全 文 ：— 60 — 现代中药研究与实践2009年第22卷第6期Research and Practice of Chinese Medicines
2.6 线性关系考察 分别精密吸取盐酸水苏碱对
照品溶液 ,4、6、8、10、12、14 μL, 点于同一硅
胶 G 板上 , 进行展开。晾干，显色，以扫描峰面积
值为纵坐标 , 点样量为横坐标 , 绘制标准曲线 , 盐
酸水苏碱点样量在 4.03~14.11 μg 范围内峰面积值
呈良好的线性关系 , 经线性回归得出回归方程为 :
Y=612.45X-1 094.8(r=0.999 3)。
2.7 稳定性实验 精密吸取盐酸水苏碱对照品溶液
点于硅胶G板上 ,展开 ,晾干 ,显色。分别于 0、0.5、1、
2 h 扫描测定峰面积值 , RSD=0.53%, 表明水苏碱斑点
显色后在 2 h 内基本稳定。
2.8 精密度实验 精密吸取盐酸水苏碱对照品溶液
10 μL, 点于硅胶 G 板上 , 展开、晾干。显色重复 5 次 ,
其 RSD=0.67%, 表明仪器精密度良好。
2.9 重复性实验 取同一批样品 ( 批号 :20070810)5
份 , 按供试品溶液的制备方法制备 5 份溶液 , 分别点
于不同的 5 块硅胶 G 薄层板上 , 按测定方法测定其结
果 , 5 份样品峰面积的 RSD=3.7%, 表明本方法重复性
良好。
2.10 加样回收率 取同一批样品 ( 批号 :20070810)5
份 , 各取 3.200 1 g. 精密称定 , 分别加入盐酸水苏碱
对照品 0.510 10 mg, 精密称定 , 按供试品溶液的制备
方法制备 , 按上述方法测定 , 平均回收率为 99.3%，
RSD=3.05%(n=5)。
2.11 样品含量的测定 取 6 批样品 , 按上述含量测
定方法测定 , 结果见表 1。
3 讨论
3.1 样品中多种组分干扰 , 斑点得不到较好的分离，
经过对样品反复试验，离心去除了多种杂质 ,再通过
强酸性阳离子树脂交换柱 , 氨水洗脱 , 供试品得到很
好的分离、提纯，进行薄层分析效果满意。
3.2 薄层条件 一般以展开距离在 12 cm, 试验温度
15~20 ℃ , 湿度 60%~80%。
3.3 供试品经过展开 ,取出晾干。加热后显色 , 温度
需控制在 105 ℃ , 加热时间 10 min。
表 1 样品含量测定结果
Tab.1 Results of content determined in samples
批号
含量(mg/袋)
RSD(%)
071102
3.74
071206
4.03
071210
3.75
080514
3.86
080520
3.79
080802
4.10
0.07
HPLC 法测定苦苣菜中槲皮素和木犀草素的含量
权洪峰，付雪艳 *，董 琳，张义伟
（宁夏医科大学，宁夏 银川，750004）
摘要：目的 为建立苦苣菜的质量标准提供实验依据。方法 采用Thermo ODS-2 Hypersil 色谱柱
（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相以甲醇－0.3%冰乙酸水溶液梯度洗脱，流速为1 mL/min,检测波长为
366 nm。结果 槲皮素与木犀草素的线性范围分别为0.092~0.46 μg（r=0.999 8）、0.308~1.54 μg（r=0.999
9）；加样回收率分别为98.3%和97.78%；相对标准偏差(RSD%)低于2%(n=6)。结论 本测定方法可为苦苣
菜的质量评价提供可靠依据。
关键词：苦苣菜；槲皮素；木犀草素
中图分类号：R927.2 文献标识码：A 文章编号：1673-6427(2009)07-0060-03
收稿日期：2009-04-01
作者简介：权洪峰（1981－），男，助理实验师，主要从事中药制剂分析及中药GAP规范化种植研究。
*通讯作者：付雪艳，女，博士，Tel:13469502661，E-mail:fuxueyan1215@yahoo.com.cn
Content Determination of Quercetin and Luteolin in Sonchus oleraceus by HPLC
QUAN Hong-feng, FU Xue-yan, DONG Lin, ZHANGYi-wei
(Ningxia Medical University, Yinchuan, 750004, China)
Abstract: Objective To provide experimental evidence for building up the quality standard of Sonchus
oleraceus. Methods Under the chromatography condition that HPLC colum was Thermo ODS-2 Hypersil （4.6
mm×250 mm，5 μm）with methanol-0.3% acetic acid in water with a gradient elution as the mobile phase,
detection wavelength was 254 nm,the fl ow rate was 1.0 mL/min. Results The linear range of quercetin and
DOI:10.13728/j.1673-6427.2009.06.022
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苦苣菜 Sonchus oleraceus L. 的全草具有清热解
