全 文 ：RP-HPLC法测定天山花楸果实中苦杏仁苷 、
芦丁 、金丝桃苷和橙皮苷的含量＊
张薇 1 ,常军民 1＊＊ ,沈美英2 ,朱美玲2
(1.新疆医科大学药学院 ,乌鲁木齐 830054;2.新疆西域药业有限公司 , 乌鲁木齐 830011)
摘要　目的:建立同时测定维吾尔药材天山花楸果实中苦杏仁苷 、芦丁 、金丝桃苷和橙皮苷含量的 RP-HPLC分析方法 。
方法:采用 Shim-packVP-ODS(250 mm×4.6 mm, 5 μm)色谱柱 , 以乙腈(A)-0.05%磷酸水溶液(B)(三乙胺调 pH
3.0)为流动相进行梯度洗脱(0 ～ 5min, 9%A※10%A;5 ～ 30 min, 10%A※ 15%A;30 ～ 35 min, 15%A※ 17%A;35 ～ 50 min,
17%A※ 21%A;50 ～ 60 min, 21%A),流速 1.0 mL· min-1 , 检测波长 215 nm,柱温 25℃。结果:苦杏仁苷 、芦丁 、金丝桃苷和橙
皮苷进样量分别在 0.44 ～ 4.40, 0.05 ～ 0.48, 0.13 ～ 1.26, 0.04 ～ 0.42 μg范围内 ,与色谱峰面积呈良好线性关系(r>0.9995,
n=7);平均回收率(n=9)分别为 99.5%, 99.3%, 100.1%, 99.2%。结论:本法简便 、准确 ,重复性好 ,可用于天山花楸药材的
质量控制。
关键词:天山花楸;苦杏仁苷;芦丁;金丝桃苷;橙皮苷;反相高效液相色谱法
中图分类号:R917　　　文献标识码:A　　　文章编号:0254-1793(2011)05-0935-03
RP-HPLCdeterminationofamygdalin, rutin, hyperosideand
hesperidininfruitofSorbustianschanicaRupr.＊
ZHANGWei1 , CHANGJun-min1＊＊ , SHENMei-ying2 , ZHUMei-ling2
(1.PharmacyColege, XinjiangMedicalUniversity, Urumqi830054, China;
2.XinjiangXiyuPharmaceuticalCorporationLTD., Urumqi830011, China)
Abstract　Objective:TodevelopanRP-HPLCmethodforthedeterminationofamygdalin, rutin, hyperosideand
hesperidininfruitofSorbustianschanicaRupr.Methods:TheanalysiswascarriedoutonaShim-packVP-ODS
(250 mm×4.6 mm, 5 μm)column.Themobilephasewascomposedofacetonitrile(A)andwatercontaining
0.05% phosphoricacid(B)(adjustedtopH3.0 withtriethylamine)withgradientelution(0-5 min, 9%A※10%
A;5-30 min, 10%A※15%A;30-35 min, 15%A※17%A;35-50 min, 17%A※21%A;50-60 min, 21%A)
andtheflowratewas1.0 mL· min-1.Thedetectionwavelengthwas215 nmandthecolumntemperaturewas
25℃.Results:Thelinearrangesofamygdalin, rutin, hyperosideandhesperidinwere0.44 -4.40, 0.05 -0.48,
0.13-1.26 , 0.04 -0.42 μgrespectively(r>0.9995, n=7).Theaveragerecoveries(n=9)were99.5%,
99.3%, 100.1% and99.2% respectively.Conclusion:Themethodissimple, accurate, andrepeatableforsimulta-
neousdeterminationofamygdalin, rutin, hyperosideandhesperidininfruitofSorbustianschanicaRupr.
