全 文 ：千里光体外抗病毒作用研究
何忠梅1，宋 宇2* ，李庆杰3 (1．吉林农业大学中药材学院，吉林长春 130116;2．吉林大学畜牧兽医学院，吉林长春 130062;3．吉林天
药药物研发有限公司，吉林长春 130012)
摘要 ［目的］研究千里光水煎剂的体外抗病毒作用。［方法］采用细胞体外病变效应(CPE)法检测千里光水煎剂在人宫颈癌 HeLa细
胞中对人流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、柯萨奇病毒 B3、腺病毒 3型和单纯疱疹病毒 I型的抑制作用。［结果］千里光水煎剂
在体外有较好的抑制副流感病毒和呼吸道合胞病毒致细胞病变作用，对人流感病毒、柯萨奇病毒 B3、腺病毒 3型和单纯疱疹病毒 I型没
有抑制作用。［结论］千里光水煎剂在体外具有抗副流感病毒和呼吸道合胞病毒的作用。
关键词 千里光;体外;抗病毒
中图分类号 Q946 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611(2011)32 －19793 －02
Research on Antiviral Activity of Senecio scandens Buch-Ham in vitro
HE Zhong-mei et al (College of Chinese Medicine Materials，Jilin Agricultural University，Changchun，Jilin 130116)
Abstract ［Objective］The aim was to study antiviral effect of S． scandens decoction in vitro． ［Method］The inhibitive effect of S． scandens
decoction on human influenza virus，parainfluenza virus，respiratory syncytial virus，coxsackie virus B3，Adeno virus-3 and herpes simplex virus
I in HeLa cells was measured by cytopathic effect(CPE)． ［Result］The results showed that S． scandens decoction had obvious inhibitive effect
on parainfluenza virus and respiratory syncytial virus，had no inhibition to human influenza virus，coxsackie virus B3，Adeno virus-3 and herpes
simplex virus I． ［Conclusion］ S． scandens decoction had obvious inhibitive effect on parainfluenza virus and respiratory syncytial virus in
vitro．
Key words Senecio scandens Buch-Ham．;in vitro;Antivirus
基金项目 吉林省教育厅“十一五”资助项目(2009 第 63 号)。
作者简介 何忠梅(1978 － ) ，女，吉林长春人，讲师，博士，从事中药药
理作用研究。* 通讯作者，副教授，博士，硕士生导师，E-
mail:446719807@ qq． com。
收稿日期 2011-08-05
千里光为菊科千里光属植物 Senecio scandens Buch-Ham．
的干燥地上部分，全国大部分地区均有分布，是我国应用历
史悠久的常用中药。该药味苦、辛，性寒，具有清热解毒，明
目退翳，杀虫止痒等功效，主治上呼吸道感染、肺炎、急性扁
桃腺炎、腮腺炎、急性肠炎、黄疸型肝炎、胆囊炎、急性尿路感
染、滴虫性阴道炎及烧烫伤等［1］。现代药理学研究表明，千
里光具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗肿瘤和保肝［2 －8］等作用。虽
然已有报道千里光总黄酮的抗病毒作用［7］，而有关千里光水
煎剂抗病毒作用及抗病毒种类的报道较少，因此，笔者将采
