全 文 ：　文章编号:　1007-6611(2007)07-0610-02
紫外分光光度法测定水蔓菁中总黄酮的含量
杜　艳 , 　丁　红＊ , 　赵　艳 , 　张静芳　(山西医科大学药学院药剂教研室 , 　太原　030001;　＊通讯作者)
摘要:　目的　建立水蔓菁中总黄酮的含量测定方法。 　方法　采用紫外分光光度法 , 以芦丁为对照品 , 测定波长为410 nm。
　结果　芦丁在 3.1-24.8 μg/ ml范围内线性关系良好 , 回归方程为 A =34.9×10-3 c-0.000 5 , r =0.999 9;精密度 RSD=
0.3%;平均回收率在 98.0%-102.0%之间。 　结论　该方法准确 、可靠 , 可以用于水蔓菁药材的质量控制。
关键词:　分光光度法 ,紫外线;　水蔓菁;　总黄酮;　含量测定
中图分类号:　R927.2　　　文献标识码:　A
Determination of total flavonoid in Veronica linariifolia by ultraviolet spectrophotometry
DU Yan , DING Hong , ZHAO Yan , et al (Dept of Pharmaceutics , College of Pharmacy , S han xi Medical University , Taiyuan
030001 , China)
Abstract:　Objective　To establish a me thod for determining the content of total flavonoid in Veronica linarii folia.　Methods 　
Ultraviolet spectrophotometry method was used with rutin as reference substance and the waveleng th was 410 nm.　Results　Linear
range of rutin was 3.1-24.8μg/ml , A=34.9×10-3 c-0.000 5 , r=0.999 9 , and RSD of precision w as 0.3%.Mean recovery
was 98.0%-102.0%.　Conclusion 　The method is accura te and credible , and it can be used to contro l the quality of Veronica
linarii folia.
Key words:　spectrophotometry , ultraviolet;　Veronica linariifolia ;　total flavonoid;　content determination
　　水蔓菁为玄参科细叶婆婆纳属水蔓菁(Veroni-
ca linarii folia),主要化学成分为木犀草素 、芹黄素 、
木犀草素苷等黄酮类化合物 ,具有清热解毒 、利尿 、
止咳化痰等作用。临床用于治疗慢性气管炎 、肺化
脓症 、咳吐脓血 、急性肾炎 、尿路感染[ 1] 。目前 ,国
内外对水蔓菁的报道大多是关于化学成分的研究 ,
未见到有关其含量测定的报道 。本文采用可见分
光光度法建立了水蔓菁中总黄酮的含量测定方
法[ 2-5] ,为合理开发利用水蔓菁资源提供质量评价
手段。本方法准确 、简便 ,精密度 、重现性好 ,可用
于水蔓菁药材的质量控制。
1　材料与仪器
1.1　材料　水蔓菁药材(购自山西万荣 ,经山西省
药检所鉴定为玄参科细叶婆婆纳属水蔓菁),芦丁
对照品(中国药品生物制品检定所 ,批号:0080-
9705);其他试剂为分析纯。
1.2　仪器　752型紫外分光光度计(上海菁华科技
仪器有限公司);KQ3200DE 超声波仪(昆山市超声
仪器有限公司);RE-52AA型旋转蒸发仪(上海亚荣
仪器厂);KDM 型电热套(甄城华鲁电热仪器有限
公司)。
2　方法与结果
2.1　溶液的制备
2.1.1　对照品溶液的制备　精密称取干燥至恒重
的芦丁对照品适量置容量瓶中 ,加 60%乙醇超声溶
解并定容 ,制得浓度为 0.062 mg/ml的芦丁对照品
溶液 。
2.1.2　供试品溶液的制备　精密称取水蔓菁药材
1 g 置锥形瓶中 ,加 60%乙醇 30 ml ,超声提取 30
min ,过滤 ,取续滤液 1 ml置 50 m l容量瓶 ,加 60%
乙醇至刻度 ,摇匀 ,即得 。
2.2　测定波长的选择　精密量取对照品溶液 1.0
ml于 10 ml量瓶中 , 加入 0.1 mol/L AlCl3 溶液 2
ml ,0.1 mol/L KAc 溶液 3 ml ,加 60%乙醇至刻度 。
显色30 min后以60%乙醇液为空白 ,在200-500 nm
波长范围扫描 ,结果测得在410 nm处有最大吸收。
2.3　线性关系的考察　精密量取芦丁对照品溶液
0.5 , 1.0 , 2.0 , 3.0 , 4.0 ml ,分别置 10 ml量瓶中 ,各
加 0.1 mol/L AlCl3 溶液 2 ml ,0.1 mol/L KAc溶液
3 m l ,加60%乙醇至刻度 ,摇匀 ,放置 30 min ,在 410
nm 处测定吸收度 。以吸收度(A)为纵坐标 ,芦丁浓
度(c)为横坐标绘制标准曲线 ,计算得回归方程:A
