全 文 ：不同产地卫矛中总黄酮的含量测定＊
赵占义　董陆陆■
(哈尔滨医科大学药学院·哈尔滨 150086)
摘　要　目的:测定不同产地卫矛中总黄酮的含量 , 为合理利用该药材提供依据。 方法:以芦丁为标准
品 ,采用分光光度法测定卫矛药材中总黄酮的含量。结果:山东 、黑龙江 、山西 、北京 、云南 、湖南 、河南 、吉
林 、江苏 、上海产卫矛中总黄酮的含量分别为:0.180、0.229、0.063 、0.283 、0.211 、0.238.0.148、0.117 、0.287 、
0.175%。结论:不同产地卫矛中总黄酮的含量差异较大 , 应注意生长环境对药材质量的影响。
主题词　卫矛 分析　总黄酮
＊黑龙江省科技攻关项目 No.GC04C50103
■通讯作者
　　卫矛系卫矛科植物卫矛 Euonyrnus alatus(Thuhb)sieb 具
翅状物的枝条或翅状附属物 ,又名鬼箭羽 , 其味苦性寒 , 全国
各地均有出产[ 1] 。临床用于治疗糖尿病 、高血脂症等 , 效果
显著[ 2] 。卫矛的主要活性成分为总黄酮 ,药理研究表明其具
有降血糖 、抗心肌缺血 、调节血脂等作用[ 3～ 5] 。由于生长环
境的不同 , 其有效成分的含量可能存在较大差异 , 为了确保
其药理作用和临床疗效 ,以卫矛药材中的总黄酮为有效指标
成分 , 对 10 个不同产地的卫矛药材中总黄酮含量进行了测
定 ,其结果可作为该药材质控的重要指标之一 。另外通过测
定得知 ,药材根部总黄酮含量很低 , 无直接药用价值 ,这为保
护该药用资源提供了科学依据。
1　实验材料
UV-2550 型紫外-可见分光光度计:日本岛津;RE-
52C 型旋转蒸发仪:巩义市英峪予华仪器厂;SHB-Ⅲ型循环
水式多用真空泵:巩义市予华仪器有限责任公司;KQ-25OB
型超声仪:昆山市超声仪器有限公司;AL104 型电子分析天
平:METTLER TOLEDO公司。 芦丁:中国药品生物制品检定
所 ,批号:100080-200306;卫矛药材(产地:山东 、黑龙江 、山
西 、北京 、云南 、湖南 、河南 、吉林 、江苏 、上海),卫矛根部药材
(产地:黑龙江),经黑龙江省药检所鉴定为卫矛正品;其他试
剂均为分析纯。
2　方法与结果
2.1　供试品溶液的制备[ 6] 　将各种卫矛药材 , 经干燥并适
当粉碎后 , 分别称取 5.0g , 用 60%乙醇 50ml进行回流提取 3
次 ,每次 1.5 小时。将提取液合并 , 4℃下静置 10 小时 , 抽滤
两次 ,减压蒸发至 15ml ,再静置 24 小时后 , 抽滤两次 ,将滤液
减压蒸干。最后将干燥粉末定溶于 30ml的 60%乙醇中 , 超
声助溶后作为供试品溶液备用。
2.2　标准品溶液的制备　精密称取芦丁标准品 0.0050g , 用
60%的乙醇定容于 50ml容量瓶中。
2.3　标准曲线的建立　准确吸取 0.0、1.0、2.0、3.0 、4.0、
5.0ml标准品溶液置于 1Oml 容量瓶中 , 分别加入一定量的
30%乙醇使成 5.0ml。先加 5%NaNO2 溶液 0.3ml , 摇匀 ,放置
6分钟;再加 10%Al(NO)3 溶液 0.3ml , 摇匀 , 再放置 6 分钟;
加 4%NaOH 溶液4.0ml , 用超纯水稀释至10ml , 放置10 分钟 ,
在 510nm 处测定吸光度 ,以对照品芦丁质量浓度与吸光度作
