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少花海桐提取物镇痛作用及对胃肠功能影响的研究



全 文 :中国热带医学 2015年第15卷第02期 China Tropical Medicine,February 2015,Vol.15,No.02
基金项目:广西中药质量标准重点实验室资助项目(No.桂中重系201203)
作者简介:苏华(1984~),硕士,助理研究员,研究方向:天然药物药理药效学研究。
*通讯作者:何飞,E-mail: ygmfrs@126.com
·论 著·
少花海桐提取物镇痛作用及对胃肠功能影响的研究
苏华 1 ,何飞 1,2* ,韦韡 1,韦桂宁 1,2
1.广西中医药研究院,广西 南宁 530022;2.广西中药质量标准研究重点实验室,广西 南宁 530022
摘要:目的 探讨少花海桐水煮醇沉提取物(简称少花海桐)镇痛作用以及对胃肠功能的影响。方法 镇痛试验分
别取雌性昆明小鼠进行热板痛阈及醋酸所致昆明小鼠扭体反应研究;胃肠功能试验分别对正常昆明小鼠胃排空和小
肠推进运动、新斯的明所致昆明小鼠胃肠运动亢进及对蓖麻油引起的昆明小鼠腹泻作用进行研究,综合评价少花海桐
的药理作用。结果 少花海桐高剂量(15.0g生药/kg)、低剂量(7.5g生药/kg)均能够显著提高小鼠热板痛阈值和显著减
少醋酸所致小鼠扭体反应次数(P<0.01或P<0.05),能够显著抑制正常小鼠胃排空、小肠推进运动以及新斯的明所致的
小鼠胃排空、小肠推进运动亢进(P<0.01);能够显著减少蓖麻油引起的小鼠腹泻次数(P<0.01),并呈现一定量效关系。
结论 高、低剂量少花海桐对小鼠具有显著的镇痛,抑制胃肠运动功能和止泻作用。
关键词:少花海桐提取物;镇痛;胃肠功能;止泻
中图分类号:R-33 文献标识码:A 文章编号:1009-9727(2015)02-137-04
Analgesic effects of water extraction and alcohol precipitation of Pittosporum pauciflorum
on gastrointestinal functions
SU Hua1, HE Fei, WEI Wei, WEI Gui-ning
1. Department of Pharmacology of Guangxi Institute of Traditional Chinese Medicine & Pharmaceutical Science, Nanning
530022,Guangxi, P. R.China
Abstract: Objective To study the analgesic effects and gastrointestinal functions of water extraction and alcohol
precipitation of Pittosporum Pauciflorum. Methods The pharmacological effect of water extraction and alcohol precipitation
of Pittosporum pauciflorum were observed by abirritation tests, gastrointestinal function tests and antidiarrhoeal test. Results
The water extraction and alcohol precipitation of Pittosporum Pauciflorum could increase pain threshold of mice, reduce
symptom of mice writhing, inhibit gastrointestinal peristalsis and significantly reduce the frequency of diarrhea induced by
castor oil in mice(P<0.05 or P<0.01). Conclusion Water extraction and alcohol precipitation of Pittosporum pauciflorum
at low and high doses possesses remarkable abirritation, restraining gastrointestinal function and antidiarrheal effect.
Key words:Water extraction and alcohol precipitation of Pittosporum pauciflorum ; Abirritation; Gastrointestinal
function; Antidiarrhoeal
少花海桐(Pittosporum pauciflorum Hook.et Arn.)