Keywords:SorbustianschanicaRupr.;amygdalin;rutin;hyperoside;hesperidin;RP-HPLC
天山花楸(SorbustianschanicaRupr.)系蔷薇科
花楸属植物 ,收载于 《新疆药品标准》(第一册),是
维吾尔族和哈萨克族民间习用的一种药材 ,常以果
实 、嫩枝叶和茎皮入药 ,具有清热利肺 、补脾生津 、
止咳的功效 ,临床上主要用于肺结核 、哮喘 、咳嗽 、
胃炎 、胃痛等症的治疗 [ 1] 。天山花楸有效成分主
要为黄酮类和氰苷类 ,芦丁 、金丝桃苷 、橙皮苷均
为黄酮类 ,具有抗炎 、凉血 、清热解毒等多种生物
活性;苦杏仁苷为氰苷类 ,具有祛痰 、止咳 、平喘等
药理活性 [ 2] 。文献报道中对天山花楸枝叶单一成
分或 2个成分进行 HPLC含量测定方法较多 [ 3 ～ 5] ,
但同时对果实中 4个有效成分进行 HPLC含量测
—935—药物分析杂志 ChinJPharmAnal2011, 31(5)
＊
＊＊
新疆维吾尔自治区高校科研计划项目(编号:XJEDU2005119)
通讯作者　Tel:(0991)4365317;E-mail:cjmcjn2471@sohu.com
DOI :10.16155/j.0254-1793.2011.05.023
定的方法尚未见报道 ,本文建立 HPLC法同时测定
上述苦杏仁苷 、芦丁 、金丝桃苷 、橙皮苷 4个成分
的含量 ,为控制和评价该药材质量提供参考分析
资料 。
1　仪器与试药
LC-2010A型高效液相色谱仪 (日本岛津公
司);UV-2550型紫外 -可见分光光度计 (日本岛
津公司);BS110S电子天平(德国 Sartorius)。
乙腈为 Merck色谱纯 ,水为娃哈哈纯净水 ,其他
试剂均为国产分析纯 。
对照品苦杏仁苷(批号 110820-200403)、芦丁
(批号 100080-200707)、金丝桃苷(批号 111521-
200303)、橙皮苷 (批号 110721 -200512)均购自
中国药品生物制品检定所 ,天山花楸采自新疆呼
图壁林场 , 由新疆医科大学药学院帕丽达教授
鉴定 。
2　方法与结果
2.1　溶液的制备
2.1.1　混合对照品储备液　精密称取对照品苦杏
仁苷 、芦丁 、金丝桃苷 、橙皮苷适量 ,分别置于 25 mL
量瓶中 ,用甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,制得浓度
分别为 1100, 504 , 524, 524μg· mL-1的单一成分对
照品储备液 。精密量取上述 4个对照品储备液分别
为 5.0, 1.2, 3.0, 1.0 mL,置同一 25 mL量瓶中 ,以
甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,即得混合对照品储备液(每
1 mL含苦杏仁苷 220 μg,芦丁 24.19 μg,金丝桃苷
62.88 μg,橙皮苷 20.96 μg)。
2.1.2　供试品溶液　取干燥天山花楸果实粗粉约
5 g,精密称定 ,置 100 mL具塞锥形瓶中 ,加入乙醚
60 mL, 40℃加热回流脱脂至无色 ,药渣挥干后 ,加
入甲醇 60 mL, 40℃加热回流提取 3次 , 每次 60
min,提取液过滤 、合并 ,浓缩至约 60 mL后置 100
mL量瓶中 ,用甲醇定容至刻度 ,摇匀 ,以甲醇稀释 1
倍后过 0.45μm滤膜 ,取续滤液 ,即得 。
2.2　色谱条件　色谱柱:Shim-packVP-ODS(250
mm×4.6mm, 5μm);流动相:乙腈(A)-0.05%磷酸
水溶液(B)(三乙胺调 pH3.0),梯度洗脱(0 ～ 5 min,
9%A※ 10%A;5 ～ 30 min, 10%A※15%A;30 ～ 35
min, 15%A※17%A;35 ～ 50min, 17%A※21%A;50 ～
60min, 21%A);流速 1.0 mL·min-1;检测波长 215
nm;柱温 25℃;进样量 20μL。
2.3　系统适用性　在上述色谱条件下 ,苦杏仁苷 、
芦丁 、金丝桃苷 、橙皮苷色谱峰与相邻峰的分离度均
大于 1.5;理论板数均不低于 5000 ,结果见图 1。
图 1　对照品(A)及样品(B)高效液相色谱图
Fig1　HPLCchromatogramsofreferencesubstances(A)andsample(B)
1.苦杏仁苷(amygdalin) 2.芦丁(rutin) 3.金丝桃苷(hyperoside)
4.橙皮苷(hesperidin)
2.4　线性关系考察　精密量取上述混合对照品储
备液 1, 2, 4, 5 , 6, 8, 10mL,分别置于 10 mL量瓶中 ,
用甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,即得系列浓度混合对照品
溶液 ,分别精密吸取 20μL,按上述色谱条件进样测
定 ,以进样量 X(μg)对峰面积值 Y进行线性回归 ,
求得苦杏仁苷 、芦丁 、金丝桃苷 、橙皮苷回归方程
(n=7)分别为:
Y=8.94×105X-6.07×104　　r=0.9996
Y=2.73×106X+3.67×103　　r=0.9999
Y=4.34×106X-4.48×104　　r=0.9995
Y=3.52×106X+1.13×104　　r=0.9997