线性回归 , 得芦丁质量浓度 C(mg/ L)与吸光度 A 的标准曲
线 ,结果如图 1 所示。 回归方程及相关系数分别为 Y=
0.0089X-0.0188 , r=0.9997 , 表明芦丁浓度在 0～ 50mg/ L之
间 ,线性关系良好。
图 1　芦丁标准曲线
2.4　方法学考察
精密度考察:取标准品溶液 ,按标准曲线制备方法显色 ,
在 510nm 波长处连续测定 5次 , 吸光度的 RSD为 0.657%,说
明仪器的精密度良好。
重现性考察:平行制备 5 份供试品溶液(黑龙江), 按标
准曲线制备方法显色。在 510nm 波长处分别测定 , 吸光度
RSD为 0.887%,说明方法的重现性较好。
稳定性试验:取供试品溶液(黑龙江), 按标准曲线制备
方法显色 , 分别于 0 、10 、20、30、40 分钟时测定 , 吸光度 RSD
为 1.383%,说明样品溶液在 40 分钟内稳定性较好。
加样回收率的考察:精密称取已知含量的样品(黑龙江)
6份 , 分别精密加入一定量芦丁对照品 , 按样品测定方法处
理。在 510nm 处测定吸光度 , 其回收率的平均值为 99.71%
(n=6 , RSD=1.086%),表明方法回收率较好。
2.5　总黄酮含量的测定
2.5.1　不同产地卫矛中总黄酮含量测定
精密量取各供试品溶液 1.0ml , 按标准曲线制备方法显
色 ,利用上述标准曲线测定其浓度 C(mg/ L)。按下式计算各
·229·中国中医药科技 2010年 5 月第 17卷第 3 期 May 2010 Vol.17 No.3
药材总黄酮的百分含量 ,结果见表 1。
总黄酮含量=C×10×0.03
5.0×1000 ×100%
表 1 不同产地卫矛药材中总黄酮含量测定(n=3)
产地 总黄酮含量(%) RSD(%) 产地 总黄酮含量(%) RSD(%)
山东 0.180 1.667 湖南 0.238　 1.112
黑龙江 0.229 1.903 河南 0.148　 1.171
山西 0.211 0.821 吉林 0.175　 0.571
北京 0.283 1.619 江苏 0.287　 0.604
云南 0.063 1.587 上海 0.117　 1.480
2.5.2　卫矛根部总黄酮含量测定　本实验测定了黑龙江产
卫矛药材根部总黄酮的含量为 0.040%(n =3 , RSD =
1.43%)。
3　结论
从本研究测得各产地药材中总黄酮的百分含量可以清
楚地看出 ,由于产地的不同 , 有效成分含量差异显著 ,其中江
苏 、北京产卫矛药材中总黄酮含量较高 ,云南产卫矛药材中
总黄酮含量最低 , 提示在用药时应注意产地与药材质量的关
系。卫矛根部总黄酮测定结果表明总黄酮含量极低 , 直接的
药用价值不大 ,所以在开发利用此药材时 , 没有必要采集其
根部。该研究为合理开发该药材提供了一定的数据资料。
参考文献
1　中国药材公司编著.中国中药资源志要.北京:科学出版社 ,
1994:694.
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(24):1895.
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量及药效的影响.中医药学报 , 2000 , 28(2):72.
5　申风玉 , 林克勤 , 朱大元 , 等.卫矛有效成分的研究.中草药 ,
1982, 13(10):42.
