全 文 ：HPLC法测定天山花楸中芦丁的含量
李 　乐 　李 　鹏 　张 　芹 　唐 　辉■
新疆特种植物药资源教育部重点实验室 , 石河子大学药学院 (新疆石河子 832002)
　　摘要:目的:建立HPLC 梯度洗脱法测定天山花楸叶中芦丁含量的方法。 方法:采用 ZORBAX SB-C18 (4.6mm×
15mm , 5μm)色谱柱 , 甲醇-0.02%磷酸溶液为流动相 (梯度洗脱), 流速为 1.0ml·min-1 , 检测波长为 326nm。结果:
芦丁线性范围为 0.2104 ～ 1.8936μg/ml , 叶中芦丁含量 0.4829mg/ 100ml (RSD%=0.48%, n =3), 平均回收率为
100.4%。结论:该方法经济 、 简便 、 快速 、 准确 、 可靠 , 可用于该药材的质量控制。
　　关键词:天山花楸　芦丁　HPLC　梯度洗脱
　　中图分类号:R 284.1　　文献标识码:A　　文章编号:1000-3649 (2008)09-0051-03
　　Determination of Rutin in Sorbus Tianschanica by High Performance Liquid Chromatography/ Li Le　Li Peng　Zhang Qin
　Tang Hui∥College of Pharmacy , Key Laboratory of Phytomedicine Resource and Modernization of TCM , Shihezi University (Shihezi
832002)
　　Abstract Objective:To establish the method of Rutin determination in Sorbus Tianschanica.Methods:ZORBAX SB-C18
(4.6mm×15mm , 5μm) column of High Performance Liquid Chromatography (HPLC)was adopted in the Rutin determination.The
MeOH-0.02% H3PO3 was used as mobile phase.The flow rate was 1.0ml·min-1.The detective wavelength was 326nm.Results:
The linear range of Rutin was 0.2104～ 1.893μg/ ml.Rutin in the leaf of S.Tianschanica was 0.4829mg/ 100ml(RSD%=0.48%, n
=3), and the average recovery rate was 100.4%.Conclusion:The method is simple and sensitive , and can determine Rutin content
quickly and correctly.It is suitable for the analysis of Rutin in S.Tianschanica.
　　 基金项目:新疆生产建设兵团科技攻关计划课题(2006GG52)。 ■通讯作者
表 2　紫黄精片对症状积分的影响 ( x ±s)
症状 n 服用前积分 服用后积分
疲倦乏力 30 2.18±0.71 0.81±0.46＊
视力疲劳 30 1.20±1.03 0.66±0.71＊
头晕眼花 30 1.16±0.98 0.63±0.66＊
畏寒怕冷 30 1.66±1.09 0.93±0.90＊
食欲不振 30 0.90±0.95 0.46±0.57＊
消化不良 30 1.1±0.92 0.53±0.57＊
口腔溃疡 30 1.06±1.17 0.26±0.44＊
头痛 30 1.33±1.06 0.76±0.77＊
鼻塞流涕 30 1.60±0.93 0.73±0.69＊
咽喉疼痛 30 1.76±1.00 0.73±0.69＊
咳嗽咯痰 30 2.00±0.98 0.70±0.74＊
不易入睡 30 1.40±1.13 1.00±1.05
心悸心慌 30 0.83±0.79 0.50±0.73
腰酸背痛 30 1.26±1.08 0.93±0.86
耳鸣 30 0.98±0.88 0.56±0.80
胸闷胸痛 30 0.83±0.91 0.53±0.62
便秘 30 0.86±1.00 0.50±0.86
　　注:服用前后比较 , ＊P<0.05
　　上述结果显示 , 紫黄精片有显著改善免疫功能
低下患者感冒后鼻塞流涕 、 咽喉疼痛、 咳嗽咯痰症
状 , 对平时疲倦乏力 、 视力疲劳、 头晕眼花、 畏寒
肢冷、 食欲不振症状也有显著改善作用 (P<0.05),
