全 文 ：药物分析杂志 C hi n JP hamr A n al 2 5 00
,
2 5 ( 9 ) 一 10 4 1
绒毛鼠尾草中水溶性成分的定性与定量分析 ’
程显隆’ , 肖新月` , 蔡丽萍 2 , 马双成 ’ ,林瑞超 ’
( 1
. 中国药品生物制品检定所 北京 l以x〕5 ;0 2 . 广州生物工程中心 广州 51 06 30)
摘要 目的 :建立 H P Lc 测定绒毛鼠尾草中迷迭香酸含量的方法并对同属植物绒毛鼠尾草 、丹参 、 甘西 鼠尾草 、 云南鼠尾草的
根与根茎进行含量测定 , 比较迷迭香酸在不同种植物中的含量差别 。 方法 : s u PE L c o sI L翎 Lc 一 18 色谱柱 ( 250 m m x 4 . 6 ~ ,
5 林m ) ,流动相为甲醇 一 1% 甲酸 ( 4 :0 6 0 ) , 流速 : l mL · ~
一 ’ ,检测波长 : 250 n m 。 结果 :迷迭香酸量在 0 . 2 一 3 . 3 卜g 范围内与
峰面积呈良好的线性关系 ( r 二 0 . 999 , n = 6 ) 。 迷迭香酸的回收率为 102 . 7% , RS D = 2 . 9 % ,结论 :本方法简便 , 可靠 , 准确 。 迷
迭香酸在同属植物中的含量差别较大 ,绒毛鼠尾草中含量最高可达 3 . 8 % , 是迷迭香酸的重要资源 。
关键词 :绒毛鼠尾草 ;迷迭香酸 ;含量测定 ;高效液相色谱法
G u ia i扭 it v e a n d G u a int at it v e A n a l y s i s o f W a t e r 一 s o l u b l e
C o ns it ut e n st in aS vl 勿 c as at n e a D i e l s .f 2’o m e n ot s a S it b .
e H E N G x i a n 一 l o n g l , x IA O x i n 一 y u e l , C A I L i 一 p i n g
M A Sh u a n g 一 e h e n g l , L I N R u i 一 e h a o l
( 1
.
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C e n t e r Of G u an 郎h o u B IOlo ig e al E n gl n e e ir n 只, uG an 只z h o u 5 106 30 , Cihn a )
A b st r ac t O bj e e it
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n i e a e id i n t h e or o t a n d ht i z o m e i n ht e s a m e 罗 n u s
p l a n t s
.
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e ht o d : s u PE Le o S I L , LC 一 1 8 e o lu mn ( 2 5 0 mnr
x 4
.
6 m m
,
5 林m ) , t h e fl o w ar te of m o b i l e p h a s e [ m e th a -
n o l 一 l % fo而 C a e id ( 4 0 : 6 0 ) 〕w a s 1 . 0 m L · 而 n 一 ’ . hT e d e t e e t i o n w a v e l e n砂 w a s 2 8 0 n m . R e s ult : hT e e al ib r at i o n
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e w a s l i n e ar i n t h e ar n g e o f 0
.
2 2 一 3
.
3 林9 fo r or s m iar n i e a e id ( r = 0
.
9 9 9 8
, n = 6 )
.
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e o v e巧 Of or s m a -
ir n i e a e id w as 10 2
.
7%
,
R SD = 2
.
9%
.
C o n c l叹 o n : hT i s m e t h o d 15 s im p le , er l iab l e , a e e u r at e . hT e e o n t e n t of or s m a -
ir n i e a e id i n t h e p lan t s Of ht e s am
e g e n u s a er d政 er nt . hT e m ax i m a m e o in e n t of or s m iar n i e a e id i n S a 肠i a 15 u P t o
3
.
8%
.
