全 文 ：65※基础研究 食品科学 2007, Vol. 28, No. 08
收稿日期：2007-05-21 *通讯作者
作者简介：董捷(1966-)，女，副研究员，研究方向为蜂产品开发与利用。
杏花花粉中苦杏仁苷的抗氧化性研究
董 捷1，尹 策1，张红城1,*，李春阳2，陈翠丽3
(1.中国农业科学院蜜蜂研究所，北京 100093；
2.江苏省农科院农产品加工研究所，江苏 南京 210014；3.北京联合大学应用文理学院生物系，北京 100083)
摘 要：本实验主要从总抗氧化能力、还原力、清除DPPH自由基、清除羟自由基、抑制卵磷脂氧化等方面，
对杏花花粉中的乙醇提取物、苦杏仁苷、苦杏仁苷结晶上清物进行了抗氧化性研究。结果表明：杏花花粉中苦杏
仁苷的抗氧化能力，除清除羟自由基以外均低于杏花花粉醇提物和苦杏仁苷结晶上清物。故开发杏花花粉产品只需
生产到乙醇提取物就可以达到抗氧化和抗癌的双重功效。
关键词：杏花花粉；苦杏仁苷；抗氧化
Research on Antioxidative Activities of Amygdlin from Almond Pollen
DONG Jie1，YIN Ce1，ZHANG Hong-cheng1,*，LI Chun-yang2，CHEN Cui-li3
(1.Institute of Apicultural Research, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100093, China；
2.Institute of Agro-food Science and Technology, Jiangsu Academy of Agricultural Sciences, Nanjing 210014, China；
3.Department of Biology, Beijing Union University, Beijing 100083, China)
Abstract ：This research mainly studied the antioxidation of amygdlin from almond pollen on general capacity of antioxdation,
reducing power, DPPH radical scavenging activity, hydroxyl radical scavenging activity and antioxidative activity in a lecithin
liposome system. It was found that the antioxidative and antiradical capacity of the amygdlin from almond pollen were weaker
than that of ethanol extracts and supernatant after amygcllin crystallization, except hydroxyl radical scavenging capacity. So the
product of ethanol extracts from almond pollen not only possessed the good antioxidative activities but also the antitumor activities.
Key words：almond pollen；amygdlin；antioxidation
中图分类号：Q944.42 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2007)08-0065-04
苦杏仁苷(amygdalin)，广泛存在于杏、苹果、山
楂等蔷薇科植物的种子中[1]。在我们最近进行的实验中
发现，苦杏仁苷在杏花花粉中也大量存在，其含量大
约是苦杏仁中含量的两倍。研究表明，苦杏仁苷具有
抗肿瘤作用[2]及免疫增强[3]作用，对其抗氧化性方面研究
较少，本实验研究从杏花花粉中提取的苦杏仁苷、醇
提物等的抗氧化性。通过总抗氧化能力的实验来测定是
否具有修复再生机能，通过还原力的实验来测定是否具
有在自由基生成阶段抑制自由基生成作用，通过清除
DPPH自由基的实验来测定是否具有在自由基连锁起始反
应阶段抑制作用，通过清除羟自由基和抑制脂质氧化的
