全 文 ：469※分析检测 食品科学 2008, Vol. 29, No. 09
不同产地与不同采收期一点红总黄酮含量分析
周吴萍，李军生 *，韦媛媛，阎柳娟
(广西工学院生物与化学工程系，广西 柳州 545006)
摘 要：本实验通过测定不同产地、不同采收期一点红中总黄酮含量，建立了一种以总黄酮含量变化为基础的一
点红质量测定方法，确定了一点红最佳采收期。利用单因素与正交试验设计法考察最佳提取条件，采用紫外 - 可
见分光光度法，以芦丁为对照品，于 510nm 波长处测定总黄酮含量。芦丁在 0.0104～0.8160mg/ml 范围内呈良好线
性关系(R2=0.9994)，平均加样回收率为 99.2%，RSD 为 1.069%(n=6)。样品的总黄酮含量在 6.30～14.16mg/g 之间，
结果表明，广东韶关的一点红总黄酮含量较高，一点红最佳采收期为九月份。
关键词：一点红；总黄酮；质量测定方法
Analysis of Total Flavonoids Content in Emilia sonchifolia from Different Regions and at Different Collecting Times
ZHOU Wu-ping ，LI Jun-sheng* ，WEI Yuan-yuan，YAN Liu-juan
(Department of Biological and Chemical Engineering， Guangxi University of Technology，Liuzhou 545006，China)
Abstract: In order to establish a total flavonoids-based method for assessing quality of Emilia sonchifolia and deciding its best
harvesting time，the total flavonoids contents in the Emilia Sonchifolia samples from different regions and at different collecting
time were determined. The optimum experimental conditions were set up by single-factor and orthogonal test method, and the
total flavonioids were determined by UV-visible spectrophotometry at 510 nm using rutin as a control. The calibration curve
show good linearity in the range from 0.0104 to 0.8160 mg/ml (R2=0.9994), and the average recovery is 99.2% with RSD 1.069%
(n=6). The total flavonoids contents in the samples are 6.30 to 14.16 mg/g. The results showed the total flavonoids content in
the sample collected from Shaoguan of Guangdong Province is the highest, and the best time for harvesting is September.
Key words: Emilia sonchifolia；total flavonoids；quality-determining method
中图分类号：R282.4；O623.54 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2008)09-0469-03
收稿日期：2008-05-04
基金项目：广西自然科学基金项目(桂科基 0575023)
作者简介：周吴萍(1979-)，女，讲师，硕士，研究方向为中草药药效成分分析与检测。E-mail：kxt_w@126.com
* 通讯作者：李军生(1963-)，男，教授，博士，研究方向为生物分子化学修饰与功能。E-mail：junshenglee63@yahoo.com.cn
一点红是广西传统中草药，为菊科植物一点红
（Emilia sonchifolia (Linn.) DC.)的干燥全草，具有清热解
毒、消炎、利尿的功效[1]。一点红主要含有黄酮类[2-3]、
生物碱类[1 ]、植物甾醇、脂肪酸[4 ]等化学成分，是妇科
临床常用药广西特产中成药花红片的主要原料药[5]。国内
外文献仅在其临床应用和药理作用[6-7]方面有部分报道，
在原料药的质量控制方面相关报道较少。由于其具体化
学活性成分尚未明确，对于原药材的鉴定和质量检测也
只能通过经验和外观品质进行简单验证。据报道[3-6]，黄
酮类物质是一点红中抗氧化和抗菌消炎的主要活性成分。
为了加强原药材质量监控，以总黄酮含量为指标确定一
点红的最佳采收期，同时考察几个产地一点红含量累积
的差异，建立一种以总黄酮含量变化为基础的一点红质
量测定方法。
1 材料与方法
1.1 试剂与仪器
一点红干燥全草；芦丁对照品 中国药品生物制
品检定所；石油醚、甲醇、无水乙醇、丙酮 ( 均为分
析纯) 市售；10% Al(NO3)3、5% NaNO2 及 4% NaOH。