5
. 心 t a en a D ie l s厂 ot me n t os a tS ib . wo ul d b e ht e i m p o rt a n t s o u cr e of or s m iar n i e a e id ·
K e y wo
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: R ad 议 S公v i a e M i l t io r h i z a e ; or s m a ir n i e a e id ; d e t e mr l n at i o n : HPL C
鼠尾草属 ( aS 俪a) 植物药用种类多 , 药效范围
广 。 在我国各地作丹参药用的鼠尾草属植物约有
30 多 种川 , 中 国 药 典川 仅 收 载 丹 参 sa 俪。
m ilt 动hr ha B ge 一种 。 然而由于丹参的需求量逐年增长 , 尚有同属其他多种植物也代丹参在部分地区
使用 。 有关其同属植物的研究也很多「’ 一 s 〕 。 绒毛鼠
尾草 sa 加i a 翎 ra en a D i e l s f to me 瓜os a S tib . 在《中国
植物志》和 《西藏植物志》中均有记载 ,为栗色鼠尾
草 S a 俪 a c as at ~ iD el s 的变型 ,产于西藏林芝地区波密 、林芝 、江达 、 墨脱县 [ ’ 一 ` “〕 。 据当地医药部门介
绍 ,绒毛鼠尾草为西藏林芝地区特有 , 资源蕴藏量
大 , 当地医院或诊所的中医师以其根和根茎代丹参
使用多年 ,故称作林芝丹参 ,并认为效果优于丹参 。
为此 ,我们对不同产地 、海拔 、采期的绒毛 鼠尾草根
和根茎主要活性成分丹参酮 n A 、 隐丹参酮进行研
究 ,发现所测指标丹参酮 n A 和隐丹参酮的含量明
显高于丹参 〔川 。 为考察绒毛鼠尾草水溶性成分 ,我
们对绒毛鼠尾草及同属植物丹参 、甘西鼠尾草 、 云南
鼠尾草的根与根茎进行了比较研究 。
* , 广州市科技局重大项 目 (编号 2 00 2 2Y 一 Co l l) 内容之一
一 14 02 一 药物分析杂志 C hi n J Ph ~ An a l2 5 00, 25 ( 9)
1 定性分析
1
.
1 液质联用鉴别
在本实验中 ,我们以 RP 一 H P LC 法测定绒毛鼠
尾草中丹酚酸 B 的含量时发现 , 绒毛 鼠尾草样品中
色谱峰的保留时间与丹酚酸 B 有一些差别 , 我们认
为此色谱峰为另外一种物质 , 为了获得此色谱峰的
相对分子质量信息 , 我们利用 CL 一 M S 对此色谱峰
进行了鉴别 。
1
.
1
.
1 仪器和试剂
液相色谱部分 W at e sr 2 6 95 刘 ian c e 型高效液
相色谱仪 , 色谱柱 : s u PE cL o sI L侧 L c 一 18 色谱柱
( 2 5 0 m
x 4
.
6 m m
,
5 协m ) ;流动相 : 甲醇 一 乙睛 -
水 一 3 6 % 乙酸 ( 3 3 : 12 : 5 5 : l ) , ;流速 : 1 m L · 而 n 一 ’ ;
进样方式为 自动进样 , 分流比为 3 : 1 。
质谱部分 iM c or m as s 电喷雾质谱仪 , 离子源 :
SE I ;检出模式 : 正负离子 2 种形式检测 ; 电离电压 :
3
.
2 k V ;电喷雾接 口干燥气 ( N Z ) 流速 : 3 0 0 L · h 一 ’ ,
离子源温度 : 105 ℃ ,锥孔电压 : 30 V ;脱溶剂温度 :
15 0 ℃ 。
1
.
1
.
2 供试液的制备 取绒毛鼠尾草粉末 (过 4 号
筛 ) 0 . 2 9 , 精密称定 ,置 10 m L 锥形瓶中 , 加水 50
m L
,精密称定 ,超声提取 l h ,称重补重 , 用 .0 45 林m
微孔滤膜滤过 ,取续滤液 ,供测定 。
1
.
1
.
3 实验结果 我们利用 CL 一 M S 测定了此色
谱峰的相对分子质量 ,总离子流 图见图 1。 保留时
间为 7 . 7 7 而 n 的色谱峰的质谱图见图 2 。 质谱图中
可知保留时间为 7 . 7 而 n 的色谱峰的 [ M 一 1〕十 为
35 9
.
6
。 经检索鼠尾草属植物中的化合物 ,发现其与
迷迭香酸的相对分子质量相符 。
1 3 5
一
3
13 3
.
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1 2 3
.
3 JI 1
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1以】 15 0 2峨月) 2 50 3以】 35 0 4 00 4 50 5峨X) 5 5 0 6侧】 6 50
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1
.
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.
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图 1 绒毛鼠尾草水溶性成分总离子流图
F ig 1 T o tal i o n e hID m at
o gr a m Of w at er s ol ub l
e e o n ist ut e nt Of 5
. 心忿a ean
D i e l s f ot ent
了“ o 3a St i b .