系海桐花科南海桐花属植物,俗称上山虎、海金子等,
在广西金秀瑶族地区分布广泛[1]。以往的研究表明其
具有祛风活络,散寒止痛,镇静之功效,可用于风湿性
神经痛、坐骨神经痛、牙痛、胃痛、神经衰弱、遗精早
泄、毒蛇咬伤等[2-4]。但少花海桐的水煮醇沉提取物的
镇痛作用及胃肠功能药理研究尚未见报道,本研究采
用镇痛试验、胃肠功能试验和止泻试验观察其药理作
用,为少花海桐在医学领域的广泛应用提供依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 试验药物 少花海桐药材水煮醇沉提取物(以
下简称少花海桐)制备:取药材适量,加10倍水 ,加热
煎煮 3次,每次 1h,滤过,合并滤液,浓缩成 2g 生药/
mL药液;然后加入 95%乙醇,使药液乙醇含量达
60%,静置沉淀,吸取上清液;沉淀物用60%乙醇溶液
[按原药材(kg):乙醇溶液(L)=1.5:1)]洗涤两次,静置
沉淀,吸取上清液,经回收乙醇至无醇味,得稠膏。用
蒸馏水配制成所需浓度药液,供实验用。罗通定片:
批号A120301,山西云鹏制药有限公司。盐酸洛哌丁
胺胶囊(易蒙停)批号 130219289,西安杨森制药有限
公司。
1.1.2 动物 昆明小鼠,体重18~22g, 雌雄兼用,SPF
级,由广西医科大学实验动物中心提供。动物许可证
证号:SCXK桂 2009-0002。动物观察室:温度(25±
1)℃,相对湿度(60±10)%。
1.1.3 试剂 甲硫酸新斯的明注射液,批号1208171,
河 南 润 弘 制 药 股 份 有 限 公 司 。 蓖 麻 油 ,批 号
20120813,广东光华科技股份有限公司。半固体营养
糊:取 2g CMC-Na(800-1200)加 70mL蒸馏水浸泡溶
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中国热带医学 2015年第15卷第02期 China Tropical Medicine,February 2015,Vol.15,No.02
解,然后加入3.3g奶粉,1.0g炭末混匀即可。
1.1.4 仪器 YLS-8A型智能热板仪,淮北正华生物
仪器有限公司;FA1004型上皿电子天平,上海精科天
平;尺子等。
1.2 方法
1.2.1 镇痛试验 ① 少花海桐对小鼠热板痛阈的影
响。取雌性昆明小鼠,每次 1只放在恒温热板上,热
板温度(55±0.5)℃,以小鼠足底接触热板至出现舔后
足所需时间(秒)作为该鼠的痛阈值。凡舔后足时间小
于 5s或大于 30s或跳跃者弃之不用。合格的小鼠重
复测其痛阈值,取两次痛阈平均值,作为该鼠给药前
正常痛阈值。将合格小鼠随机分为对照组(蒸馏水),
罗通定片(0.06g/kg)组,少花海桐高剂量(PPH)组
(15.0g生药/kg)、低剂量(PPL)组(7.5g生药/kg),每组
10只。小鼠灌胃给药 2次。末次给药后 1h,2h分别
测定小鼠痛阈值,如60s仍无反应,将小鼠取出,以免
烫伤,其痛阈以 60s计算。② 少花海桐对醋酸所致
小鼠扭体反应的影响。取昆明小鼠 40只,随机分为
对照组(蒸馏水),罗通定片组(0.06g/kg),少花海桐
高、低剂量组,每组10只,雌雄各半。灌胃给药,每天
1次,连续 3d。末次给药 1h后,小鼠腹腔注射(ip)
0.6%醋酸溶液0.2mL/只,立即观察并记录15min内各
小鼠的扭体反应次数。
1.2.2 胃肠功能试验 ① 少花海桐对正常小鼠胃排
空和小肠推进运动的影响。取昆明小鼠 40只,随机
分为对照组(蒸馏水)、阳性药易蒙停 (6mg/kg)组和少
花海桐高、低剂量组,每组 10只,雌雄各半。小鼠禁
食(不禁水)24h,然后灌胃给药(ig)1次,给药后1h,灌
胃半固体营养糊 0.8g/只,20min后脱颈处死小鼠,开
腹,结扎胃喷门和幽门,取胃,用滤纸拭擦干后称全
重,然后沿胃大弯剪开胃体,洗去胃内容物后拭擦干,
称净重。以胃全重和胃净重的差值作为胃内残留物
重,计算胃内残留物占所灌半固体糊重量的百分比为
胃内残留率。同时迅速取出小肠,剥离肠系膜将小肠
拉直,测量幽门至回盲部的小肠全长及幽门至黑色半
固体糊前沿的距离。以幽门至黑色半固体糊前沿的
距离占幽门至回盲部全长的百分率作为小肠推进
率。② 少花海桐对新斯的明所致小鼠胃肠运动亢进
的影响 [5-6]。昆明小鼠 50只,随机分为对照组、模型