UV2100 型紫外可见分光光度计 尤尼柯仪器有限公
司；AL104 型电子天平 梅特勒 - 托利多仪器有限公
司；B2200S 型超声波清洗仪 必能信上海有限公司。
1.2 对照品溶液制备
2008, Vol. 29, No. 09 食品科学 ※分析检测470
精密称取芦丁对照品 5.1mg 置于 25ml 容量瓶中，加
60% 乙醇溶解至刻度，摇匀，即得浓度为 0.204mg/ml 芦
丁对照品贮备液。
1.3 检测波长的选择
分别取芦丁对照品液、一点红总黄酮样品液适量，
显色剂显色后，以未加样液的显色层作为参比在 400～
600nm 范围内进行光谱扫描，结果显示，在可见光区芦
丁对照品液和一点红样品液在 510nm 处均有较大吸收，
故选择 510nm 为测定波长。
1.4 标准曲线制备
精密量取芦丁对照品溶液 0 . 0、0 . 5、1 . 0、1 . 5、
2.0、2 .5、3.0、3 .5、4 .0ml，分别置于 10ml 容量瓶
中，分别加入 5% NaNO2 0.75ml，摇匀静置 5min，
加入 10% Al(NO3)3 0 .75ml，摇匀静置 5min，加入
4%NaOH 溶液 4ml， 60％乙醇稀释至刻度，摇匀，放
置 5min 后，以第 1 管作空白对照，在 510nm 处测吸光
度。以芦丁对照品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，
绘制标准曲线。结果表明，芦丁在 0.0104～0.0816 mg/ml
范围内浓度与吸光度呈良好的线性关系，得到的回归
方程为 Y=11.735X － 0.0045，R2 =0.9994(n=8)。
1.5 一点红提取条件的选择
1.5.1 不同提取方式的考察
取同一批一点红药材粉末约 0 . 5 g，共 4 份，精密
称定，分别用索氏提取法、冷浸法、超声提取法、回
流提取法提取。比较提取效果，发现超声提取法用时
较短，操作简单，且提取率高。
1.5.2 提取溶剂的确定
称取一点红样品约 0 . 5 g，共 4 份，置具塞锥形瓶
中，分别精密加入 6 0 % 乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙
酯 5 0ml 密塞，超声处理 3 0min，过滤，浓缩至近干，
分别加入适量相应溶剂溶解，加入 5% NaNO2 0.75ml，
摇匀静置 5min，加入 10% Al(NO3)3 0.75ml，摇匀静置
5min，将 40ml 1mol/L NaOH，分别加入上述各提取溶
剂定容至 100ml，摇匀静置 5min，于 510nm 处测吸光度。
实验结果显示加丙酮和乙酸乙酯提取的样品液与参比液
显色后均分为两层且吸光度较小，60% 乙醇提取液显色
后测得的吸光度最大，甲醇次之。故 6 0 % 乙醇提取率
高 。
1.5.3 正交试验
以总黄酮含量为指标，在单因素预试验的基础上，
选择乙醇浓度、提取时间和料液比作为考察因素，每
个因素取三个水平，选用 L 9(3 4) 正交试验表格进行试
验，因素水平见表 1。正交试验数据及其直观分析见表
2 。
由极差分析可知，各个因素对总黄酮提取量的影响
1.5.4 供试品溶液制备及测定
称取不同采收期及不同产地的一点红药材粉末各约
0.5g，置 50ml锥形瓶，加 30%乙醇 50ml超声提取 60min，
滤液水浴浓缩至近干，加适量 30% 乙醇液溶解，加 5%
NaNO2 0.75ml 摇匀静置 5min，加 10% Al(NO3）3 0.75ml，
摇匀静置 5min，加 1mol/L NaOH 溶液 40ml，用 30% 乙
醇定容到 100ml，摇匀静置 5min；以未加样液的显色层
作为参比，于 5 1 0 n m 处测吸光度。
2 结果与分析
2.1 方法学考察结果
2.1.1 精密度实验
吸取芦丁对照品溶液，按显色条件显色后，于 510 nm
处测其吸光度，连续测定，表 3 结果显示 RSD 为 0.144%
(n=6)，仪器精密度良好。
2.1.2 重复性实验
程度大小顺序万为 A>B>C。直观分析得出的较优水平组
合为 A1B3C2。因此，本实验最佳提取方法为用 30% 乙
醇超声提取 60min，按料液比 1:100(g/ml)加入提取溶剂。
表1 因素水平表
Table 1 Factors and levels of orthogonal test
A 溶媒浓度(%) B 提取时间(min) C 料液比(g/ml)
1 30 15 1:30
2 60 30 1:100
3 95 60 1:140
因素
水平
表2 正交试验结果
Table 2 Results of orthogonal test
试验号 A B 空列 C 总黄酮含量（mg/g）
1 1 1 1 1 7.235
2 1 2 2 2 12.416
3 1 3 3 3 13.865
4 2 1 2 3 8.308
5 2 2 3 1 7.473
6 2 3 1 2 12.671
7 3 1 3 2 1.849
8 3 2 1 3 2.855
9 3 3 2 1 3.144
K1 33.510 17.392 22.761 17.852
K2 28.709 22.744 23.868 26.936
K3 7.848 29.680 23.187 25.028
R 25.662 12.288 0.369 3.028
表3 精密度试验结果(n = 6)
Table 3 Results of precision experiment(n = 6)
样号 1 2 3 4 5 6