1
.
2 薄层色谱鉴别 另以 自制的迷迭香酸单体配
制对照品溶液 ,用绒毛鼠尾草 8号和 10 号样品的供
图 2 保留时间为 7 . 7 而 n 的色谱峰的质谱图
F ig 2 M as s s p e c t or g r a m of 谬ak Of RT 7 . 7 7 而 n
试液 , 点样量均为 5 林L 。 TL C 条件 1 : 硅胶 G 预制
板 ,展开剂 :氯仿 一 甲醇 一 水 一 甲酸 ( :8 1 . :5 0 . :2 .0
2 )
, ①紫外 3 65 n m 下检视 ,见图 3 一 A ; ②喷以香草
醛浓硫酸溶液 , 105 ℃加热至斑点显色清晰 , 日光下
检视 ,见图 3 一 B ,结果供试药材色谱中 , 可检出与迷
迭香酸对照品溶液对应的斑点 。 孔C 条件 2 : 硅胶
G F254 预制板 , 展开剂 : 氯仿 一 甲醇 一 甲酸 ( 8 : 2 : .0
5 )
, ①紫外 2 5 4 n m 下检视 ,见图 3 一 C ;②3 6 5 n m 下
检视 ,见图3 一 D ,结果在供试药材色谱中 , 均可检出
与迷迭香酸对照品溶液对应的斑点 。 进一步确证了
林芝丹参中含有迷迭香酸 。
2 对照品的提取与纯度鉴定
2
.
1 仪器与试剂 熔点用 K on e 显微熔点仪测定 ,
温度计未校正 ; 紫外吸收光谱用 hS im ad uz u v -
21 0 紫外分光光度仪测定 ;红外吸收光谱用 iN co let
Im p ac t 40 0 型傅立叶红外光谱仪测定 , KBr 压片 ;核
磁共振氢谱和碳谱用 NI O V A 一 50 型核磁共振仪测
定 ;电喷雾质谱用 W at er s m ic or m as s z Q 型质谱仪测
定 ;W at e sr erP p LC 4 0 0 0 S y s t e m 制备液相 , 2 4 5 7 检测
器 。 柱层析用硅胶为青岛海洋化工厂产品 ,试剂均
为分析纯 。
2
.
2 化学成分的提取分离 林芝丹参 巧 k g ,加 10
倍量 95 % 乙醇回流提取 2 次 ,合并提取液 , 低温减
压回收乙醇至无醇味 , 用氯仿萃取 , 剩余水液加于
AB 一 8 型大孔树脂柱上层析 ,用水冲洗 ,再用乙醇水
溶液梯度洗脱 , 收集20 % 一 50 % 乙醇洗脱部分 ,低温
减压回收溶剂后 ,用 H P LC 制备 (流动相 : 甲醇 一 1%
甲酸比例为 53 : 47 ) ,冷冻干燥后得到灰白色无定形
粉末 。
药物分析杂志 C h in J P harn n Aal ZX) ( 5
,
2 5 ( 9 ) 一 104 3 一
表 1 迷迭香酸 , H 一 N M R 谱和 ” C 一 N M R 谱 ( cD 3 O D )
T a b 1 I H 一 NM R a n d u C 一 N西八R Of r o s m a 对 n ic a e i d
I3 C 一 N M R IH 一 N M R
1 127
`
7
6
.
9 8 ( I H
,
d
,
J = 2 H
z
)
6
.
72 ( I H
,
d
,
J = 8
.
0 H z )
6
.
89 ( I H
,
dd
,
J
二 8
.
0 / 2
.
O ZH )
7
.
4 9 ( I H
,
d
,
J = 1 6 比 )
6
.
2 1 ( I H
, d
,
J = 16 爪 )
QRà飞ùō乙,苦49616237
2飞ù45tU,
苦苦夕
6
.
6 9 ( I H
,
d
,
J = 2
.
0 H z )
图 3 薄层色谱图 ( T L )C
iF g 3 LT C
e h功功 a t o g ra 田 s
1
,
5
. 迷迭香酸 ( or s m硕 in 。 ac 记 ) 2 . 绒毛鼠尾草甲醇提取物 ( Exatr ct
of 5
.
cas at
~ f
ot lne 咖 a . ) 3 . 麦巴村绒毛鼠尾草供试液 ( M ia b ac un
.s c。 招ne a f ot lne onts
a
.