组、易蒙停(6mg/kg)组以及少花海桐高、低剂量组,每
组 10只,雌雄各半。ig给药,1次/d,连续 5d,对照组
和模型组 ig同体积蒸馏水,第4d给药后,小鼠禁食(不
禁水)24h,第 5d末次给药后 1h,模型组和各给药组小
鼠皮下注射(sc)甲硫酸新斯的明 0.15mg/ kg, 对照组
sc同体积生理盐水,20min后,ig半固体营养糊 0.8g/
只,20 min后脱颈处死小鼠,计算胃内残留率及小肠
推进率,方法同上。
1.2.3 止泻试验 少花海桐对蓖麻油引起的小鼠腹
泻作用的影响[7-10]。昆明小鼠 40只,随机分为对照组
(蒸馏水)、少花海桐高、低剂量组及易蒙停 6mg/kg
组,每组 10只,雌雄各半。ig给药,1次/d,连续 2d,末
次给药后1h,ig蓖麻油0.1mL/10g,立即把小鼠单个放
在垫有吸水纸的鼠笼内,记录小鼠的腹泻次数(稀便
点数),每小时记录1次,连续5h,然后统计5h内总的
腹泻次数。
1.2.4 统计方法 实验数据以均数±标准差(x±s)表
示,采用 SPSS16.0作统计学处理,两均数比较用 t检
验,显著性界值P=0.05。
2 结果
2.1 少花海桐对小鼠热板痛阈的影响 与对照组比
较,少花海桐高、低剂量和罗通定片(0.06g/kg)均能显
著提高小鼠热板痛阈值(P<0.01)。见表1。
2.2 少花海桐对醋酸所致小鼠扭体反应的影响 与对
照组比较,少花海桐高、低剂量和罗通定片(0.06g/kg)
均能够显著减少小鼠扭体反应次数(P<0.01)。见表
2。
组别
Groups
对照组Control group
罗通定组Positive group
少花海桐高剂量组PPH
少花海桐低剂量组PPL
剂量
Dose
(g/kg)
-
0.06
15.00
7.50
药前痛阈
Pain threshold before administration(s)
0h
10.74±3.61
10.66±1.62
10.34±3.16
10.95±2.51
药后痛阈
Pain threshold after administration(s)
1h
14.96±5.48
41.69±12.63**
39.17±15.74**
30.49±14.21**
2h
13.87±3.60
50.81±10.03**
42.18±14.53**
26.52±17.02*
表1 少花海桐对小鼠热板痛阈的影响 (x±s, n=10)
Table 1 Effects of water extraction and alcohol precipitation of Pittosporum pauciflorum on the pain induced by heat board in mice
(x±s, n=10)
注:与对照组比较:*P<0.05, **P<0.01.Note:compared to control group *P<0.05, **P<0.01.
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中国热带医学 2015年第15卷第02期 China Tropical Medicine,February 2015,Vol.15,No.02
组别
Groups
对照组Control group
罗通定组Positive group
少花海桐高剂量组PPH
少花海桐低剂量组PPL
剂量
Dose
(g/kg)
-
0.06
15.00
7.50
扭体次数(次)
Wring body
(No./ times)
37.30±9.42
10.50±5.44**
14.50±8.28**
24.80±7.71**
抑制率(%)
Inhibition
rate(%)
-
71.85
61.13
33.51
表2 少花海桐对醋酸所致小鼠扭体反应的影响(x±s,n=10)
Table 2 Effects of water extraction and alcohol precipitation of
Pittosporum pauciflorum on the wring body pain induced by
acetum in mice (x±s, n=10)
注:与对照组比较:*P<0.05, **P<0.01.Note:compared to control
group *P<0.05, **P<0.01.