毒、凉血止血的作用，主要用于治疗肠炎、急性黄疸
肝炎、阑尾炎、扁桃体炎、吐血、便血、崩漏等症，
还外用于痈疮肿毒、中耳炎等的治疗。因其含有蛋白
质、多种氨基酸、维生素以及丰富的微量元素，是一
种营养价值极高的野生蔬菜。近年来，国内外学者对
苦苣菜属化学及活性的研究有一定的进展，分离的
化合物主要有萜类、黄酮类及其它类型的天然产物，
但苦苣菜中有效成分的含量测定未见报道。本实验首
次通过 HPLC 法对宁夏苦苣菜中槲皮素及木犀草素
进行了含量测定，为制定苦苣菜的质量标准及开发新
药提供依据。
1 仪器与试剂
岛津LC-20AT高效液相色谱仪，LC solution工作
站，SPD-20AV UV-VIS检测器。槲皮素、木犀草素
对照品（批号111520-200201，购自中国药品生物制
品检定所）；甲醇、乙腈为色谱纯，（美国Sigma公
司）；水为重蒸馏水；其余试剂均为分析纯。苦苣
菜采自宁夏固原市，经宁夏固原市药检所鉴定为菊
科苦苣菜Sonchus oleraceus L.全草。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：Thermo ODS-2 Hypersil 色
谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：甲醇－
0.3%冰乙酸水溶液（v/v）；梯度洗脱 0~25~50 min
： 甲醇30%→40%→55%；0.3%冰乙酸水溶液 70%→
60%→45%；流速：1 mL/min；柱温：40 ℃；检测波
长为366 nm；灵敏度：0.100 0AUFS。
2.2 供试品溶液的制备 苦苣菜以 10 倍量 60% 乙
醇提取 2 次，每次 1 h，合并提取液，过滤，将滤液
浓缩至 10 mL，按照柱色谱法（《中国药典》2005 年
版一部附录Ⅵ C），置 AB-8 大孔吸附树脂（内径填
充高度 15 cm）上，以 1.5 mL/min 的流速，先用 300
mL 水洗涤，弃去水洗脱液；继用 30% 乙醇洗脱，洗
至无色，弃去；最后用 60% 乙醇洗脱，收集洗脱液，
蒸干，残渣以甲醇溶解至 10 mL 量瓶中，加甲醇稀
释至刻度，摇匀，即得。
2.3 对照品溶液的制备 精密称取槲皮素对照品 9.2
mg、木犀草素对照品 7.7 mg，分别置 50 mL 量瓶中，
加甲醇至刻度，摇匀。精密量取上述槲皮素对照品溶
液、木犀草素对照品溶液各 5 mL，置 10 mL 容量瓶
中，配成混合对照品溶液（混合对照品溶液中，每 1
mL 甲醇含槲皮素 0.092 mg、木犀草素 0.077 mg）。
3 方法学考察
3.1 线性关系考察 精密吸取槲皮素对照品溶液
（0.184 mg/mL） 各 0.5，1，1.5，2，2.5 mL 于 10
mL 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，进样 10
μL，以进样量（μg）对峰面积进行线性回归，回归
方程为 A=985 520C-3 582.8，r=0.999 8。结果表明槲
皮素在 0.092~0.46 μg 间呈良好线性关系。
精密吸取木犀草素对照品溶液（0.154 mg/mL）
各 1，2，3，4，5mL 于 10 mL 量瓶中，加甲醇稀释至
刻度，摇匀，进样 20 μL，以进样量（μg）对峰面积
进行线性回归，回归方程为 A=1 707 887.987C-28 611，
r=0.999 9。结果表明木犀草素在 0.308~1.54 μg 间呈良
好线性关系。
3.2 精密度试验 精密吸取对照品溶液 10 μL，重复
进样 6 次，结果表明该方法精密度良好。结果见表 1。

3.3 重现性试验 取苦苣菜提取液 5 份，按供试品
溶液的制备方法制成供试液，进样 15 μL，测定样品
中槲皮素及木犀草素的含量，结果表明该方法重现性
较好，结果见表 2。
3.4 稳定性试验 苦苣菜提取液按供试品溶液的制
表 1 精密度试验结果
Tab.1 Result of precision test
实验次数
1
2
3
4
5
6
峰面积
1020643
1016649
1044763
1010332
1042443
1027258
槲皮素
平均值
1027014.7
RSD%
1.40%
峰面积
1269200
1288335
1294339
1243521
1286002
1292376
木犀草素
平均值
1278962
RSD%
1.50%
表 2 重现性试验结果
Tab.2 Result of replicate test
样品号
1
2
3
4
5
峰面积
177323
177275
176641
176009
176645
槲皮素
含量（mg/g）
0.0245
0.0245
0.0244
0.0243
0.0244
RSD%

0.5%
峰面积
2370341
2351634
2341591
2370668
2350918
木犀草素
含量（mg/g）
0.1873
0.1858
0.185
0.1873
0.1858
RSD%
0.9%
luteolin was 0.092~0.46 μg (r = 0.999 8), 0.308~1.54 μg（r=0.999 9）. The average recoveries were 98.3%
and 97.78%, and RSD (n=6) was less than 2%.Conclusion The method could be used for quality evaluation of
Sonchus oleraceus.