) 4
. 米林绒毛鼠尾草供试液 ( M il n .5 c a活 t a -
ane f ot me nt os a)
2
.
3 结构鉴定 分子式 : C l : H 16 O : ;相对分子质量 :
3 6 0 ;性状 : 白色粉末 ;熔点 : 1 10 一 1 14 ℃ ; u v 入M ’ o H
M ax n m : 2 0 9
,
2 19
,
2 9 0
,
3 2 8 ; I R U V BK
r M ax e m
一 l : 3 5一s ,
24 58
,
3 % 为经基伸缩振动 , 3 184 为双键伸缩振动 ,
17 2 6
,
17 0 9 为碳基伸缩振动 , 16 4 7 , 16 1 8 , 15 22 , 14 64
为苯环的吸收峰 ; E S I 一 : 3 5 9 . 5 [ M 一 H J 一 , 7 19 , 8 [Z M -
川 一 ; ’ H 一 N M R 和 ` , e 一 N M R 的化学位移归属见
表 1 ,与文献值 〔` 2 〕基本一致 。
2
.
4 纯度分析
2
.
4
.
1 薄层色谱法 薄层板 : 硅胶 ;G 展开剂 : 氯
仿 一 甲醇 一 甲酸 ( 8 : 2 : 0 . 5 ) ;检视 : UV2 54 n m ;结果 :
点样 10 一 70 林g , 除主斑点外 ,未见杂质斑点 。
2
.
4
.
2 高效液相色谱法 色谱柱 : s u P E L c o s IL MT
LC 一 1 5 色谱柱 ( 2 5 0 m m x 4 . 6 m m , 5 林m ) ;流动相 :
甲醇 一 1% 甲酸 ( 4:0 6 0 ;) 流速 : 1 m L · 而 n 一 ’ ;检测
波长 : 2 10 n m , 2 2 0 n m , 2 8 0 n m , 3 3O mn ;进样量 : 10
林L ;结果 :峰面积归一化纯度为 10 . 0% (21 0 n m ) ,
10
.
0% ( 2 2 0
n m )
,
9 9
.
3 7% ( 2 8 0
n m )
,
9 9
.
5 7 %
( 3 0
n m )
。 结果表明自制迷迭香酸可用于含量测
定用 。
6
.
64 ( I H
,
d , J = 8
.
0 价 )
6
.
55 ( I H
,
d d
,
J 二 8
.
0 2/
.
0 H z )
3
.
04 ( I H
,
d
,
J = 14
.以 IO . O ZH )
2
, 佑 ( I H , d , J = 14 . 份5 . S ZH )
5
`
13 ( I H
,
dd
,
J
二 8
.
0 4/
.
O ZH )
弓一飞ùùO内`气一R682917451629r2’3甲夕已侧
9
,
173 5
3 定鱼分析
3
.
1 仪器和试剂
日本岛津公司 hS im ad uz 高效液相色谱仪 : L C -
ro AT 泵 、 S PD 一 10 A 紫外检测器 、 CT A 一 ro A 柱温
箱 、 sI L 一 10 AD印 自动进样仪 。
乙睛 (色谱纯 ) , 甲醇 (色谱纯 ) ,水 ( M iil 一 Q ) 。
迷迭香酸对照品 ( 自制 ) ;样品均由广州市科委
伍广甜和中国药品生物制品检定所肖新月研究员采
集并鉴定 ,来源情况见供试品含量测定项下列表 。
3
.
2 方法与结果
3
.
2
.
1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱 : SU -
孤 L e 0 S IL MT L C 一 1 8 色谱柱 ( 2 5 0 m m x 4 . 6 m m ,
5 林m ) , 流动相 : 甲醇 一 1% 甲酸 ( 4 0 : 6 0 ) , 流速 :
1 m L
·
m i n
一 ’ ,检测波长 : Zs o mn ,进样量 : 10 林L 。 理
论板数按迷迭香酸计算不低于 40 0 。
3
.
2
.
2 对照品溶液的制备 取迷迭香酸 5 绍 , gn ,
、置于 25 m L 量瓶中 ,用甲醇稀释至刻度 ,摇匀 , 即得
对照品溶液 ( 0 . 220 mg · m L 一 ’ ) ,色谱图见图 4 。
3
.
2
.