用细胞体外病变效应(CPE)法检测千里光水煎剂在人宫颈
癌 HeLa细胞中对人流感病毒 FM1、副流感病毒、呼吸道合胞
病毒 RSV、柯萨奇病毒 CVB3、腺病毒 3型 AdV-3和单纯疱疹
病毒 I型 HSV-1SM44株的抑制作用，旨在探讨千里光抗感染
性疾病的作用机理。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 药材。千里光样品，2008 年 6 月采于吉林省通化县
海拔 800 m的山坡，经吉林农业大学胡全德教授鉴定为千里
光(Senecio scandens Buch-Ham．)的全草。阳性对照药物病毒
唑注射液购自安徽联谊制药厂，批号为 20100608。
1． 1． 2 细胞和病毒。人宫颈癌传代细胞 HeLa 和人流感病
毒 FM1、副流感病毒、呼吸道合胞病毒 RSV、柯萨奇病毒
CVB3、腺病毒 3型 AdV-3和单纯疱疹病毒 I型 HSV-1SM44株
等共 6种病毒均由中国预防医学科学院病毒研究所提供，分
装后于 －80 ℃保存。
1． 1． 3 试剂与仪器。RPMI － 1640 培养基、胎牛血清购自长
春生物制品研究所;胰蛋白酶为 Difco进口，长春宝泰克生物
科技公司分装;PBS购自北京鼑国生物技术公司;CO2 培养
箱购自德国 Hera公司;CK2TRC-3荧光倒置显微镜购自日本
OLYMPUS;DFL-560 型超净工作台购自上海博迅公司;
AG135型电子天平购自上海方瑞仪器有限公司;培养瓶和 96
孔培养板均为美国 GIBCOBRL产品。
1． 2 方法
1． 2． 1 药材预处理。取 1 000 g千里光药材，加入 10 L蒸馏
水煎煮 2 h，过滤，药渣加入 8 L蒸馏水继续煎煮 1 h，过滤，合
并滤液，浓缩至体积200 ml，使其含生药浓度5 g /m，4 ℃以下
保存。
1． 2． 2 细胞培养。将 HeLa 细胞接种于含 10%胎牛血清、
100 U /ml青、链霉素的 RPMI-1640培养液中，放于 37 ℃、5%
CO2 培养箱中培养，待细胞长满单层后用 0． 25%胰酶消化传
代培养。
1． 2． 3 病毒滴度测定［9］。将处于对数生长期的 HeLa 细胞
接种于 96孔培养板，37 ℃，浓度 5%CO2 培养 24 h，将不同病
毒株培养基原液分别作 10 倍梯度稀释，得到稀释度分别为
10 －1、10 －2、10 －3、10 －4、10 －5、10 －6的病毒溶液。常规方法感染
单层 HeLa细胞，每个稀释度设 4个平行复孔，同时设阴性对
照，37 ℃，浓度 5% CO2 培养，观察并记录每孔细胞病变情
况，用 karber法计算病毒滴度 TCID50 /ml。
1． 2． 4 千里光对细胞的毒性作用。用培养基将千里光水煎
剂和阳性对照药病毒唑作 2 倍系列稀释，分别加于 HeLa 单
层细胞上，每孔 0． 2 ml，每个剂量设 4个平行孔，于 37 ℃，浓
度 5%CO2 培养 3 d，每天镜下观察细胞病变程度(CPE) ，采
用 Reed － Muench［10］法计算半数毒性浓度(TC50)。以最大无
毒浓度为起始浓度，2 倍比稀释 6 个浓度，分别为 2． 000 0、
1． 000 0、0． 500 0、0． 250 0、0． 125 0、0． 062 5 mg /ml，进行抗病
毒试验。
1． 2． 5 千里光对病毒致细胞病变作用的影响［11］。在 HeLa
细胞上分别加入 50-100TCID50的病毒液，37 ℃吸附 1 h后洗
安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2011，39(32):19793 － 19794 责任编辑 周婷婷 责任校对 况玲玲
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2011.32.118
去病毒液，更换不同浓度的千里光水煎剂维持液和病毒唑溶
液，同时设病毒对照和细胞对照，置 37 ℃，浓度 5%CO2 培养
箱内培养，每天在倒置显微镜下观察病变，每 3 d更换 1次药
液，连续 7 d，记录各孔 CPE，计算千里光水煎剂抑制各病毒
的半数有效浓度(EC50)和治疗指数 TI(TI = TC50 /EC50)。
2 结果与分析
2． 1 病毒滴度 人流感病毒 FM1、副流感病毒、呼吸道合胞
