度法测定 ,样品中总黄
酮在浓度 10.05 ～ 50.25 μg/ml范围内呈良好线性
关系 。回归方程 Y =0.0125X +0.0088 , R2 =
0.9993 。线性关系良好 , 加样回收率为 99.91%,
RSD为 0.58%。上述方法简便 、灵敏 、准确 ,可用于
抱茎苦荬菜中总黄酮的含量测定 。
[参 考 文 献]
[ 1] 　江苏新医学院编.中药大辞典(上册)[ M] .上海:上海科学技术
出版社 , 1986:1300.
[ 2] 　《全国中草药汇编》编写组编.全国中草药汇编[ M] .第 2版.北
京:人民卫生出版社 , 1996:532.
[ 3] 　戴锦娜 ,尹然 ,陈晓辉 ,等.苦碟子化学成分和药理作用研究进
展[ J] .西北药学杂志 , 2006 , 21(4):94-96.
[ 4] 　王建安 ,李艳芝 ,吴国荣 ,等.超声波提取抱茎苦荬菜总黄酮工
艺的研究[ J] .南京师大学报(自然科学版), 2009 , 32(1):120-
123.
[ 5] 　周桂芬 ,张涵 ,吕圭源.苦苣菜中黄酮类化合物的含量测定[ J] .
中华中医药学刊 ,2008 ,(26)1:218-220.
[ 收稿日期] 2010-06-19
[作者简介] 刘文辉(1970-), 男 , 河北省唐县人。主管药
师。
继续医学教育思考题
(正文见 1072页)
　　　　　　　　　　　　1.简述 VEGF 的生物学功能 ?
　　　　　　　　　　　　2.VEGF 对其受体的作用与调控是什么 ?
　　　　　　　　　　　　3.简述 VEGF 对肿瘤血管的作用及其机制 ?
　　　　　　　　　　　　4.简述 VEGF 对肿瘤淋巴管的作用及其机制?
　　　　　　　　　　　　5.VEGF 在肿瘤治疗中的应用有哪些?
1044 内蒙古医学杂志 Inner Mongolia Med J 2010年第 42卷第 9期