全 文 ：湖 北 农 业 科 学 2013 年
第 52卷第 19 期
2013年 10月
湖北农业科学
Hubei Agricultural Sciences
Vol． 52 No.19
Oct．，2013
收稿日期：2013－02－10
基金项目：成都大学校基金资助项目（2011XJZ18）
作者简介：邬晓勇（1975－），男，山西河曲人，副教授，主要从事植物天然产物及分子生物学研究，（电话）028－84616301（电子信箱）
cduwxysyx＠126．com。
欧李（Prunus humilis Bunge）为蔷薇科樱桃属
落叶小灌木， 是我国特有的果实和药食兼用树种。
其茎叶、果实、根皮具有很高的经济和药用价值。 欧
李种仁可以入药，具有利尿、助消化等功效，能治疗
消化不良、水肿、肠胃停滞等疾病［1－3］。欧李种仁中含
有大量的苦杏仁苷， 主要用于治疗慢性气管炎、急
慢性呼吸道感染和脓疱病 ［4］，与其他药物合用还可
治疗皮肤癌 ［5］；苦杏仁苷还具有抗凝血和抗氧化性
的作用［6］。
苦杏仁苷具有明确的生理、药理活性。 关于苦
杏仁苷分析检测的方法也比较完善，但国内对欧李
苦杏仁苷分离提取工艺的深入研究还较少，所以本
试验采用 HPLC法测定欧李种仁浓缩液中苦杏仁苷
的含量，利用 DPPH法测定苦杏仁苷的抗氧化性，以
期为欧李苦杏仁苷提取工艺的改进提供参考。
1 材料与方法
1．1 材料
试验于 2012 年 6 月在成都大学药食同源植物
资源开发重点实验室进行。 欧李采自成都大学欧李
种植基地。
将风干的欧李果实去果肉得到欧李种子，反复
淘洗将果肉和种子分开，把得到的欧李种子放入烘
箱中 50 ℃干燥 24 h。 干燥后人工去壳得到欧李种
仁，将欧李种仁放入烘箱中 50 ℃干燥 48 h，备用。
1．2 仪器与试剂
DIONEX－HPCL 高效液相色谱仪；UV－1800 紫
外分光光度计。
苦杏仁苷标准品（纯度大于 99．0％，中国药品生
物制品检定所）；无水乙醇、甲醇和石油醚（成都市
欧李种仁中苦杏仁苷的提取及其抗氧化活性
邬晓勇，孙雁霞，何 钢，赵 琦，苟小军
（成都大学药食同源植物资源开发重点实验室，成都 610106）
摘要：采用 HPLC 法测定欧李（Prunus humilis Bunge）种仁浓缩液中苦杏仁苷的含量，利用 DPPH 法测定
苦杏仁苷的抗氧化性。 结果表明，提取液中苦杏仁苷的浓度为 7．94 mg ／ mL；苦杏仁苷清除 DPPH 的能力
随着其浓度的降低而下降，当苦杏仁苷溶液浓度为 7．50 mg ／ mL 时清除率最高，为 90．9％。 欧李种仁浓缩
液经氯仿、乙酸乙酯和加热处理均能提高水相中苦杏仁苷的纯度。
关键词：欧李（Prunus humilis Bunge）；种仁；苦杏仁苷；高效液相色谱；抗氧化性
中图分类号：S662．3 文献标识码：A 文章编号：0439－8114（2013）19－4764-04
Extracting and Anti－oxidative Activity of Amygdalin from Kernel of
Prunus humilis Bunge
WU Xiao－yong，SUN Yan－xia，HE Gang，ZHAO Qi，GOU Xiao－jun
（The Key Laboratory of Medical and Edible Plants Resources Exploitation，Chengdu University， Chengdu 610106，China）
Abstract： The content of amygdalin of Prunus humilis Bunge was measured by HPLC and anti－oxidative activity of amygdalin
was measured by DPPH method． The results showed that the concentration of the amygdalin in the extract liquid was 7．94
