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(2007-09-19收稿)
紫背鼠尾草中总三萜酸的含量测定
蔡亚玲 ,阮金兰 ,苏 群 ,徐 鹏
(华中科技大学同济医学院药学院 ,湖北武汉 430000)
摘要 目的:测定紫背鼠尾草中总三萜酸的含量。方法:选用齐墩果酸作为对照品 , 采用 5%的香草醛-冰醋酸
溶液 、高氯酸溶液显色后 ,测定紫背鼠尾草提取物中总三萜酸的含量。考察了显色剂香草醛-冰醋酸溶液 、高氯酸溶
液用量 、水浴温度 、反应时间。结果:5%香草醛-冰醋酸溶液 0.3 ml、高氯酸溶液 1.0 ml、70℃水浴温度 20 min, 冰水
冷却 , 加冰醋酸 10.0 ml摇匀 ,在 554 nm处测定 ,其效果最佳。标准曲线方程:y=0.0046 x+0.0096(r=0.9993)。
结论:该比色法操作简便 ,准确 , 且该药材中三萜酸的含量达到 1.05%。
关键词 紫背鼠尾草;三萜酸;含量测定
中图分类号:R284.1 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2008)05-0692-02
紫背鼠尾草(SalviacavalerieiLevl.var.erythro-
phyla(Hemsl.)Stib)属唇形科鼠尾草属植物 ,主
要化学成分为萜类 、黄酮类和酚酸类〔1-3〕 ,其中三萜
类成分主要为齐墩果酸和熊果酸类衍生物 。该属植
物具有抗菌 、抗氧化〔4〕、清除人体自由基 〔5〕 、抗炎 、
对心脏作用活性 〔6〕 、免疫调节 〔7〕及抗肿瘤〔8〕等多种
药理活性。本实验应用香草醛 、高氯酸显色法测定
紫背鼠尾草中总三萜酸含量。
1 仪器 、试药及试剂
UV-756型紫外分光光度计 ,旋转蒸发仪;齐墩
果酸标准品 ,冰醋酸溶液 ,高氯酸溶液 ,香草醛溶液 ,
95%乙醇溶液 ,乙酸乙酯(分析纯),甲醇(分析纯)。
2 方法
2.1 紫背鼠尾草中三萜酸的提取及供试品溶液的
配制 精密称取紫背鼠尾草的粉末(50目)10 g,置
于 500ml圆底烧瓶中 ,加 70%乙醇 300 ml,回流 3
次 ,滤过 ,回收乙醇;残渣用 300 ml乙酸乙酯回流 3
次 ,滤过 ,回收乙酸乙酯;残渣用甲醇溶解 ,转移至
50 ml量瓶中 ,甲醇稀释至刻度 ,作为供试品溶液 。
2.2 标准品溶液的配制 精密称取齐墩果酸 10
mg,置于 50ml容量瓶中 ,加甲醇溶解定容至刻度。
2.3 5%香草醛-冰醋酸溶液的配制 精密称取香
草醛 0.5 g,加入少许冰醋酸溶解 ,转移至 10 ml容
量瓶中 ,用冰醋酸定容至刻度 。
2.4 比色条件的选择〔9, 10〕
2.4.1 波长的选择:准确量取对照品 0.4ml,水浴
加热挥干溶剂 , 加入 0.2 ml5%香草醛-冰醋酸溶
液 , 0.8ml高氯酸 ,混匀 ,密塞 ,置于 70℃水浴中恒
温加热 20min,取出后立即冰水冷却以终止反应 ,加
冰醋酸 10.0ml,摇匀 ,在分光光度计上扫描 ,得吸收
光谱 ,选择最大吸收波长 554nm为测定波长。
2.4.2 香草醛用量的选择:精确量取对照品 ,每份
0.4 ml,分别装于具磨口的试管中 ,水浴蒸干 ,加新
鲜配制的 5%的香草醛-冰醋酸 0.1、0.2、0.3、0.4、
0.5 ml,高氯酸 0.8 ml,摇匀 ,密塞 ,于 70℃水浴中恒
温加热 20 min,取出 ,冰水冷却 ,加冰醋酸 10.0 ml,
摇匀 ,在分光光度计上于 554nm处测定吸收度 。结
果显示 , 0.3ml5%的香草醛 -冰醋酸为最佳用量。
2.4.3 高氯酸的用量选择:准确量取对照品 ,每
份 0.4 ml,分别装于具磨口的试管中 ,水浴蒸干 ,加
新鲜配制的 5%的香草醛 -冰醋酸 0.3 ml,高氯酸