实验来测定是否具有在连锁成长反应阶段抑制作用。
1 材料与方法
1.1材料与设备
1.1.1材料与试剂
杏花花粉 中国农业科学院蜜蜂研究所。
30%过氧化氢、硫酸亚铁、硫代巴比妥酸、抗
坏血酸、大豆卵磷脂、三氯乙酸铁氰化钾、三氯化
铁、浓盐酸、磷酸氢二钠和磷酸二氢钠均为分析纯；
DPPH Sigma公司；苦杏仁苷标准品(批号820-200002)
中国药品生物制品检定所；总抗氧化能力测定试剂盒(批
号20070416) 南京建成生物工程研究所；羟自由基测定
试剂盒(批号20070416) 南京建成生物工程研究所。
1.1.2仪器与设备
HZS-H型水浴振荡器 哈尔滨市东明医疗仪器厂；
UV-2100型紫外可见分光光度计 UNICO公司；PL303
型电子分析天平 梅特勒-托利多公司；TDL-5型低速
离心机 上海安亭科学仪器厂；MS1型漩涡混匀器 IKA
公司；SY21-K型电热恒温水浴锅 北京长风仪器仪表公
司；KQ-50DB型数控超声波清洗器 昆山市超声仪器有
限公司。
2007, Vol. 28, No. 08 食品科学 ※基础研究66
1.2方法
1.2.1样品的制备
取杏花花粉用无水乙醇进行提取，将提取液室温浓
缩干燥、称重，该固体为杏花花粉醇提物。另将提取
液放入－20℃冰箱冷冻结晶24h，离心得到结晶上清液
和苦杏仁苷结晶物。将结晶上清液室温浓缩干燥，该
固体为结晶上清物。
分别将三份固体用无水乙醇溶解，制备成不同浓度
的样品溶液。
1.2.2测定杏花花粉醇提物、结晶上清物、苦杏仁苷
总抗氧化能力
制备不同浓度的样品溶液，依照总抗氧化能力测定
试剂盒方法进行测定，按试剂盒提供的公式计算总抗氧
化能力。
总抗氧化能力(U/ml)=(A测定－A对照)/0.01/30×反应液
总体积ml/取样量ml×样本测定前稀释倍数
1.2.3测定杏花花粉醇提物、结晶上清物、苦杏仁苷
的还原力[4]
向不同试管中加入10μl不同浓度的样品(空白加
10μl无水乙醇)，用蒸馏水定容至1ml，依次加入2.5ml
pH6.6 PBS、2.5ml 50%铁氰化钾，50℃水浴20min，加
入1ml 10%三氯乙酸，5000r/min离心10min，取上清
2.5ml，加蒸馏水2.5ml，0.1%三氯化铁0.5ml混匀，在
700nm下测定吸光值，计算还原力。
还原力=(A样品－A空白)/A空白
1.2.4测定杏花花粉醇提物、结晶上清物、苦杏仁苷
清除DPPH自由基能力[5]
用无水乙醇作溶剂制备0.2mmol/L的DPPH溶液。
向不同试管中加入20μl不同浓度的样品溶液(空白加
20μl无水乙醇)，用蒸馏水定容至2ml，再加入2ml DPPH
溶液，混匀后室温避光静置30min，在517nm下测定吸
光值，计算抑制率、IC50。
抑制率=(A空白－A样品)/A空白×100%
IC50为当抑制率达到50%时所需抗氧化剂的量。
1.2.5测定杏花花粉醇提物、结晶上清物、苦杏仁苷
抑制羟自由基能力
制备不同浓度的样品溶液，依照羟自由基测定试剂
盒方法进行测定，按试剂盒提供的公式计算抑制羟自由
基能力。
抑制羟自由基能力(U/ml)=(A对照－A测定)/(A标准－ 空白)
×C标准(8.824mmol/L)×1 l/取样量×样本测定前稀释倍数
1.2.6测定杏花花粉醇提物、结晶上清物、苦杏仁苷
抑制卵磷脂氧化能力[6]
以10mmol/L pH7.4 PBS为溶剂配制10mg/ml的卵磷
脂溶液。显色剂：取15g三氯乙酸、0.375g硫代巴比
妥酸、2.1ml浓盐酸放入100ml蒸馏水中。硫酸亚铁-VC
溶液：取347.5mg硫酸亚铁、35mg VC定容至25ml。
向不同样品测定管中加入卵磷脂溶液20μl(样品对
照管不加)、20μl不同浓度的样品(空白对照管以无水乙
醇替代)、50μl硫酸亚铁-VC溶液，用10mmol/L pH7.4
PBS定容至3ml。37℃水浴40min，每5min摇一次，加
入2ml显色剂沸水浴加热15min，5000r/min离心10min，
在532nm下测定吸光值。计算抑制率、IC50。
抑制率=[A空白对照－(A样品测定－A样品对照)]/A空白对照×100%
2 结果与分析
2.1杏花花粉醇提物、结晶上清物、苦杏仁苷的总抗
氧化能力
表1 总抗氧化能力
Table 1 General capacity of a ntioxdation
醇提物(10mg)上清物(10mg)苦杏仁苷(10mg)
总抗氧化能力
(U/ml)
18.931±0.555016.5267±0.61670.791±0.8017
