全 文 ：Folin- Ciocaileu法测定鼠尾草多酚含量
冷雪娇1，章林2，邓绍林2，*，王卓1，裴玉琼1，许金国1，潘苏华1
（1.南京中医药大学药学院，江苏南京 210046；2.南京农业大学食品科技学院，江苏南京 210095）
摘 要：采用 Folin-Ciocaileu法，以没食子酸为标准品，测定鼠尾草多酚含量，用比色法测定其稳定性、精密度、重现
性和加样回收率。标准曲线的回归方程为：y =0.1525x＋0.018 1（R2=0.998）。本方法测得的鼠尾草中多酚含量为 3.86 %，
5组样品的平均回收率为 101.3 %。本方法测定鼠尾草多酚含量具有较高的稳定性（RSD=1.63 %）、重现性（RSD=
3.01 %）和精密度（RSD=1.02 %）。
关键词：鼠尾草；多酚；Folin-Ciocaileu法
Determination of Polyphenols in Flowers of Salvia Officinalis L. by Folin-Ciocaileu Method
LENG Xue-jiao1，ZHANG Lin2，DENG Shao-lin2,*，WANG Zhuo1，PEI Yu-qiong1，XU Jin-guo1，PAN Su-hua1
（1. Nanjing University of Chinese Medicine，Nanjing 210046，Jiangsu，China；2. College of Food Science and
Technology，Nanjing Agricultural University，Nanjing 210095，Jiangsu，China）
Abstract：Gallic acid as reference， the Folin-Ciocalteu method was established to determine the content of
polyphenols in sage. The stabilization， precision， repetition and recovery rate of this method were investigated.
The regression equation was： Y = 0.152 5X + 0.018 1 （R2 = 0.998）. This method measured the polyphenols
content in sage was 3.86 %， the average recovery rate of five groups of samples was 101.3 %. This method for
determining the content of polyphenols in sage possesses high stability （RSD=1.63 %）， repeatability （RSD=
3.01 %） and precision （RSD=1.02 %）.
Key words：sage； polyphenols； folin-ciocaileu method
食品研究与开发
Food Research And Development
2015年 7月
第 36卷第 13期
DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2015.13.025
基金项目：南京中医药大学青年自然科学基金（13XZR29）
作者简介：冷雪娇（1988—），女（汉），助理实验师，硕士，从事食品安
全与工艺研究工作。
*通信作者：邓绍林（1986—），男，实习研究员，硕士，主要从事畜产
品加工与质量控制研究。
鼠尾草（salvia officinalis L.）为唇形科、鼠尾草属植
物，其叶、茎和花均有很高的利用价值，被广泛的用作
医药、香料和食品行业的原料[1]。鼠尾草是著名的民间
常用草药，有活血化淤、通经止痛、清心除烦、治月经不
调、心绞痛、肝脾肿大等作用 [2]，还可以作为香辛料来
调味和保藏食物[3]。现代科学研究表明鼠尾草具有良
好的抗氧化作用，主要表现在自由基清除活力、螯合
过渡金属离子活性和单线态氧清除能力 [4]，鼠尾草的
抗氧化能力源于其所含有的抗氧化活性物质，如萜类
化合物、黄酮类化合物和酚酸，其中酚类化合物起主
要作用[5]，因此，有必要了解鼠尾草中的多酚含量及其
测定方法。目前，Folin-Ciocaileu比色法广泛的应用于
植物多酚的含量测定，此方法操作简便、精密度较高、
重现性好，并且所需仪器设备价格低廉。本试验选择