mg ／ mL； the activity of scavenging DPPH declined with the decreasing concentration of amygdalin． The clearance rate was
highest at 90．9％ when the concentration of amygdalin was 7．50 mg ／ mL． The purity of amygdalin in water phase could be
enhanced when the concentrated solution of kernel was treated by chloroform， ethyl acetate and heating．
Key words： Prunus humilis Bunge； kernel； amygdalin； HPLC； anti－oxidative activity
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2013.19.067
第 19 期
科龙化工试剂厂）；DPPH （成都康普泰科技有限公
司），以上试剂均为分析纯。
1．3 方法
1．3．1 标准曲线的制作 准确称取 20 mg 苦杏仁苷
标准品置于 10 mL 容量瓶中， 用甲醇定容。 采用
UV－1800 紫外分光光度计多波长扫描检测苦杏仁
苷标准品的最大吸收波长。
标准曲线的制作： 精确称取 20 mg 苦杏仁苷标
准品置于 10 mL 容量瓶中，用甲醇定容。 准确量取
0．2、0．4、0．6、0．8、1．0 mL 分别置于 EP 管中， 分别加
入 0．8、0．6、0．4、0．2、0 mL 甲醇， 配制成终浓度分别
为 0．4、0．8、1．2、1．6、2．0 mg ／ mL 的系列标准品溶液。
采用 HPLC法测定不同浓度标准溶液， 得到相应的
峰面积。 以系列标准溶液的浓度（C）为横坐标，色谱
峰面积（A）为纵坐标，制作苦杏仁苷标准曲线。
色谱条件：色谱柱 C18柱；流动相，甲醇－水＝30∶
70；柱温 28 ℃；检测波长 220 nm；流速 1 mL ／ min；进
样量 10 μL。
1．3．2 欧李种仁中苦杏仁苷的提取及含量测定
取 100 g 干燥种仁粉碎。 将粉碎后的欧李种仁粉末
置于 1 000 mL 的烧瓶中，加入 230 mL 无水乙醇，恒
温水浴（80～90 ℃）回流 1 h，抽滤收集滤液，3 次重
复。 向合并滤液中加入少量蒸馏水，利用石油醚萃
取去除滤液中的油脂，待分层后取下层液体。 利用
旋转蒸发器将下层液体加热浓缩，得到苦杏仁苷浓
缩液，利用蒸馏水定容至 100 mL。分别取 1 mL上述
溶液于 2 支 EP 管中，离心处理，取 50 μL 上清液稀
释 30 倍，0．22 μm 微孔滤膜过滤， 利用 HPLC 法检
测苦杏仁苷的含量。
1．3．3 苦杏仁苷抗氧化性测定 0．6 mmol ／ L DPPH
溶液配制：精确称取 0．039 g DPPH，用 95％乙醇定
容至 50 mL，稀释 10倍后得到 0．6 mmol ／ L DPPH 溶
液备用。
反应体系：1 mL 待测液加入 2 mL 0．6 mmol ／ L
DPPH 和 2 mL 95％乙醇，以不加样品为对照，混匀
后于暗处反应 30 min； 另取 5 mL 95％乙醇作调零
对照； 在 517 nm 处测定吸光值 （A 值）。 配制 7．5
mg ／ mL 的苦杏仁苷提取液，进行二倍稀释得到 8 个
浓度梯度，分别为 7．5、3．75、1．875、0．937 5、0．468 8、
0．234 4、0．117 2、0．058 6、0．029 3 mg ／ mL。 将稀释后
溶液作为抗氧化性测定的待测液， 测定其吸光值
（A）［7］。
清除率＝（1－A 样品 ／A 空白）×100％
1．3．4 氯仿和乙酸乙酯萃取苦杏仁苷 取苦杏仁
苷浓缩液 5 mL 分别置于 2 个分液漏斗中， 分别加
入等体积的氯仿和乙酸乙酯，充分振荡混匀，静置，
待分层后，分别取有机相和水相利用“1．3．2”的方法
测定苦杏仁苷的浓度。
1．3．5 加热对苦杏仁苷纯度的影响 将苦杏仁苷
浓缩液 5 mL 置于烧杯中， 沸水浴中加热处理 10