3 供试品溶液的制备 取绒毛鼠尾草粉末
(过 4 号筛 ) 0 . 2 9 ,精密称定 , 置 10 m L 锥形瓶中 ,
加水 50 m L ,精密称定 ,超声提取 l h , 称重补重 , 用
0
.
4 5 林m 微孔滤膜滤过 , 取续滤液 , 供 H P L C 测定 ,
色谱图见图 4 。
药物分析杂志 C i hn J Pharm A n al 20 5
,
25 ( 9 )
表 2 。
表 2 绒毛鼠尾草样品测定 (% , n = 4)
aT b 2 eD t
e xr 苗 n a 垃o n of aS m P Ie of R a d该
S al vi ae 扮E】t io r r h .明甲
编号
( N o
.
)
植物名 样品
( p】an t n o e ) (~ lP
e
平均值 SR D
va
e r叱 e ) / % / %
45286
ù.孟`
.nU绒毛鼠尾草 ( .s 林芝丹参 (米林嘎沟口 常场 )
2 心协” 亡“ D i e fs
f ot 那记
尸“ 刃 s a )
1
.
9 8
0
.
89
20516%以l`胜ó, ,ù.卫`ō盈
田02674321飞ù`1.1,、一嘴J.J
19以7028014众.0么生.2住L
图 4 高效液相色谱图
iF g 4 H P CL
e ll or m a to gr 田 n s
A
. 对照品溶液 ( r e fe er nc e s ub sant ce ) B
. 波密绒毛鼠尾草供试品溶
液 ( B O而 5以U如 c a活招 ne a f 勿万记瓜。 a)
1
. 迷迭香酸 ( or s m硕 in c ac id)
3
.
2
.
4 线性范围的考察 精密吸取对照品溶液 1 ,
2
,
4
,
8
,
10
, 巧 林L 分别注人液相色谱仪 , 测定峰面
积 。 以峰面积及对照品量 ( 林g )绘制标准曲线 , 计算
回归方程为 :
Y = 16 7 6 8 3 8
.
0 6 6X 一 87 0 0
.
6 6 2 7 9 r = 0
.
9 9 9 9
结果表明迷迭香酸量在 0 . 2 一 3 . 3 林g 范围内
与峰面积呈良好的线性关系 。
3
.
2
.
5 精密度试验 分别精密吸取绒毛鼠尾草 2
号供试品溶液 10 林L , 按上述色谱条件连续重复进
样 5 次 ,测定峰面积 , R s D = 1 . 2% 。
3
.
2
.
6 重复性实验 取绒毛鼠尾草 2 号样品 ,按上
述供试品溶液的制备方法操作 ,重复平行测定 5 次 ,
计算迷迭香酸含量平均值为 1 . 19 % 。 Rs D = 2 . 8%
3
.
2
.
7 供试品溶液稳定性实验 取绒毛 鼠尾草 2
号供试品溶液 , 在 0 , 2 , 4 , 6 , 8 , 10 , 12 h 时测定峰面
积 ,计算 R SD = 2 . 9% 。 供试品溶液在 12 h 内测定
是稳定的 。
3
.
2
.
8 回收率实验 取波密绒毛鼠尾草药材 5 份 ,
每份 0 . 1 9 , 精 密称 定 , 加 人 迷 迭 香 酸 溶 液
( 0
.
0 2 2 4 m g
·
m L
一 `
) 5 0 m L
, 置 10 m L 锥形瓶中 ,加
水50 m L ,精密称定 ,超声提取 l h ,称重补重 , 取续
滤液 , 供 H PCL 测定 。 回收率为 102 . 7% , sR D =
2
.
9%
3
.
2
.
9 样品测定 收集的 10 批样品 ,按供试品溶
液制备项下操作 ,分别制成供试品溶液 , 均过孔径为
0
.
45 林m的微孔滤膜 。 上述色谱条件下 , 用外标一
点法测定 ,计算各样品中迷迭香酸的含量 , 结果见
甘西鼠尾草
( s
.
p
~ 心 ik i
丹参
( .s m 边必欣二
林芝丹参 (波密 )
林芝丹参 (林芝工布县巴河镇 )
林芝丹参 (米林县 l)
林芝丹参 ( 巴松湖雪卡 )
林芝丹参 (林芝县鲁朗镇 )
林芝丹参 (工布江达县 )
林芝丹参 (米林县 2)
林芝丹参〔鲁朗镇 (林芝县 ) 〕
林芝丹参 (麦巴村 )
甘肃丹参 1( 西藏波密 )
甘肃丹参 2( 甘肃兰州 )
甘肃丹参 3( 甘肃临夏 )
丹参 (山东沂水 )
丹参 (陕西商洛 )
丹参 (四川中江 )
滇丹参 (云南昆明 )
0
.