对口腔溃疡、 头痛 、 消化不良也有显著的改善作用
(P<0.05)。
紫黄精片对不易入睡 、 腰酸背痛、 耳鸣、 胸闷
胸痛 、 便秘症状无显著影响 (P>0.05)。
4　讨　论
　　紫黄精是由紫锥菊多糖 (EPS)和黄芪多糖(APS)
提取纯化后 , 按照一定的比例配伍得到一种复合免疫
多糖—EAPS。紫锥菊是一种原产于美洲的菊科草本
植物 , 应用历史悠久。紫锥菊具有的显著的免疫增
强作用已引起国内外学者的普遍关注 , 在欧美等国
家已成为最畅销的植物制剂之一[ 1] 。黄芪具有补气
升阳、 益气固表 、 托毒生肌、 利水消肿等功效 , 现
代医学发现它具有调节免疫 、 增强细胞代谢 、 强心 、
利尿、 降压 、 降血糖等作用[ 2] 。动物实验研究表明 ,
紫黄精片具有显著增强小鼠免疫功能的作用[ 3] 。
本临床观察结果显示 , 紫黄精片能显著提高免
疫功能低下患者血清 IgG、 补体 C3、 CD3、 CD4 水
平;服药后证候总积分也有显著降低 , 对免疫功能
低下患者感冒后鼻塞流涕 、 咽喉疼痛 、 咳嗽咯痰 、
平时疲倦乏力、 视力疲劳、 头晕眼花、 畏寒肢冷 、
食欲不振、 口腔溃疡 、 头痛、 消化不良症状也有显
著改善作用。以上结果均表明 , 紫黄精片对免疫功
能低下患者具有良好的免疫调节作用。
参考文献
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中草药 , 1996 , 24 (1):46～ 48
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　　 [ 3] 刘雪莲 , 邹文俊 , 白红艳.地奥紫黄精片免疫调节作用研
究[ J] .中药药理与临床 , 2005 , 21 (6):63～ 65
(收稿日期　2008-05-19)
·51·2008年第 26卷第 9期Vol.26 ,No.9 ,2008 四　川　中　医Journal of Sichuan of Traditional Chinese Medicine
　　Keywords:S.Tianschanica　Rutin　HPLC　gradient operation
　　 蔷 薇 科 Rosaceae 花 楸 属 植 物 天 山 花 楸
S.tianschanica, 为维吾尔和哈萨克族民间常用药物。
天山花楸内含黄酮类化合物 、 绿原酸、 花青素、 双
联苯酚、 类山梨酸苷、 生氰苷等[ 1 , 2] 。 药理试验显
示[ 3-4] , 天山花楸枝叶兼有止咳、 平喘 、 强心等多种
药理功效 , 并且毒性很低。 《中华本草》 记载[ 5] :民
间以嫩枝叶 , 果实和茎皮入药。嫩枝叶和茎皮:叶
苦 , 性寒 , 无毒;果实:味甘苦 , 性平。功能:清
热利肺 , 补脾生津 , 止咳;主治肺结核 、 哮喘、 咳
嗽等。欧洲花楸果浆中黄酮醇 、 黄酮类化合物具有
抗氧化作用 , 可对抗动脉粥样硬化、 心脏病和癌症
等疾病[ 6] 。由于黄酮类化合物的定量研究尚未见深
入报道 , 为更好了解天山花楸中黄酮的含量 , 更全
面、 综合地评价这一药用植物[ 7] , 我们对天山花楸
叶子中芦丁进行了HPLC法测定[ 8-11] , 为进一步了解
其药理作用和合理开发天山花楸这一药用资源提供
参考。
1　仪器和试药
　　Agilent HP1100型高效液相色谱系统 , 配有:四
元泵 , 紫外检测器 , HP1100化学工作站;日本岛津
UV 2401 (PC)紫外光谱仪;德国Sartorius BP211D十
万分之一电子分析天平;索氏抽提装置;甲醇为色
谱纯 , 水为二次重蒸水 , 其他试剂均为分析纯 , 天
山花楸供试品自制;芦丁标准品由中国药理生物检
定所提供。
2　方法与结果
2.1　色谱条件　色谱柱:ZORBAX SB-C18 (4.6mm×
15cm , 5μm) 色谱柱 , 检测波长为 326nm;柱温
35℃;流速 1.0 ml·min-1。流动相 MeOH:0.02%
H3PO 4 , 20min 内梯度洗脱 , 由 MeOH:0.02% H3PO4
(1∶9)至MeOH:0.02%H3PO4 (9∶1)。
2.2　对照品溶液和供试品溶液制备
2.2.1　芦丁对照品溶液　称取芦丁对照品约 10mg ,
精密称定 , 置 100ml棕色容量瓶中 , 甲醇溶液稀释至
刻度 , 即得对照品溶液。
2.2.2　天山花楸叶供试品　取 60 ℃常压干燥至恒重
天山花楸粉末约 25g , 置索氏提取器中 , 加石油醚约
80ml , 加热回流至无色 , 弃去石油醚 , 药渣挥干;
取上述脱脂的粉末 5g , 平行取 3份 , 各加甲醇 80ml,
加热回流提取 2h , 转移至 100ml 容量瓶中 , 甲醇定
容 , 即得待测天山花楸叶供试品溶液。
2.3　线性关系考察及稳定性试验　对照品溶液高速