min，之后取样经离心后按照“1．3．2”的方法测定苦
杏仁苷的浓度。
2 结果与分析
2．1 苦杏仁苷最大吸收波长的确定
如图 1所示，采用 UV－1800 紫外分光光度计于
200～400 nm 波长下进行多波长扫描，得到苦杏仁苷
标准品的最大吸收波长是 220 nm，故在后续色谱检
测苦杏仁苷含量时选择 220 nm的检测波长。
2．2 苦杏仁苷标准曲线
根据标准溶液测得的不同浓度标准品溶液色
谱图（图 2）进行分析，得到各个浓度标准溶液的数
据，如表 1所示。 根据表 1中数据制作标准曲线，如
图 3 所示。 以苦杏仁苷浓度（C）为横坐标，峰面积
（A）为纵坐标绘制得到苦杏仁苷标准曲线。 该回归
曲线线性良好，相关系数 R2＝0．997 1，可以用于计算
苦杏仁苷的浓度。
2．3 欧李种仁中苦杏仁苷的含量
采用 HPLC法进行检测， 得到欧李种仁中苦杏
仁苷的色谱图（图 4），其峰面积为 731．757 mAU·min。
根据标准曲线计算出溶液中苦杏仁苷浓度为 7．94
1~5 号色谱峰分别为 0．4、0．8、1．2、1．6、2．0 mg ／ mL 的苦杏仁苷标
准品
图 2 苦杏仁苷标准品的色谱图
图 1 苦杏仁苷的最大吸收波长
0.750
0.500
0.250
0
吸
光
度
200.0 250.0 300.0 350.0
波长//nm
400
350
300
250
200
150
100
50
0
响
应
值
//m
AU
0.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 12.0 15.0
保留时间//min
5
4
3
2
1
邬晓勇等：欧李种仁中苦杏仁苷的提取及其抗氧化活性 4765
湖 北 农 业 科 学 2013 年
图 4 欧李种仁提取液中苦杏仁苷的色谱图
表 2 苦杏仁苷的抗氧化活性
编号
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
苦杏仁苷浓度//mg/mL
0
7.50
3.75
1.875
0.937 5
0.468 8
0.234 4
0.117 2
0.058 6
0.029 3
A517 nm值
0.795
0.072
0.113
0.377
0.651
0.656
0.752
0.815
0.821
0.837
DPPH 清除率//%
90.9
85.8
52.6
18.1
17.5
5.4
0
0
0
mg ／ mL，即每 100 g 欧李种仁中苦杏仁苷含量为 794
mg。
2．4 苦杏仁苷抗氧化性的测定
研究表明， 苦杏仁苷具有一定的抗氧化性，能
够还原 DPPH［8］。 由表 2 可知，苦杏仁苷清除 DPPH
的能力随着苦杏仁苷溶液浓度的降低而下降。 苦杏
仁苷溶液浓度为 7．50 mg ／ mL 时，对 DPPH 的清除率
最高， 为 90．9％； 当苦杏仁苷溶液浓度为 0．234 4
mg ／ mL时，清除率下降为 5．4％。
2．5 氯仿和乙酸乙酯萃取苦杏仁苷
分别采用氯仿和乙酸乙酯萃取苦杏仁苷，结果
表明，氯仿和乙酸乙酯均不能将混合液中的苦杏仁
苷完全萃取出来；经检测，苦杏仁苷在氯仿相中的
含量仅为 0．17 mg ／ mL， 在乙酸乙酯相中仅为 0．21
mg ／ mL， 低于萃取之后保留在水相中的苦杏仁苷的
含量，表明氯仿和乙酸乙酯不能作为苦杏仁苷的萃
取剂使用。 但是苦杏仁苷混合液经过两种有机溶剂
萃取后，保留在水相中的苦杏仁苷的含量较萃取之
前有了较为明显的提高。 这可能是混合液中的部分
杂质被氯仿和乙酸乙酯分别萃取出去，从而提高了
水相中苦杏仁苷的相对含量。
2．6 加热对苦杏仁苷纯度的影响
利用沸水浴加热可以使醇溶性蛋白发生变性，
从而提高苦杏仁苷的纯度。 水相提取液经沸水浴加
热后， 经 HPLC 法测定苦杏仁苷含量色谱图如图 5
所示。 溶液中苦杏仁苷浓度为 12．1 mg ／ mL，相比较
加热前有了大幅度提高。 说明通过加热处理可以除
去苦杏仁苷溶液中的部分杂质，从而提高提取液中
苦杏仁苷的纯度。
DPPH 法检测加热处理后苦杏仁苷的抗氧化活
性结果表明， 苦杏仁苷的抗氧化性大幅度地降低
（表 3）； 与检测不加热处理苦杏仁苷的抗氧化性比