Folin-Ciocaileu比色法测定鼠尾草中的多酚含量，研
究此方法是否可应用于鼠尾草的多酚含量测定。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
鼠尾草粉：山东济南海乐西亚泽公司；没食子
酸（HPLC 级纯）：阿拉丁公司；石油醚、乙醇、钨酸
钠、钼酸钠、硫酸锂、无水碳酸钠、磷酸、溴等均为国
产分析纯。
1.2 仪器与设备
PS-10A超声波：洁康牌数码超声波清洗机；WFJ
2100可见分光光度计：尤尼柯（上海）仪器有限公司；
AUY120电子天平：日本 SHIMADZU公司；ZKSY-600恒
温水浴锅：南京科尔仪器设备有限公司；Milli-Q 超纯
水系统：Millipore公司。
检测分析
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表 1 鼠尾草中多酚含量
Table 1 Content of polyphenols in sage
样品号 吸光度 百分含量/%
1 0.311 3.94
2 0.325 4.02
3 0.305 3.76
4 0.302 3.72
1.3 方法
1.3.1 Folin-Ciocaileu试剂的配制[6]
称取 50 g钨酸钠和 12.5 g钼酸钠置入 1 L磨口圆
底烧瓶中，用 350 mL蒸馏水溶解，缓慢加入 85 %磷酸
25 mL，浓盐酸 50 mL，充分混匀，放入数粒玻璃珠，连
接回流冷凝装置，文火回流 10 h（回流不一定连续）。用
25 mL蒸馏水冲洗冷凝管上的附着物，拆开冷凝管后
加入 75 g无水硫酸锂和几滴溴水（边加边振摇），开口
继续加热沸腾 15 min，直至溴水完全挥发，终点颜色为
黄绿色。冷却后定容至 500 mL，过滤，储存于棕色瓶
中，放入冰箱保存备用，使用时稀释 1倍。
1.3.2 没食子酸标液的配制
精确称取 0.035 4 g没食子酸标准品，用烧杯溶解
后，定容至 250 mL，浓度为 140 μg/mL，使用时浓度稀
释 1倍。
1.3.3 标准曲线的建立[7]
精密吸取 0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL 70 μg/mL
没食子酸标准稀释液于 10 mL 量瓶内，加 1.0 mL
Folin-Ciocaileu试剂，再加入 10 %碳酸钠溶液 3 mL
（前后时间间隔不应超过 8 min），混匀，加水定容，再混
匀。然后室温下避光放置反应 2 h，在 765 nm处测吸光
度。以吸光度为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标，绘制
标准曲线。鼠尾草样品中的多酚含量以没食子酸标准
品计。
1.3.4 鼠尾草样品溶液的制备[8]
鼠尾草粉中按鼠尾草粉：石油醚为 1 ∶ 10（g/mL）
加入石油醚浸提 12 h脱脂，室温下干燥至恒重。准确
称取 1.0 g鼠尾草粉末，加入 60 %乙醇 20 mL，40 ℃，
超声提取 30 min 共 3次，合并提取液，过滤，定容至
100 mL，待测。
1.3.5 鼠尾草样品中多酚含量的测定
将鼠尾草样品液稀释 10倍，用样品空白作为对
照。移液管精确量取稀释液 0.5 mL置于 10 mL容量瓶
中，加 Folin-Ciocaileu 试剂 1.0 mL，再加入 10 %碳酸
钠溶液 3 mL，混匀，加水定容，继续摇匀，然后室温下
避光放置反应 2 h，在 765 nm波长处测吸光度，代入回
归方程，得多酚浓度（μg/mL）。
1.3.6 鼠尾草多酚测定方法评价
1.3.6.1 稳定性实验
取鼠尾草酚类提取样品液按上述处理及测定方
法，分别在样品液与显色剂反应 0.5、1、2、3、4 h后测吸
光度，以评价该比色分析方法在一定时间内的稳定性。
1.3.6.2 重现性实验
取鼠尾草样品 4份，依上述制备及分析方法，分
别测定其多酚含量，并计算测定结果的相对标准偏差
（Relative Standard Deviation，RSD），以评价该方法的重
现性。
1.3.6.3 精密度实验
用 Folin-Ciocaileu法测定同一鼠尾草提取样品液
5次，计算测定结果的 RSD，以评价该方法的精密度。
1.3.6.4 加样回收率实验
鼠尾草酚类样品液中加入不同量的没食子酸标
准贮备液，分别测定其多酚含量，并计算回收率和
RSD，以评价该方法的准确度和可靠性。取 0.4 mL稀
释 10倍的鼠尾草样品溶液于 10 mL具塞刻度试管中，
再加稀释 10倍的没食子酸标样 0、0.5、1、1.5、2 mL，加