Key words: Sonchus oleraceus; quercetin; luteolin
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备方法制成供试液，在室温放置 0、2、4、6、8、12 h，
分别测其槲皮素及木犀草素的峰面积，结果 RSD 分
别为 1.0% 和0.4%，表明供试品溶液在 12 h 内稳定。
结果见表 3。

3.5 加样回收率试验 取已知含量的苦苣菜提取液
6 份，每份分别加入一定量槲皮素及木犀草素对照品
溶液，按供试品溶液的制备方法进行含量测定，计算
回收率，结果表明该方法加样回收率良好。结果见表
4、5。
回收率＝ 测得目标物的含量－样品中目标物的含量×100%
添加目标物对照品的量
表 4 槲皮素回收率试验
Tab.4 Result of recovery test from quercetin
样品中槲皮素含
量（mg）
0.0239
0.0241
0.0238
0.0243
0.0242
0.0240
加标量
（mg）
0.0184
0.0184
0.0230
0.0230
0.0368
0.0368
测得量
（mg）
0.0423
0.0423
0.0466
0.0455
0.0605
0.0593
回收率
（%）
99.84
98.76
99.02
97.89
98.56
95.93
平均回收
率（%）
98.3
RSD%
1.4
表 5 木犀草素回收率试验
Tab. 5 Result of recovery test from luteolin
样品木犀草素含
量（mg）
0.1852
0.1851
0.1849
0.1853
0.1851
0.1856
加标量
（mg）
0.148
0.148
0.185
0.185
0.224
0.224
测得量
（mg）
0.3309
0.3306
0.3649
0.3665
0.4043
0.4025
回收率
（%）
98.43
98.29
97.32
97.94
97.86
96.81
平均回收
率（%）
97.78
RSD%
0.6
图 1 槲皮素、木犀草素对照品色谱图（等度洗脱）
Fig.1 HPLC Chromatogram of quercetin and luteolin reference substance
(equivalent elution)
图 2 槲皮素、木犀草素对照品 (A) 及苦苣菜样品 (B) 色谱图（梯度洗脱）
Fig.2 HPLC Chromatogram of quercetin and luteolin reference substance
and Sonchus oleraceus sample (gradient elution)
1、4. 槲皮素 (quercetin) ；2、5. 木犀草素 (luteolin)
3.6 样品含量测定 分别称取苦苣菜药材 6 份，按
照上述色谱条件进行测定，由线性方程求得相应的含
量，苦苣菜药材中槲皮素与木犀草素的含量分别为
0.024 2 mg/g 和 0.185 4 mg/g。
4 讨论
4.1 黄酮类成分在测定中易出现拖尾现象 , 在流动相
中可加入冰醋酸 , 抑制其拖尾 , 提高其峰形对称性。
通过考察流动相的种类、流动相的比例以及等度（如
图 1 所示）和梯度对样品分离度的影响，结果表明，
乙腈 - 水系统比甲醇 - 水系统分离效果好，但乙腈比
例过高 , 分离效果下降；冰醋酸的比例在 0.3%~0.5%
之间 , 都能保证样品的分离 , 分离效果差别不大 , 基
于对色谱柱的保护，选用 0.3% 冰醋酸；经比较，流
动相为甲醇 -0.3% 冰乙酸水溶液梯度洗脱时，槲皮
素及木犀草素的分离度较高，能达到基线分离，且二
者峰形较好（如图 2 所示）。
4.2 对供试样品处理时，分别比较了以有机溶剂乙
醚萃取和大孔吸附树脂等不同处理方法对试验结果
的影响，结果发现，使用乙醚萃取后的样品槲皮素和
木犀草素的含量较低，故采用大孔吸附树脂进行样品
处理，不但可以真实反应槲皮素和木犀草素的含量，
且可以有效消除其他峰的干扰。
表 3 稳定性实验
Tab. 3 Result of stability test
放置时间(h)
0
2
4
6
8
12
峰面积
179427
176645
176028
174097
174591
175700
槲皮素
含量（mg/g）
0.0247
0.0244
0.0243
0.024
0.0241
0.0242
RSD%
1.0%
峰面积
2357005
2350918
2335067
2349737
2341355
2334035
木犀草素
含量（mg/g）
0.1862
0.1858
0.1845
0.1857
0.185
0.1844
RSD%
0.4%