结果表明苦杏仁苷进样量在 0.44 ～ 4.40 μg,芦丁进
样量在 0.05 ～ 0.48 μg,金丝桃苷进样量在 0.13 ～
1.26 μg,橙皮苷进样量在 0.04 ～ 0.42 μg范围内与
峰面积具有良好的线性关系 。
2.5　精密度考察　取同一混合对照品溶液连续进
样 6次 ,记录峰面积 ,计算苦杏仁苷 、芦丁 、金丝桃
苷 、橙皮苷峰面积的 RSD(n=6)分别为 0.12%,
0.34%, 0.16%, 0.74%。
2.6　重复性试验 　取天山花楸药材样品 5 g,按
“2.1.2”项下方法操作 ,平行制备供试品溶液 6份 ,
在上述色谱条件下进行测定 ,苦杏仁苷 、芦丁 、金丝
桃苷 、橙皮苷含量平均值分别为 5.15, 0.45, 1.16,
0.43 mg· g-1;RSD分别为 1.2%, 0.95%, 0.77%,
—936— 药物分析杂志 ChinJPharmAnal2011, 31(5)
1.4%。
2.7　稳定性试验 　取同一份供试品溶液 ,室温静
置 ,分别在 0, 2, 4, 8, 12, 24 h进样测定。苦杏仁苷 、
芦丁 、金丝桃苷 、橙皮苷峰面积的 RSD分别为
1.2%, 1.8%, 0.83%, 1.5%,结果表明供试品溶液
室温放置 24 h内稳定。
2.8　加样回收率试验　分别精密称取 “ 2.6”项下
已测知含量的样品 9份 ,每份 2.5 g,按照样品中各
成分含量的 80%, 100%, 120%,精密加入混合对照
品溶液 4, 5, 6 mL,按 “ 2.1.2”项下方法制备所需溶
液 ,在上述色谱条件下进样测定 ,计算苦杏仁苷 、芦
丁 、金丝桃苷 、橙皮苷的回收率 ,结果见表 1。苦杏
仁苷 、芦丁 、金丝桃苷 、橙皮苷平均回收率(n=9)分
别为 99.5%, 99.3%, 100.1%, 99.2%。
表 1　加样回收率测定结果(n=3)
Tab1　Resultsoftherecoveries
成分
(component)
样品中含有量
(original)/μg
加入量
(add)/μg
平均值
(average)/% RSD/%
苦杏仁苷(amygdalin) 0.9778 1.4363 101.1 2.1
1.1000 1.2927 99.2 1.6
1.2000 1.1752 98.2 2.1
芦丁(rutin) 0.1075 0.1214 99.8 1.3
0.1210 0.1093 99.5 0.88
0.1320 0.0994 98.5 0.98
金丝桃苷(hyperoside) 0.2795 0.3172 100.7 1.7
0.3144 0.2855 98.7 2.4
0.3430 0.2595 100.9 2.1
橙皮苷(hesperidin) 0.0932 0.1238 100.8 1.7
0.1048 0.1114 98.8 1.6
0.1143 0.1013 98.1 0.77
2.9　样品含量测定　取样品 3批 ,按 “ 2.1.2”项下
方法制备供试品溶液 ,在上述色谱条件下进样测定 ,
记录峰面积 ,按外标法计算含量 。结果见表 2。
表 2　含量测定结果(mg· g-1 , n=3)
Tab2　Determinationresultsofsample
批号
(LotNo.)
苦杏仁苷
(amygdalin)
芦丁
(rutin)
金丝桃苷
(hyperoside)
橙皮苷
(hesperidin)
090708 5.11 0.43 1.13 0.43
090710 5.23 0.44 1.16 0.45
090711 5.17 0.44 1.13 0.44
3　讨论
3.1　检测波长的确定　以甲醇配制一定浓度的苦
杏仁苷 、芦丁 、金丝桃苷 、橙皮苷对照品溶液 ,在 190
～ 400 nm进行紫外扫描 ,苦杏仁苷仅在 215 nm处
有一最大吸收 ,芦丁 、金丝桃苷在 257 nm处 ,橙皮苷
在 283 nm处有最大吸收。芦丁 、金丝桃苷 、橙皮苷
在 215 nm处均有较强吸收 ,并且各峰分离效果好。
为保证定量的准确性 ,实验选择 215 nm为检测波
长。
3.2　流动相的选择　曾采用不同比例的甲醇 -水 、
甲醇 -磷酸溶液 、乙腈 -水 、乙腈 -磷酸溶液系统等
度 、梯度洗脱 ,比较分离效果和基线平稳情况 ,选择
乙腈 -磷酸溶液系统;同时本实验试用了 0.01%,
0.02%, 0.05%, 0.1%浓度的磷 酸 , 结果 显示
0.05%的磷酸(pH3.0)峰形对称性较好 ,故确定乙
腈 -0.05%磷酸溶液(pH3.0)为流动相 。
3.3　供试品溶液制备方法的考察　①石油醚 、乙醚
对样品前处理对比研究表明 ,乙醚可有效去除脂溶
性杂质;②以甲醇为溶剂分别考察超声及加热回流
2种提取方式 , 2种方法提取率相近 ,但加热回流提
取法各峰的分离效果优于超声提取法 ,因此选择加
热回流提取法 。③苦杏仁苷不稳定 ,故对加热回流
提取温度(40, 60, 80℃)、时间 (30, 60, 90 min)、提
取次数(2, 3, 4次)进行了考察 , 40℃加热回流提取
3次 ,每次 60 min条件下 , 4种有效成分均能得到充
分提取 ,为最佳提取工艺 。
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(本文于 2010年 8月 2日收到)
—937—药物分析杂志 ChinJPharmAnal2011, 31(5)