吸光度 0.522 0.523 0.523 0.523 0.524 0.524
RSD(%) 0.144
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2.1.4 加样回收率实验
取已知含量的同一批一点红全草粗粉约 0.25g，共
6 份，分别精密加入芦丁对照品液(1.912 mg/ml)适量，混
匀蒸干，按照 1.5.4 中步骤测定，表 6 结果显示平均加
样回收率为 99.2％，RSD 为 1.069％(n ＝ 6)。
2.2 样品测定结果
从表 7、8 可以看出，各样品总黄酮含量在 6.30～
14.16mg/g 之间，不同采收期、不同产地的总黄酮含量
累积有差异。九月份采收的一点红总黄酮含量累积较
高，随着采收时间的推移，一直到一月份采收的一点
红总黄酮含量逐渐降低，故最佳采收时间应为九月。也
符合了传统采收期，一般夏、秋两季采收。另外，不
同来源的样品中，来自广东两个产地的一点红总黄酮含
量相对较高，广西三个产地含量次之，贵州贵阳的含
量较低。这可能是由于不同地域的气候和环境造成的含
量差异。
取同一批一点红全草粗粉约 0.5g，共 6 份，精密称
定，按照 1.5.4 中步骤测定一点红中总黄酮含量，表 4 结
果显示其 RSD 为 0.922%(n ＝ 6)，说明方法重复性较好。
2.1.3 稳定性实验
取对照品溶液和样品溶液显色后于 0、1、2、3、
4、5 h 进行吸光度测定，表 5 结果显示对照品溶液吸
光度的 RSD 为 0.589%(n=6)，样品溶液吸光度的 RSD
为 0.599%(n=6)，说明对照品和样品溶液显色后在 5h
内测定稳定。
表 5 稳定性实验结果(n = 6)
Table 5 Results of stability experiment(n = 6)
时间(h) 0 1 2 3 4 5 RSD(%)
对照品吸光度 0.347 0.349 0.348 0.347 0.343 0.347 0.589
样品吸光度 0.522 0.523 0.521 0.526 0.527 0.529 0.599
表7 不同采收期样品测定
Table 7 Determination results of samples at different collecting
time
表8 不同产地样品测定
Table 8 Determination results of samples from different regions
样品产地 取样量(g) 样品总黄酮含量(mg/g)
广西南宁 0.502 8.937
广西柳州 0.500 9.177
广西贵港 0.499 8.701
广东佛山 0.498 12.363
广东韶关 0.501 12.544
贵州贵阳 0.500 6.297
3 结 论
实验曾对一点红全草粉碎成不同粒度后的提取率进
行比较，发现三种药材粉末提取率差别不大，但粗粉
的过滤时间较短，故将草药全部粉碎成粗粉进行实验。
由于药材为全草类，实验还对是否加石油醚提取弃去叶
绿素进行考察，所用总黄酮提取溶剂 30% 乙醇提取出的
叶绿素较少，而且在样品显色后，并不影响总黄酮在
510nm 处的测定。故无需在提取前处理叶绿素。
实验建立一套以芦丁作为对照品，总黄酮为检测指
标的一点红药材质量测定方法，同时分析了不同采收时
间一点红中总黄酮含量累积情况，确定九月份采收的药
草总黄酮含量较高。在不同来源的一点红中广东韶关的
药草总黄酮含量较高。用本法检测一点红质量，重复
性好，准确可行。
参考文献：
[1] 广西壮族自治区革命委员会卫生局. 广西本草选编: 下册[M]. 南
宁: 广西人民出版社, 1974: 940-941.
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能研究[J]. 食品科学, 2007, 28(9) : 196-198.
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properties of Emilia sonchifolia leaf extracts[J]. Fitoterapia, 2000, 71:
65-68.
表4 重复性实验结果(n=6)
Table 4 Results of reproducibility experiment(n=6)
样号 1 2 3 4 5 6
吸光度 0.522 0.536 0.529 0.527 0.533 0.531
RSD(%) 0.922
表6 加样回收率 (n = 6)
Table 6 Recovery of samples (n = 6)
样号 样品原含
量(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收
率(%)
RSD(%)
1 1.912 1.530 3.432 99.3
2 1.911 1.530 3.429 99.8
3 1.912 1.912 3.803 98.9
4 1.913 1.912 3.799 98.6
5 1.913 2.294 4.222 100.7
6 1.911 2.294 4.152 97.6
99.2 1.069
样品采收时间 取样量(g) 样品总黄酮含量(mg/g)
060803 0.501 7.647
060904 0.502 14.155
061001 0.501 13.165
061101 0.503 11.559
061202 0.503 11.500
070110 0.503 8.647