由表1可以看出，醇提物的总抗氧化能力显著高
于结晶上清物(p＜0.01)，两者都显著高于苦杏仁苷
(p＜0.01)。其中醇提物与苦杏仁苷的总抗氧化能力相差
8.1个单位，上清物与醇提物的总抗氧化能力相差3.4个
单位，由此可知，抑制羟自由基的能力醇提物＞结晶
上清物＞苦杏仁苷。
2.2杏花花粉醇提物、结晶上清物、苦杏仁苷的还原
力
表2 还原力
Table 2 Reducing power
回归方程 R2
醇提物 Y=159.23X+58.7420.9779
上清物 Y=134.66X+48.5260.9704
苦杏仁苷 Y=70.785X+0.75310.9915
10
8
6
4
2
0
－2
0 1 2 3 4 5
醇提物
上清物
苦杏仁苷
还
原
力
加样量(mg)
图1 还原力
Fig.1 Reducing power
67※基础研究 食品科学 2007, Vol. 28, No. 08
由图2可以看出，杏花花粉乙醇提取物、结晶上
清物及苦杏仁苷的抑制率，随加入样品量的增大而增
大，除在0.625mg和1.25mg时结晶上清物的抑制率高于
醇提物以外，其余在相同加样量的情况下均为醇提物＞
结晶上清物＞苦杏仁苷。由表3可以看出，醇提物的抑
制率显著高于结晶上清物的抑制率(p＜0.05)，极显著高
于苦杏仁苷的抑制率(p＜0.01)，结晶上清物的抑制率极
显著高于苦杏仁苷(p＜0.01)。提取物的IC50大约是苦杏
仁苷的1/3，上清物的IC50大约是苦杏仁苷的1/5。由此
可知，清除DPPH自由基能力的大小为醇提物＞结晶上
清物＞＞苦杏仁苷。
2.4杏花花粉醇提物、结晶上清物、苦杏仁苷的抑制
羟自由基能力
由图3可以看出，杏花花粉乙醇提取物、结晶上
清物及苦杏仁苷的抑制率随加入样品量的增大而增大，
在相同加样量的情况下醇提物＞结晶上清物＞苦杏仁
苷。由表5可以看出，醇提物的抑制率显著高于结晶
上清物的抑制率(p＜0.05)，极显著高于苦杏仁苷的抑
制率(p＜0.01)，结晶上清物的抑制率极显著高于苦杏仁
苷的抑制率(p＜0.01)。醇提物的IC50大约是苦杏仁苷的
1/2，上清物的IC50大约是苦杏仁苷的3/5。由此可知，
抑制卵磷脂氧化能力的大小为醇提物＞结晶上清物＞苦
杏仁苷。
综合以上五种抗氧化实验数据分析可以看出，在总
抗氧化能力、还原力、清除DPPH自由基和抑制卵磷脂
氧化方面，三者相比，醇提物的能力最强，次之是结
晶上清物、最弱的是苦杏仁苷，在抑制羟自由基能力
上醇提物与苦杏仁苷的能力差不多，但都高于结晶上清
物，这说明苦杏仁苷并不是杏花花粉乙醇提取物抗氧化
能力的主要贡献者。主要的贡献者应该是除苦杏仁苷以
外的上清物，由于花粉中富含大量的黄酮类物质，而
黄酮类物质极易溶于乙醇，提取苦杏仁苷时也采用的是
乙醇提取，所以乙醇提取液中既含有大量的黄酮类物
质，也含有苦杏仁苷，而结晶后的上清液主要成分应
该是黄酮，所以除清除羟自由基的能力外，苦杏仁苷
抗氧化能力均低于黄酮类物质。故苦杏仁苷的生理活性
由图1可以看出，杏花花粉乙醇提取物、结晶上
清物及苦杏仁苷的还原力随加入样品量的增大而增大，
在相同加样量的情况下醇提物的还原力＞结晶上清物的
还原力＞苦杏仁苷的还原力。
2.3杏花花粉醇提物、结晶上清物、苦杏仁苷清除
DPPH自由基能力
表3 清除DPPH自由基能力
Table 3 DPPH radical scavenging activity
回归方程 R2 IC50(mg)
醇提物 Y=10.419X+1.51710.9 94.6498±0.0017
上清物 Y=7.8732X+3.08160.95335.9159±0.0431
苦杏仁苷 Y=3.6932X－4.58140.96815.8798±0.1396
100
80
60
40
20
0
－20
0 5 10
抑
制
率
(
%
)
加样量(mg)
图2 清除DPPH自由基能力
Fig.2 DPPH radical scavenging activity
醇提物
上清物
沉淀
表4 抑制羟自由基能力
Table 4 Hydroxyl radical scavenging activity
醇提物(10mg)上清物(10mg)苦杏仁苷(10mg)
抑制力
(U/ml)
21.2177±0.280815.0610±1.103019.6735±0. 014
由表4可以看出，醇提物的抑制力略高于苦杏仁
苷，但没有显著性差异，二者都显著高于结晶上清物