6　孙学斌 ,程明 ,李娜 ,等.卫矛不同有效部位总黄酮含量及抗氧化
性的研究.植物研究 , 2007, 27(5):619. (收稿:2009-04-24)
黄芪对小鼠抗体形成细胞作用的实验研究
王志强　(滨州医学院·烟台 264003)
　　1　材料和方法
1.1　仪器和药物　低温冷冻离心机:Beckman ,美国;722 分光光度
计:上海光学仪器进出口公司。绵羊红细胞 ,新鲜豚鼠血清(补体),
小牛血清 ,结晶紫溶液 ,羊抗鼠 IgG 。黄芪:购于滨州医学院附属医
院中药房 ,取 100g加水 1000ml , 文火煎煮 1小时, 去渣浓缩为 100ml
(浓度为 100%)备用。
1.2　实验动物分组及给药　取 BALB C纯系小鼠 24只 , 体重 18～
22g ,雌雄各半。随机分为两组 , 每组 12只。即生理盐水对照组 , 予
等体积生理盐水;药物实验组 ,予黄芪液。两组均每天 1次 ,每只每
次 0.5ml灌胃 ,共灌 10次。
1.3　观察指标及检测
1.3.1　抗体形成细胞　定量溶血分光光度测定法(QHS)[1] 。本法
体外测定 B细胞产生分泌抗体裂解红细胞所释放的血红蛋白量(以
OD)值表示),其结果可反映机体体液免疫功能。实验第 5天分别将
5%的绵羊细胞 0.2ml注入各组小鼠腹腔内。第 11天颈椎脱臼处死
小鼠 ,常规取脾脏 ,然后进行脾细胞计数 , 调整细胞浓度至 1×107
ml ,平均每组每只小鼠设 3支试管 ,每管依次加脾细胞悬液 , 0.2%绵
羊红细胞(SRBC)、1:10新鲜豚鼠血清(补体)各 1ml混匀。另外分别
设补体 、脾细胞以及 SRBC对照管各 3支 , 置 37℃水浴温育 1 小时 ,
2000r min离心 5分钟 , 取上清液用 722分光光度计于波长为 430nm
处测定 OD值。
1.3.2　特异玫瑰花结形成细胞检测(SRFC)[1 ,2] 　取脾细胞 0.1ml(1
×107 ml);1%SRFC 0.1ml ,小牛血清 0.1ml ,试管内混匀 , 4℃放置 2
小时 ,加结晶紫溶液 20μl ,计数 500个淋巴细胞 ,求出 SRFC 106 脾细
胞的形成率。
1.3.3　血清 IgG 检测[ 3] 　采用对流免疫电泳试验。摘除小鼠眼球
取血 ,分离血清 ,取不同稀释度血清 10μl ,将对流免疫电泳通电 30分
钟后观察结果 ,以血清最高稀释度仍有明显沉淀线为准。结果以稀
释度表示。
2　结果　见表 1。
表 1 黄芪对抗体形成细胞 、特异玫瑰花结形成及
血清 IgG水平的影响(x±s)
组别 n OD 值 　SRFC 106 　IgG(mg·ml-1)
对照组 12 　0.425±0.071 　18871.0±725.1 　　　13.20±2.36
黄芪组 12 0.525±0.069＊ 28460.3±162.3＊＊ 　　19.34±3.18＊＊
　　t 检验;与对照组比较＊P<0.05 , ＊＊P<0.01
　　3　讨论　黄芪是临床常用中药 ,现代研究[ 4] 表明:黄芪能提高进小
鼠诱生干扰素的能力 ,提高干扰素滴度;增强单核-巨噬细胞系统的
功能;促进实验动物产生抗体 , 并能提高感冒易感者鼻分泌物中
IgA 、IgG的含量;对感染呼吸道病毒的小鼠有一定保护作用 , 也抑制
这些病毒的繁殖;对葡萄球菌 、溶血性链球菌 、肺炎双球菌等有抑制
作用。本研究重点从细胞及分子水平探讨黄芪对抗体形成细胞 、IgG
分子的影响。实验证明,黄芪能增强小鼠抗体形成细胞(B细胞)活
性 ,促进 B细胞分化 、增殖为浆细胞;药物组与对照组相比有显著性
差异(P<0.05),黄芪组 SRFC数目明显高于对照组 , 与对照组相比
有非常显著性差异(P<0.01),黄芪可使小鼠血清 IgG 含量增加 ,与
对照组相比有非常显著性差异(P<0.01)。黄芪可明显增强机体免
疫功能。提示如机体免疫功能下降者或肿瘤辅助治疗者可长期口
服黄芪以增强免疫功能。
　　参考文献
1　徐淑云.药理学实验方法.第 2版 ,北京:人民卫生出版社 , 1992:
230.
2　邱世翠 ,高法彬 ,彭启海 ,等.枸杞对抗体形成细胞的作用.时珍
国医国药, 2001 , 12(7):585.
3　高美华 ,冯献启 ,李波清 ,等.磁场对 SP2 O瘤鼠抗体形成细胞的
作用研究.中华理疗杂志 ,1998 , 21(4):225.
4　曲京峰 ,张少华主编.中药学.北京:科学出版社 ,1994:303.
(收稿:2008-12-05)
·230· 中国中医药科技 2010 年 5月第 17卷第 3 期 May 2010 Vol.17 No.3