全 文 ：抱茎苦荬菜药材中总黄酮和腺苷的含量测定
孙仁爽
(吉林省通化师范学院 制药与食品科学系·吉林 通化· 134002)
姜启娟
(吉林省通化市药品检验所·吉林 通化· 134000)
摘 要:目的:建立测定抱茎苦荬菜药材中总黄酮和腺苷的方法。方法:采用 UV-VIS法测定总黄酮的
含量。采用 RP-HPLC法测定腺苷的含量 ,色谱条件为:XDB-C18(150 mm×4.6mm, 5μm)色谱柱 ,以
乙腈 -水 (体积比为 6∶94)为流动相 , 检测波长为 260nm, 流速为 1ml/min-1。结果:腺苷进样量在 0.
072-3.6μg范围内线性关系良好 (r=0.999),平均回收率为 100.3 %,相对标准差(RSD)为 1.35%。
结论:方法准确 、可靠 , 适合测定抱茎苦荬菜药材中总黄酮和腺苷的含量。
关键词:抱茎苦荬菜;总黄酮;腺苷;高效液相色谱法;含量测定
quantitativedeterminationoftotalflavonoidsandadenosine
intheIxerissonchifoliaHance
SUNRen-shuang
(DepartmentofPharmaceuticsandFoodScience, TonghuaNormalUniversity, Tonghua, Jilin134002)
JIANGQi-juan
(TonghuaInstituteforDrugControlTonghua, Jilin134000)
Abstract:ObjectiveTodevelopamethodforthedeterminationofthecontentofadenosineinIxerissonchifoliaHance.
MethodsThecontentoftotalflavonoidswasdeterminedbyusingUV-Vismethod.Thecontentofadenosine
wasdeterminedbyusingHPLCmethod.ItwasseperatedonaXDB-C18(150 mm×4.6mm, 5μm)column
withCAN-H2O(6:94)asthemobilephase, TheUVdetectivewa-velengthwassetat260nm, theflow
ratewas1ml/min.ResultsThelinearcalibrationcurvesareobtai-nedintherangesof0.072-3.6μg.The
averagerecoveryis100.3andRSDis1.35%.ConclusionsThemethodissimpleandaccurate, Itcanbe
appliedtothedeterminationofcontentofadenosineinIxerissonchifoliaHance.
Keyword:IxerissonchifoliaHance;totalflavonoids;adenosine;HPLC;contentdetermination
苦碟子是菊科植物抱茎苦荬菜 Ixerissonchifolia
Hance的当年生干燥全草 ,主要分布于东北 、内蒙古
等地方 ,野生资源丰富。是著名中药注射剂 “苦碟子
注射液 ”(原碟脉灵注射液)原药材。苦碟子的化学
成分复杂 ,主要含有黄酮 、核苷 、三萜 、倍半萜内酯 、香
豆素等成分 ,其中黄酮和腺苷为主要成分[ 1] 。研究表
明 ,苦碟子具有扩血管 、降血脂 、提高抗脑缺氧能力等
作用 ,是预防和治疗冠心病 、心肌梗死和脑血栓等中
老年疾病的重要中药。
1 实验材料 、仪器与试剂
1.1 实验材料
抱茎苦荬菜由通化华夏药业提供 ,经通化师范学
21人参研究 RENSHENYANJIU 2009年第 3期
院制药与食品科学系于俊林教授鉴定 。
1.2 试剂
乙酸乙酯 ,氯仿 , 10%硝酸铝溶液 , 1mol/L氢氧
化钠 , 5%亚硝酸钠溶液等为分析纯试剂;乙腈 ,甲醇
为色谱纯试剂;
芦丁对照品:中国药品生物制品检定所 ,供含量
测定用(1097-060918);
腺苷对照品:中国药品生物制品检定所 ,供含量
测定用(148-21);
1.3 仪器
KQ-2000KDB型超声波清洗器
昆山超声仪器有限公司
MPZ1001型电子天平
上海市实验仪器总厂
HPLC Agilent1100
C18柱
AgilentXDB-C18(150mm ×4.6mm, 5μm)
TU-1901紫外 -可见分光光度计 北京普析通用
2 实验方法与结果
2.1 总黄酮的含量测定
2.1.1 对照品溶液的制备
精密称取干燥至恒重的芦丁对照品 5.09mg,加
60%乙醇定容至 50mL,制成每 1mL含 0.1mg的溶
液 。
2.1.2 供试品溶液的制备
精密称取抱茎苦荬菜粉末约 5g,置于 150mL具
塞锥形瓶中 ,各加入 50%乙醇 125mL,加盖密封 ,放入