(p＜0.05)。其中醇提物与苦杏仁苷的抑制力相差1.5个
表5 抑制卵磷脂氧化能力
Table 5 Antioxidative activ ity in lecithin lipo some system
回归方程 R2 IC50(mg)
醇提物 Y=8.9958X+15.9710.95454.0353±0.2525
上清物 Y=7.7665X+12.3290.96 4.7798±0.0707
苦杏仁苷 Y=7.7905X－11.410.97327.6414±0.2413
101
81
61
41
21
1
－19
0 2 4 6 8 10
抑
制
率
(
%
)
加样量(mg)
图3 抑制卵磷脂氧化能力
Fig.3 Antioxidative activity in lecithin liposome system
醇提物
上清物
沉淀物
单位，上清物与醇提物的抑制力相差6个单位，由此
可知抑制羟自由基的能力醇提物＞苦杏仁苷＞结晶上
清物。
2.5杏花花粉醇提物、结晶上清物、苦杏仁苷的抑制
卵磷脂氧化能力
2007, Vol. 28, No. 08 食品科学 ※基础研究68
应主要表现在抗癌[2]，提高免疫力[3]等生物活性上。
3 结 论
自由基对人体损伤的过程是：过氧化氢、过氧化
质脂和金属及香烟等进入人体后会产生自由基，一般会
产生超氧阴离子自由基。该阶段称为自由基形成阶段。
而自由基并非不可清除，具有清除自由基能力的物质称
为抗氧化剂。能够在自由基生成阶段起抑制作用的物质
称为预防型抗氧化剂，可以通过测定样品的还原力，来
判断待测物是否具有抑制自由基生成作用。
超氧阴离子自由基短时间内就会引发连锁反应，
这个阶段称为连锁起始反应阶段。衡量抗氧化剂是否能
够在连锁起始反应阶段起抑制作用，可以通过测定样品
的清除DPPH自由基和清除超氧阴离子自由基的方法来
确定。
由于超氧阴离子自由基很不稳定，它与金属离子等
结合后生成羟自由基，羟自由基具有很强的氧化能力，
它几乎可以与人体内各种分子反应，由其能够促进脂质
氧化，生成有害物质。该阶段称为连锁成长反应阶段。
衡量抗氧化剂是否能够在连锁成长反应阶段起抑制作
用，可以通过测定样品的清除羟自由基和抑制脂质氧化
的方法来确定。
有害物质进一步对细胞造成伤害，从而导致疾病、
癌症、衰老。连锁起始阶段和连锁成长阶段会产生许
多自由基，具有清除各种自由基能力的物质称为自由基
清除型抗氧化剂。在生成的有害物质对细胞造成伤害后
起到修复再生作用的，被称为该物质具有修复再生机
能。该作用主要通过对总抗氧化能力的测定来证明。
本实验分别对杏花花粉醇提物、结晶上清物和苦杏
仁苷的总抗氧化能力、还原力、清除DPPH自由基、
清除羟自由基和抑制脂质氧化方面进行了测定，分析结
果表明：除清除羟自由基的能力外，苦杏仁苷抗氧化能
力均低于醇提物。即在自由基生成阶段、连锁起始反
应阶段、连锁成长反应阶段和细胞损伤阶段，苦杏仁
苷的抑制、清除作用不如醇提物，也就是说醇提物较
苦杏仁苷来说更适合做预防型抗氧化剂和自由基清除型
抗氧化剂，并且醇提物对细胞的修复再生机能也高于苦
杏仁苷。
综上可知，虽然苦杏仁苷的抗氧化性不如醇提物，
但苦杏仁苷具备较强的抗癌功能，所以开发杏花花粉产
品只要生产到乙醇提取物就可以达到抗氧化和抗癌的双
重功效。
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(4): 556-558.
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信 息
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转基因技术可提高植物光合作用能力
日本研究人员最近通过转基因技术提高植物的光合作用能力，使植株的高度和二氧化碳吸收能力增加。
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自承担光合作用的蛋白质不同，而同样进行光合作用的一些更原始的生物却同时拥有这两种蛋白质，说明
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长状况。对比结果显示，转基因拟南芥植株高度是普通拟南芥的约1.3倍至1.5倍，光合作用合成的淀粉量
比普通 拟南芥多20%，二氧化碳吸收量也增加了30%。
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