2.3 少花海桐对正常小鼠胃排空和小肠推进运动的
影响 与对照组比较,少花海桐高、低剂量 ig给药 1
次,均能够显著提高正常小鼠胃内残留率和显著降低
小肠推进率(均P<0.01);对照药易蒙停 3mg/kg灌胃给
药 1次,也能够显著提高正常小鼠胃内残留率(P<
0.01)和显著降低小鼠小肠推进率(P<0.05)。见表3~4。
2.4 少花海桐对新斯的明所致小鼠胃肠运动亢进的
影响 与对照组比较,模型组小鼠胃内残留率显著降
低(P<0.01),小肠推进率显著升高(P<0.01);与模型
组比较,少花海桐高、低剂量给药 5d,能够显著升高
小鼠胃内残留率(P<0.01)和显著降低小鼠小肠推进
率(P<0.01);易蒙停6mg/kg剂量能够显著升高小鼠胃
内残留率(P<0.01),显著降低小鼠小肠推进率(P<
0.05)。见表5~6。
2.5 少花海桐对蓖麻油引起的小鼠腹泻作用的影响
与对照组比较,少花海桐高、低剂量和易蒙停 6mg/kg
灌胃给药 2d,均能够显著减少 ig蓖麻油后 5h内小鼠
的腹泻次数(P<0.01)。见表7。
组别Groups
对照组Control group
易蒙停组Positive group
少花海桐高剂量组PPH
少花海桐低剂量组PPL
剂量Dose(g/kg)
-
0.06
15.00
7.50
胃+内容物(g)Overall weight
0.62±0.10
0.78±0.08
1.07±0.08
0.82±0.07
胃净重(g)Gastric weight
0.26±0.04
0.25±0.03
0.26±0.04
0.25±0.01
胃内残留率(%)Inside retention
45.45±12.24
66.10±9.95**
101.24±9.56**
71.39±10.02**
表3 少花海桐对正常小鼠胃排空的影响(x±s,n=10)
Table 3 Effects of water extraction and alcohol precipitation of Pittosporum pauciflorum on the gastric emptying in normal mice
(x±s, n=10)
注:与对照组比较:*P<0.05, **P<0.01。Note: compared to control group *P<0.05, **P<0.01.
组别Groups
对照组Control group
易蒙停组Positive group
少花海桐高剂量组PPH
少花海桐低剂量组PPL
剂量
Dose(g/kg)
-
0.06
15.00
7.50
小肠长度(cm)
The length of small intestine
55.72±4.47
54.64±2.51
55.60±2.01
54.32±3.81
炭末推进距离(cm)
Charcoal powder propelling distance
28.43±6.85
21.24±5.37
0.00±0.00
14.56±5.80
小肠推进率(%)
Charcoal powder propelling rate(%)
51.22±12.38
38.61±8.35*
0.00±0.00**
26.94±11.08**
表4 少花海桐对正常小鼠小肠推进运动的影响(x±s,n=10)
Table 4 Effects of water extraction and alcohol precipitation of Pittosporum pauciflorum on the small intestine propulsion in normal mice
(x±s, n=10)
注:与对照组比较:*P<0.05, **P<0.01。Note: compared to control group *P<0.05, **P<0.01.
表5 少花海桐对新斯的明所致小鼠胃排空运动亢进的影响(x±s,n=10)
Table 5 Effects of water extraction and alcohol precipitation of Pittosporum pauciflorum on the gastric emptying in neostigmine mice
(x±s, n=10)
组别Groups
对照组Control group
模型组Model group
易蒙停组Positive group
少花海桐高剂量组PPH
少花海桐低剂量组PPL
剂量Dose(g/kg)
-
-
0.06
15.00
7.50
胃+内容物(g)Overall weight
0.63±0.10
0.47±0.13
0.64±0.16
0.96±0.11
0.81±0.10
胃净重(g)Gastric weight
0.24±0.03
0.23±0.04
0.24±0.03
0.24±0.03
0.25±0.01
胃内残留率(%)Inside retention
48.59±14.15**
29.18±15.79
50.40±17.55**
90.07±13.71**
70.39±11.55**
注:与模型组比较:*P<0.05, **P<0.01。Note: compared to model group *P<0.05, **P<0.01.