1 mL福林试剂，再加 3 mL 10 %碳酸钠，定容至 10 mL，
摇匀，室温放置 2 h，测吸光度。
2 结果与分析
2.1 标准曲线的建立
由图 1可知，没食子酸在 0 μg/mL～5 μg/mL浓度
范围内与其吸光度值呈良好的线性关系，在此范围内
线性回归方程为 Y =0.152 5X＋0.018 1（R2=0.998）。
2.2 鼠尾草中多酚含量的测定
精密称取 1.0 g鼠尾草粉 4份，按照 1.3.4的方法
制备供试品溶液，按照 1.3.5的方法进行操作，设空白
管。为消除供试品溶液本身颜色的干扰，同时制备不
加显色剂的对照管，于 765 nm波长处测定吸光度。结
果见表。结果表明，本方法测得的鼠尾草中多酚含量
平均为 3.86 %，RSD=3.71 %。
图 1 没食子酸标准曲线
Fig.1 Gallic acid standard curve
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
吸
光
度
A
0 0.5 4.5
浓度/（μg/mL）
1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0
Y=0.152 5X＋0.018 1
R2=0.998
冷雪娇，等：Folin-Ciocaileu法测定鼠尾草多酚含量 检测分析
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2.3 Folin-Ciocaileu方法的稳定性、重现性和精密度
本试验验证了 Folin-Ciocaileu比色法测定鼠尾草
中酚类含量的稳定性、重现性和精密度，结果见表 2。
由表 2可见，该方法在体系反应完全后放置 4 h
内测定的吸光度值变化较小（RSD=1.63 %），表明方法
稳定性较好；重现性实验测得 5个不同鼠尾草样品中
多酚含量值较接近（RSD=3.01 %），表明该方法重现性
较好；精密度实验，同一样品 5次测定的多酚含量值相
差较小（RSD=1.02 %），表明该方法精密度较高，完全
能满足样品分析的要求。
2.4 加标回收率实验
按照 1.3.6的方法进行加样回收率的测定，结果
见表 3。
由表 3可见，5次加样回收实验的最低回收率为
99.6 %，最高回收率为 103.5 %，平均回收率为 101.3 %，
RSD = 1.61 %。表明此法有很高的准确性和可靠性。
3 结论
本试验以没食子酸为对照品，采用 Folin-Cio－
caileu比色法测定鼠尾草多酚含量，绘制标准曲线，多
酚浓度在 0 μg/mL~5 μg/mL范围内与吸光值呈现良好
的线性关系。本方法测得的鼠尾草中多酚含量平均为
3.86 %，RSD为 3.71 %。稳定性试验 RSD为 1.63 %，重
现性试验 RSD为 3.01 %，精密度试验 RSD为 1.02 %，
5组样品的平均回收率为 101.3 %，RSD为 1.61 %。本方
法操作简单、效率高、设备要求低、精密度高、稳定性和
重现性较好，可为鼠尾草多酚的检测提供了技术参考。
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收稿日期：2014-03-18
表 2 Folin-Ciocaileu方法的稳定性、重现性和精密度
Table 2 Stability，repeatability and precision of the Folin-
Ciocaileu method
稳定性（A765） 重现性/（g/100 g） 精密度/（g/100 g）
1 0.343 3.79 3.85
2 0.356 3.88 3.81
3 0.357 4.10 3.82
4 0.353 3.92 3.91
5 0.349 3.85 3.86
平均值 0.352 3.91 3.85
RSD/% 1.63 3.01 1.02
表 3 鼠尾草多酚含量测定加样回收率实验结果
Table 3 Recovery rate of polyphenols in sage
样品号 本底值/μg 没食子酸
加入量/μg
测定值/μg 回收率/%
1 15.44 0 15.44 100
2 15.44 7 22.68 101.1
3 15.44 14 30.47 103.5
4 15.44 21 37.31 102.4
5 15.44 28 43.27 99.6
冷雪娇，等：Folin-Ciocaileu法测定鼠尾草多酚含量检测分析
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