超声波清洗器中 ,第一次超声处理 1小时 ,过滤 ,滤渣
再加 50%乙醇 125mL超声处理 30分 ,过滤 ,合并两
次滤液 ,将滤液浓缩至 50mL放入分液漏斗中 ,各加
入氯仿 25mL,萃取 3次 ,弃去氯仿层 ,将滤液蒸干 ,向
蒸干后的残渣中加 60%乙醇溶解。将稀释后的溶液
置于 25mL容量瓶中 ,用 60%乙醇定容至刻度 ,作为
供试品溶液 。
2.1.3 标准曲线的绘制及方法学研究
精密量取芦丁对照品储备液 0.0, 1.0, 2.0, 3.0 ,
4.0, 5.0mL置 25mL容量瓶置 ,分别加蒸馏水至 6mL,
加入 5%亚硝酸钠 0.3mL,摇匀 ,放置 6min;加入 10%
硝酸铝 0.3mL,摇匀 ,放置 6 min;加入 4%氢氧化钠
4mL,加水至刻度 ,摇匀 ,放置 15 min,在 505nm处测
吸收值 ,以吸收值为纵坐标 、浓度为横坐标 ,绘制标准
曲线 ,回归方程:y=0.0305x-0.01, r=0.999。线
性范围为 4 ～ 20μg/mL。
取上述芦丁对照品溶液适量 ,重复测定 5次 ,测
得吸光度的 RSD小于 1.8%。取样品溶液分别于 0、
2、4、6、8、10h测定 ,吸光度的 RSD小于 1.2%。黄酮
的平均加样回收率为 99.2%, RSD为 1.9%(n=6)。
2.1.4 样品测定
精密吸取供试品溶液 5mL,分别置于 25mL容量
瓶中 ,照 “2.1.3”项下操作 ,在 505nm波长处测定吸
收度 。结果测得的总黄酮量为 1.412%。
2.2 腺苷的含量测定
2.2.1 供试品溶液的制备
精密称取抱茎苦荬菜粉末 1g,置 150mL具塞锥
形瓶中 ,加入 50%乙醇 50mL,加盖密封 ,进行超声处
理 ,第一次超声处理 1小时 ,过滤 ,滤渣再加 50%乙醇
50 mL超声处理 30分 ,再过滤 ,合并两次滤液 ,将滤
液放置 125mL分液漏斗中 ,加入氯仿 10mL,萃取 3
次 ,弃去氯仿层 ,将萃取液蒸干 ,向蒸干后的残渣中加
入 10%甲醇约 2 ～ 3mL,将稀释后的溶液置于 10mL
容量瓶中 ,用 10%甲醇定容至刻度 [ 2] 。
2.2.2 对照品溶液的制备
精密称取腺苷对照品 3.600mg,加入 10%甲醇定
容至 10mL。精密量取 1mL, 用 10%甲醇定容至
10mL,制成每 1mL含 0.036mg的溶液 。
2.2.3 色谱条件
填充剂:十八烷基键合硅胶;流动相:乙腈 -水
(6:94);检测波长:260nm[ 3] 。
2.2.4 方法学考察
2.2.4.1 线性关系的考察
精密吸取腺苷对照品溶液 2、4、6、8、10uL,依次
进样 ,记录峰面积 ,回归方程为 Y=169.9X-18.8, r
=0.9999 , 说明腺苷进样量与峰面积在 0.072 -
3.6μg范围内具有良好的线性关系 。腺苷 HPLC色
谱图见图 1。
2.2.4.2 精密度试验
取腺苷对照品溶液 10μL进样 ,重复进样 5次 ,记
录峰面积 ,计算峰面积的 RSD值为 1.5%,说明仪器
较精密。
2.2.4.3 稳定性试验
精密吸取同一份供试品溶液 ,分别于 0、3、6、9、12
h分别进样 10μL,记录峰面积 ,测得 RSD值为 1.6%,
22 孙仁爽等:抱茎苦荬菜药材中总黄酮和腺苷的含量测定
说明供试品在 12h内的稳定性较好。
2.2.4.4 回收率试验
取已知含量抱茎苦荬菜对照药材粉末约 10g,精
密称定 5份 ,每份加入对照品液 5mL,同供试品溶液
制备 方法操 作 , 测定 回收率 。平均回 收率为
100.34%, RSD值为 1.35%。
2.2.5 样品测定
按上述方法对抱茎苦荬菜供试品液进行测定 [ 4] ,
进样量为 10μL,色谱图见图 2,以外标法计算腺苷的
含量测定结果为 0.055mg/g。
3 讨论
3.1 流动相的选择
本实验选用了不同的流动相系统 , 结果乙腈 -
水峰形对称 ,出峰时间较快 ,腺苷的保留时间为 7.443
分;保留时间适宜 ,分离度大于 1.5 ,理论塔板数高于
6000,而有的资料用甲醇 -水作为流动相出峰时间将
近 20分 ,浪费时间和溶剂 ,因此 ,本实验用乙腈 -水
做为流动相。
3.2 提取方法的选择
通过资料和预实验 ,对超声波 、回流提取法进行
了比较 , 结果回流法和超声波法的提取率差别不大 ,
而超声法操作简便 , 快速 , 因此本实验采用超声波提
取法 。
参 考 文 献
[ 1] 封锡志.抱茎苦荬菜化学成分的研究 [ J] .中草药 , 2001, 36(2):97.
[ 2] 药典委员会.中华人民共和国药典一部 [ S] .北京:化学工业出版社 , 2005年.
[ 3] 邓意辉.苦碟子注射液中腺苷的含量测定 [ J] .沈阳药科大学学报 , 2003, 20(6):433.
[ 4] 国家药监局.苦碟子注射液标准(试行)[ S] .中华人民共和国国家药品监督管理局 , 2002年.
23人参研究 RENSHENYANJIU 2009年第 3期