　　　基金项目:　山西医科大学大学生创新基金(200677)
·610· 　山西医科大学学报 (J Shanxi Med Univ)2007 年 7 月 , 38 (7)　
=34.9×10-3 c -0.000 5 , r =0.999 9 ,结果芦丁
浓度在 3.1-24.8 μg/ml范围内与吸收度线性关系
良好 ,结果见图 1。
2.4　精密度试验　取芦丁对照品溶液 2 ml ,置于
10 ml量瓶中 ,按“2.3线性关系的考察”项下方法连
续测定 5次 ,测得精密度 RSD=0.3%,表明仪器的
精密度良好 ,结果见表 1。
表 1　　精密度试验结果　(n =5)
Tab 1　　Results of precision test
1 2 3 4 5 RSD(%)
A 0.369 0.368 0.371 0.368 0.369 0.3
2.5　重复性试验　取同一批水蔓菁药材 ,按供试
品溶液的制备方法 ,平行制备 6 份供试品溶液 ,按
“2.3线性关系的考察”项下方法操作。结果 RSD=
0.7%,表明重现性良好 ,结果见表 2。
表 2　　重复性试验结果　(n =6)
Tab 2　　Results of reproducibility test
1 2 3 4 5 6 RSD(%)
A 0.520 0.516 0.527 0.523 0.519 0.523 0.7
2.6　稳定性试验　吸取芦丁对照品溶液 ,加显色
剂显色 30 min后 ,于0 , 1 , 2 , 3 , 4 , 5 , 6 h进行总黄
酮含量测定 ,记录各次吸光度值。结果表明 ,样品
在 6 h内稳定性良好 ,结果见表 3。
表 3　　稳定性试验结果
Tab 3　　Results of stability test
0 h 1 h 2 h 3 h 4 h 5 h 6 h
A 0.321 0.321 0.322 0.322 0.322 0.322 0.322
2.7　回收率试验　精密称取水蔓菁药材适量 ,分
别加入高 、中 、低三种剂量的芦丁对照品 ,按供试品
溶液的制备方法制备。同“2.3线性关系的考察”项
下操作 ,测定总黄酮含量 ,计算回收率 。结果平均
回收率在 98.0%-102.0%之间 ,表明方法准确 ,结
果见表 4。
表 4　回收率测定结果　(n =9)
Tab 4　　Results of recovery test
No. 样品量(m g)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均值
(%)
RSD
(%)
1 1.82 1.47 3.31 　101.4 99.8 1.4
1.82 1.48 3.29 99.3
1.82 1.45 3.25 98.6
2 1.82 1.78 3.59 99.4 99.9 1.7
1.82 1.77 3.62 101.7
1.82 1.89 3.68 98.4
3 1.82 2.18 4.02 100.9 100.8 0.3
1.82 2.24 4.08 100.9
1.82 2.25 4.08 100.4
2.8　水蔓菁药材的含量测定　取三批水蔓菁药材
粉末 ,每批精密称取 1.0 g ,按供试品溶液的制备方
法制备 ,同“2.3线性关系的考察”项下操作 ,计算总
黄酮含量 ,结果见表 5 。水蔓菁药材中总黄酮含量
以芦丁折算平均为 2.41%。
表 5　　样品测定结果　(n =3)
Tab 5　　Results of sample determination
No 样品含量(%) 平均含量(%) RSD(%)
040901 2.41
040902 2.39 2.41 0.8
040903 2.43
3　讨论
3.1　根据资料黄酮类化合物在 254 nm 和 410 nm
处均有吸收 ,但在 254 nm 处干扰多 ,故选择在 410
nm 波长处测定。分光光度法的线性 、稳定性 、精密
度 、重现性 、回收率均较好 ,表明方法可靠 、灵敏 ,可
以作为水蔓菁药材质量控制的方法。
3.2　在制备供试品溶液时 ,对药材中总黄酮的提
取采用 60%乙醇超声提取法和 60%乙醇回流提取
法进行了比较 , 结果回流法所得总黄酮含量为
2.16%,所用时间为 2 h ,超声法所得总黄酮含量为
2.41%,所用时间为 30 min ,可见超声法提取水蔓
菁中总黄酮时间短 、提取率高。所以采用超声法提
取水蔓菁中总黄酮 。
参考文献:
[ 1] 　江苏新医学院.中药大辞典[M] .上海:上海科技出版社,1986:1032.
[ 2] 　霍丹群,张杰.超声波法与热提取法提取山楂总黄酮的比较研
究[ J] .中成药, 2004 , 26(12):1063-1065.
[ 3] 　周正华.黄蜀葵花中总黄酮的含量测定[ J] .现代中药研究与实
践 , 2005 , 19(1):52-53.
[ 4] 　杨荣平 ,李琳.紫外分光光度法测定补骨脂中总黄酮含量[ J] .
中国药业 , 2007 , 16(1):22-23.
[ 5] 　揭金阶.罗布麻叶总黄酮类化合物的提取及含量测定[ J] .中国
医院药学杂志 , 2006 , 26(12):1490-1491.
作者简介:　杜艳 , 女 , 1980-11生 , 硕士 ,助教.
[ 收稿日期:　2007-03-05]
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