0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 ml,摇匀 ,密塞 ,于
70℃水浴中恒温加热 20 min,取出 ,冰水冷却 ,加冰
醋酸 10.0ml,摇匀 ,在分光光度计上于 554nm处测
·692· 中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials 第 31卷第 5期 2008年 5月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2008.05.028
定吸收度。结果显示 , 1.0 ml为高氯酸最佳用量 。
2.4.4 水浴温度及时间的选择:准确量取对照品 ,
每份 0.4 ml,分别装于具磨口的试管中 ,水浴蒸干 ,
加新鲜配制的 5%的香草醛 -冰醋酸 0.3 ml,高氯酸
1.0ml,摇匀 ,密塞 ,于 50、60、70、80、90、100℃及 10、
15、20、25、30 min水浴中恒温加热 ,结果表明 70℃
水浴 20 min为最佳反应条件。
2.5 标准曲线的绘制 准确量取对照品 0.10、
0.20、0.30、0.40、0.50、0.60、0.70ml分装于具磨口
的试管中 ,水浴蒸干 ,加新鲜配制的 5%的香草醛-
冰醋酸 0.3ml,高氯酸 1.0 ml,摇匀 ,密塞 ,于 70℃
水浴中恒温加热 20 min,取出 ,冰水冷却 ,加冰醋酸
10.0ml,摇匀 ,在分光光度计上于 554 nm处测定吸
收度。以吸收度 A为纵坐标 ,齐墩果酸的质量为横
坐标作图 ,得标准曲线 ,得回归方程为 y=0.0046 x
+0.0096, r=0.9993。
2.6 精密度试验 吸取供试品溶液 1份 ,按 2.10
项下连续测定 5次 , RSD为 1.67%。
2.7 稳定性试验 吸取供试品溶液 ,分别按 2.10
项下操作 ,在 0 ～ 90 min内每隔 10 min测定吸光度
值 ,显示在 30 min内稳定 , RSD为 1.73%。故应该
显色后 30min之内测定其吸收值。
2.8 重复性试验 称取紫背鼠尾草 5份 ,每份 10
g,按 2.1项下方法制备 ,按 2.10项下测定 , RSD为
0.68%。
2.9 加样回收率试验 取已知含量的供试品溶液
0.5ml共 4份于具磨口的试管中 ,分别加入 0.1 ml
对照品溶液 ,按前述显色 ,测吸光度 ,计算三萜酸的
含量 ,平均回收率为 99.4%, RSD为 1.2%。
2.10 样品含量测定 取供试品溶液 2.5 ml于 25
ml容量瓶中 ,加甲醇定容至刻度。取此溶液 0.5 ml
共 4份分装于 4支磨口试管中 ,按 2.5项下方法显
色测吸光值 ,计算供试品中齐墩果酸含量。结果 4
份样品溶 液总三萜 酸含 量分别 为 104.028、
105.628、 105.428、 105.028 μg, 其 平均 含量为
105.028 μg。
3 小结与讨论
3.1 含三萜酸类的植物在自然界分布较广 ,该类
成分具有抗炎 、保肝 、降血糖 、抗肿瘤等多种生物活
性 ,逐渐引起广泛的关注。紫背鼠尾草含有齐墩果
酸 、熊果酸及其衍生物 ,故本实验初步测定了三萜类
成分的含量 ,为该植物的科学合理开发提供了理论
依据 。
3.2 本法采用以齐墩果酸作为对照品的方法测定
紫背鼠尾草中三萜类化合物的含量 ,该方法的精密
度和重现性较好 , 且回收率较高 ,可作为检测紫背
鼠尾草中三萜酸含量的一个依据 。
3.3 经测定得紫背鼠尾草中三萜酸含量为
1.05%,其相对含量较高。
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·693·中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials 第 31卷第 5期 2008年 5月