病毒 RSV、柯萨奇病毒 CVB3、腺病毒 3型 AdV-3和单纯疱疹
病毒 I 型 HSV － 1SM44株的 TCID50分别为 10
－4、10 －4、10 －4、
10 －5、10 －5、10 －4． 8。因此，确定试验使各病毒浓度为 50 －
100TCID50 /ml。
2． 2 千里光对 HeLa细胞的毒性作用 根据试验数据，采
用 Reed － Muench法计算，千里光水煎剂对HeLa细胞的 TC50
为(9． 43 +0． 9)mg /ml，阳性对照药物病毒唑对 HeLa细胞的
TC50为(2． 54 +0． 23)mg /ml。
2． 3 千里光对 6 种病毒的作用 根据试验结果，计算千里
光水煎剂抑制每种病毒致 HeLa 细胞病变的半数有效浓度
EC50(表 1)。由表 1 可见，阳性对照药物病毒唑在体外对 6
种病毒均有不同程度的抑制作用，抑制 6种病毒的半数有效
浓度 EC50分别为(0． 228 ± 0． 012)、(0． 104 ± 0． 008)、(0． 186
±0． 011)、(0． 266 ± 0． 015)、(0． 307 ± 0． 014)和(0． 119 ±
0． 007)mg /mL，治疗指数 TI 分别为 11． 14 ± 0． 96、24． 42 ± 1．
47、13． 66 ±0． 98、35． 90 ±2． 61、8． 27 ± 0． 83 和 179． 36 ± 9． 86。
千里光水煎剂在体外对人流感病毒、柯萨奇病毒 B3、腺病毒
3型和单纯疱疹病毒 I型没有抑制作用，而对副流感病毒和
呼吸道合胞病毒致细胞病变具有明显的抑制作用，EC50分别
为(0． 481 ± 0． 023)和(0． 396 ± 0． 018)mg /ml，相应的治疗指
数 TI分别为 19． 60 ±1． 57、23． 81 ±1． 23。
表 1 千里光水煎剂抑制 6种病毒致 HeLa细胞病变的半数有效浓度(x ± s，n =4)
Table 1 EC50 of S． scandens decoction to restain HeLa cytopathic effect (x ± s，n =4)
组别
Groups
流感病毒
Influenza virus
副流感病毒
Parainfluen-
za virus
呼吸道合胞病毒
Respiratory syncy-
tial virus (RSV)
柯萨奇病毒
Coxsackie vi-
rus B3(CVB3)
腺病毒 3型
Adeno virus-3
(AdV-3)
单纯疱疹病毒 I型
Herpes simplex
virus I(HSV-1)
细胞对照组 Cell control group － － － － － －
病毒对照组 Virus control group － － － － － －
阳性对照组 Positive control group 0． 228 ±0． 012 0． 104 ±0． 008 0． 186 ±0． 011 0． 266 ±0． 015 0． 307 ±0． 014 0． 119 ±0． 007
千里光组 S． scandens decoction group － 0． 481 ±0． 023 0． 396 ±0． 018 － － －
3 结论与讨论
试验结果表明千里光水煎剂在体外有较好的抑制副流
感病毒和呼吸道合胞病毒致细胞病变作用，对人流感病毒、
柯萨奇病毒 B3、腺病毒 3型和单纯疱疹病毒 I型没有抑制作
用。由于副流感病毒、呼吸道合胞病毒和单纯疱疹病毒是导
致呼吸系统感染的常见病原体，千里光水煎剂的抑制作用说
明千里光的抗病毒作用可能是千里光治疗呼吸系统感染的
作用机制之一。该研究也为揭示千里光抗感染的作用机理
提供了一定的理论依据。
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692 －694．
本刊提示 参考文献只列主要的、公开发表的文献，序号按文中出现先后编排。著录格式(含标点)如下:(1)期刊———
作者(不超过 3 人者全部写出，超过者只写前 3 位，后加“等”)．文章题名［J］．期刊名，年份，卷(期) :起止页码．(2)图书———
编著者．书名［M］．版次(第一版不写)．出版地:出版者，出版年:起止页码．(3)论文集———析出文献作者．题名［C］/ / ．主编．
论文集名．出版地:出版者，出版年:起止页码。
49791 安徽农业科学 2011 年