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中国热带医学 2015年第15卷第02期 China Tropical Medicine,February 2015,Vol.15,No.02
组别Groups
对照组Control group
易蒙停组Positive group
少花海桐高剂量组PPH
少花海桐低剂量组PPL
剂量
Dose(g/kg)
-
0.06
15.00
7.50
腹泻次数(次)
diarrhea number of times 0-5h
9.20±3.61
4.30±2.26**
1.90±1.73**
3.90±3.31**
表7 少花海桐对蓖麻油引起的小鼠腹泻作用的影响
(x±s,n=10)
Table 7 Effects of water extraction and alcohol precipitation of
Pittosporum pauciflorum on diarrhea by castor oil in mice
(x±s, n=10)
注:与对照组比较:**P<0.01.
Note: compared to controol group,**P<0.01
3 讨论
经本院多位专家调查认定,广西地区民间以“上
山虎”入药的植物为海桐花科南海桐花属植物少花海
桐(Pittosporum pauciflorum Hook.et Arn.)。曾有临床研
究,用“上山虎”伤湿止痛膏治疗膝骨性关节炎,可有
效减轻膝关节肿胀程度,减少滑膜厚度,疗效较好[11]。
本次研究结果可见,少花海桐能够显著提高小鼠
热板痛阈值和显著减少醋酸所致小鼠扭体反应次数,
提示少花海桐的水提醇沉提取物对慢性及急性疼痛
具有明显的镇痛作用。胃肠功能研究结果可见,少花
海桐水提醇沉提取物能够显著抑制正常小鼠胃排空、
小肠推进运动以及新斯的明所致的小鼠胃排空、小肠
推进运动亢进。新斯的明为胆碱酯酶抑制剂,通过抑
制胆碱酯酶的活性导致乙酰胆碱的蓄积,从而产生
Ach样作用,胃肠功能方面的表现如胃排空、小肠推
进运动亢进,本次研究结果提示少花海桐可能是通过
直接抑制肠道过强蠕动及对抗Ach等途径而发挥止
泻作用。蓖麻油属刺激性泻药,可通过引起肠道炎
症,促进炎症介质合成和释放,致使肠腔积液并加快
肠蠕动从而导致腹泻[7-10]。少花海桐也能够显著减少
蓖麻油引起的小鼠腹泻次数,提示其对一般肠炎性腹
泻有治疗作用。
参考文献
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收稿日期:2014-11-11 编辑:谢永慧
表6 少花海桐对新斯的明所致小鼠小肠运动亢进的影响(x±s,n=10)
Table 6 Effects of water extraction and alcohol precipitation of Pittosporum pauciflorum on the small intestine propulsion in neostigmine
mice (x±s, n=10)
组别Groups
对照组Control group
模型组Model group
易蒙停组Positive group
少花海桐高剂量组PPH
少花海桐低剂量组PPL
剂量
Dose(g/kg)
-
-
0.06
15.00
7.50
小肠长度(cm)
The length of small intestine
52.09±3.70
53.47±3.22
52.92±4.49
53.12±4.09
53.90±4.44
炭末推进距离(cm)
Charcoal powder propelling distance
28.77±5.73
39.03±8.49
32.25±6.25
14.95±13.71
25.33±4.52
小肠推进率(%)
Charcoal powder propelling rate(%)
55.44±11.76**
72.83±14.51
60.74±9.33*
28.23±26.11**
47.06±8.07**
注:与模型组比较:*P<0.05, **P<0.01。Note: compared to model group *P<0.05, **P<0.01.
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