15
0 13
17 云南鼠尾草
(反 , ~ en二 ` )
0
.
16
0
.
3 1
9103214巧6
4 讨论
4
.
1 我们曾以原儿茶醛 、 丹参素 、 丹酚酸 B 作对
照 , 以薄层色谱法检测绒毛鼠尾草中是否含有迷迭
香酸 ,结果显示 , 除丹酚酸 B 外 ,在薄层色谱上未见
到上述成分的斑点 。 因篇幅有限 , 未将此部分内容
列人本文中 。
4
.
2 绒毛鼠尾草的水溶性成分中含微量的丹酚酸
B
, 而含有较高含量的迷迭香酸 ,丹参的水溶性成分
中含微量的迷迭香酸 ,而含有较高含量的丹酚酸 B 。
2 个迷迭香酸分子聚合成为丹酚酸 B ,这说明此 2 种
植物的生合成可能有相似之处 ,但合成产物不同 ,可
能是由于 2 种植物生长的环境不同 、 合成产物的机
制有差别等原因造成的 , 尚有待于进一步研究 。
4
.
3 我们考察了迷迭香酸在不同产地的绒毛 鼠尾
草中及同属的甘西鼠尾草 、丹参 、云南鼠尾草中的含
量 ,这对绒毛鼠尾草的进一步开发利用提供有价值
的实验数据 。
4
.
4 因迷迭香酸不稳定 ,本实验过程中所采用的方
法尽量在低温下进行 ,在用氯仿进行萃取时 ,剩余水
液部分用薄层色谱法进行检测 ,未见丹参酮 n A 和
药物分析杂志 hi Cn J h P~ A n al 5 00 2
,
25 ( 9) 一 104 5 一
隐丹参酮等脂溶性成分的斑点 ,整个迷迭香酸的提
取过程中 ,所采用 的方法简便易行 ,可 以作为迷迭香
酸对照品的提取方法 。 7
4
.
5 丹参及云南鼠尾草中的迷迭香酸的含量较低 ,
故测定结果的 R S D 较差 。
8
参考文献
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(本文于 20 04 年 6 月 2 日收到 )
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( 中国新药与临床杂志》征订和 ( 世纪光盘》征订通知
一 、 《中国新药与临床杂志》是面 向国内外公开发行的学术刊物 , 为全卧性期刊 、 全国中文核心
期刊 、统计源期刊 。 荣获第二届 国家期刊奖提名 奖 。 由中国药学会与上海市食品药品监督管理局
科技情报研究所共 同主办 , 19 82 年 3 月创刊 。 主要报道新药的临床研究和 临床应用 。 据 < 中国学
术期刊综合评价数据库 > 分析 , 20 3 年本刊影响因子 1 . 02 7 ,据全国药学类杂志第一位 。
本刊 的主要读者对象为临床 医师 , 药师 。 医药院校的师生 以及从事药物研究 , 管理 的技术人
员 。
二 、 《中国新药与临床杂志》公开发行 ,为月刊 。 每册 10 . 0 元 , 全年 12 0 . 0 元 。
杂志社地址 : 上海市愚园路 5犯 弄 50 号 邮政编码 : 20 04 0 电话 (传真 ) : 02 1 一 62 52 一 569 0 , 杂
志社存有合仃本 19 9 0 一 1 9 9 2 年合仃本 (每册 1 0 . 0 0 元 ) , 19 9 3 年 ( 15 . 0 0 元 ) , 1 9 9 4 年 ( 2 5 . 0 0 元 ) ,
1 9 9 5 年 ( 2 5 . 0 0 元 ) , 19 9 6 年 ( 3 8 . 0 元 ) , 19 9 7 年 一 2X() l 年 ( 5 0 元 ) 、 2 0 0 2 年 一 2 004 年 ( 1 2 0 元 ) 。 本
刊发行 20 周年纪念光盘 ( 内含 19 8 2 一 2 0 01 年杂志的所有文章 ,每盘 30 元 ) , 平寄邮资在 内 ;杂志
社按仃购先后供应 。