较发现，在浓度为 7．5 mg ／ mL时，加热后其自由基清
除率仅为 69．8％； 而浓度为 1．875 mg ／ mL 时的清除
率为 0。说明经过加热处理后，苦杏仁苷提取液的抗
氧化活性有了明显的下降。
表 1 苦杏仁苷 HPLC 标准曲线数据
编号
1
2
3
4
5
样品浓度//mg/mL
0.4
0.8
1.2
1.6
2.0
响应值//mAU
75.070
126.437
192.563
263.143
308.794
峰面积//mAU·min
42.300
72.211
112.722
154.238
182.130
保留时间//min
10.81
10.85
10.86
10.85
10.86
回归方程
y=91.927 x+2.006 9
R2
0.997 1
图 3 苦杏仁苷标准曲线
200
180
160
140
120
100
80
60
40
20
0
峰
面
积
//m
AU
·
m
in
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0
苦杏仁苷标准浓度//mg/mL
y=91.927 x+2.006 9
R2=0.997 1
1 400
1 200
1 000
800
600
400
200
-10
响
应
值
//m
AU
0.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 12.0 14.0 16.0 17.8
保留时间//min
图 5 加热后苦杏仁苷提取液的色谱图
1 800
1 500
1 250
1 000
750
500
250
-10
响
应
值
//m
AU
0.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 12.0 14.0 16.0 19.3
保留时间//min
4766
第 19 期
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
（上接第 4763页）
（责任编辑 赵 娟）
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（责任编辑 赵 娟）
表 3 加热后苦杏仁苷的抗氧化活性
编号
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
苦杏仁苷浓度//mg/mL
0
7.5
3.75
1.875
0.937 5
0.468 8
0.234 4
0.117 2
0.058 6
0.029 3
A517 nm值
0.752
0.227
0.462
0.805
0.792
1.008
1.121
1.253
1.286
1.307
DPPH 清除率//%
69.8
38.6
0
0
0
0
0
0
0
3 小结与讨论
已有研究表明，苦杏仁苷具有一定的抗氧化作
用［6］。本试验研究结果表明，苦杏仁苷清除 DPPH的
能力随着苦杏仁苷溶液浓度的降低而下降。 苦杏仁
苷溶液浓度为 7．50 mg ／ mL 时对 DPPH 的清除率最
高，为 90．9％。
本试验中提取苦杏仁苷的方法是采用无水乙
醇在 80～90 ℃下回流， 因为试验所用材料为植物种
子，所以在提取苦杏仁苷的过程中，一些醇溶性蛋
白和黄酮类化合物也会被提取出来 ［9－11］。 采用氯仿
和乙酸乙酯两种溶剂对苦杏仁苷的萃取结果表明，
氯仿和乙酸乙酯不能作为苦杏仁苷的萃取剂使用。
但是经过两种溶剂萃取后，苦杏仁苷溶液中的部分
杂质可以被两种溶剂除去，从而提高了水相中苦杏
仁苷的相对含量。
苦杏仁苷混合液经过加热处理后，苦杏仁苷的
相对含量大幅增加，说明加热处理可以去除苦杏仁
苷溶液中的部分杂质， 从而提高苦杏仁苷的纯度；
然而苦杏仁苷的抗氧化活性却大幅下降。 经检测，
加热后苦杏仁苷溶液浓度为 7.5 mg/mL 时， 自由基
清除率仅为 69．8％， 这可能与加热去除了部分黄酮
或其他抗氧化成分有关［12，13］。
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邬晓勇等：欧李种仁中苦杏仁苷的提取及其抗氧化活性 4767