离心 10min , 用 0.45μm 滤膜过滤 , 收集续液 , 精密
移取 2.0 、 6.0、 10.0、 14.0、 18.0μl续滤液进样 , 按
上述色谱条件测定。以峰面积A 对对照品的量 (μg)
进行线性回归 , 得标准曲线回归:A=988.88C+
2.1 , r = 0.999 7。 芦 丁线 性范 围为 0.2104 ～
1.8936μg。取上述对照品溶液 , 每隔 2h 按上述色谱
条件测定峰面积 , 结果表明在 12h 内基本稳定
(RSD%=1.7%)。
2.4　样品测定　精密量取供试品溶液 1ml , 移至
10ml棕色容量瓶中 , 甲醇定容 , 照 2.3 项下进样 ,
代入标准曲线 , 即得。测量图谱见图 1、 2。结果:
天山花楸叶中芦丁的平衡含量为 0.4829mg/ 100ml ,
RSD%=0.48%(n=3)。结果见表 1。
表 1　天山花楸叶中总黄酮的含量
样品 峰面积
A
C/mg/100mL 总黄酮/生药/ %
平均
含量 RSD/ %
1 482.23 2.428 0.4855
2 458.89 2.310 0.4820 0.4829 0.48%
3 477.82 2.405 0.4811
2.5　精密度试验　对照品溶液高速离心 10min , 用
0.45μm滤膜过滤 , 收集续滤液 , 精密移取对照品液
18μl , 照 2.3项下进样 , 连续进样 5次 , 对照品芦丁
含量的 RSD%=1.16%。
2.6　重复性试验　天山花楸供试品溶液高速离心
10min , 用 0.45μm滤膜过滤 , 收集续滤液 , 照 2.3项
下进样 , 进样量20μl , 连续进样5次 , 叶的芦丁含量
的 RSD%=1.02%。
2.7　回收率试验　精密移取已知芦丁含量的天山花
楸供试品溶液 0.5ml , 置 10ml棕色容量瓶中 , 精密
加入定量低 、 中、 高浓度的对照品液 , 加甲醇稀释
至刻度 , 照 2.3 项下操作测定。叶:平均回收率
%=100.4%, RSD%=0.35%(n=9)。
图 1　芦丁对照品 HPLC 色谱图
图 2　天山花楸叶提取液 HPLC色谱图
3　讨　论
　　天山花楸中含有绿原酸等极性很强的成分 , 其
保留时间较短 , 为了使芦丁以合适的保留时间出峰 ,
因此采用梯度洗脱 , 既保证绿原酸等成分快速流出 ,
又能保证芦丁在 15min内完成测定 , 且分离度良好;
在测定过程中发现 , 绿原酸及原花青素等成分不易
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较好分开 , 本方法未能同时测定原花青素 , 绿原酸
及芦丁;其测量条件还需要进一步探索。
参考文献
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(收稿日期　2008-05-09)
菟丝子总黄酮中树脂残留物的顶空GC检测
符　晓
成都中医药大学 (四川 成都 610072)
　　摘要:目的:建立树脂法富集的菟丝子总黄酮中树脂残留物的检测方法。方法:采用顶空气相色谱法 , 对苯 、 甲
苯 、 二乙烯基苯 、 邻二甲苯 、 苯乙烯 、 正庚烷进行检测。结果:本方法线性关系良好 , r 为 0.9997 ～ 0.9999 , 精密度
RSD均小于 5%, 平均回收率为 97.5%～ 101.1%。结论:本方法便于操作 , 分离度高 , 重现性好 , 结果可靠 , 可作为
树脂法富集的菟丝子总黄酮中树脂残留物的检测方法。
　　关键词:顶空GC　树脂法富集的菟丝子总黄酮　树脂残留物
　　中图分类号:R249　　文献标识码:A　　文章编号:1000-3649 (2008)09-0053-02
　　菟丝子是常用中药 , 其化学成分主有黄酮类、
香豆素等。现代药学研究表明[ 1] 其具有改善心血管
系统 , 增强免疫和保肝、 抗氧化、 抗衰老 , 明目等
活性 , 其中菟丝子总黄酮为主要的活性成分。其提
取方法通常采用有机溶剂萃取法 , 但所得粗提物黄
酮的量较低 , 而采用大孔吸附树脂法分离纯化后 ,
可使粗提物黄酮的含量大大提高[ 2 ～ 3] , 但同时由于大
孔吸附树脂的使用 , 会给提取物中引入一些有机残
留 , 按照 “大孔吸附树脂分离纯化中药提取液的技
术要求” , 有必要对树脂残留物进行检测。本文采用
气相色谱法 , 配以顶空进样[ 4 ～ 5] , 对树脂可能引入的
苯、 甲苯、 二乙烯基苯 、 邻二甲苯、 苯乙烯、 正庚
烷6种有机残留进行测定 , 方法简便快捷 , 准确可
靠。
1　仪器 、 试剂与样品
　　仪器:Agilent6890 气相色谱仪 , FID 检测器 ,
HP7694E顶空进样器 , 氢气发生器 , HP6890化学工
作站。
　　试剂:苯、 甲苯 、 邻二甲苯 、 二乙烯基苯、 苯
乙烯、 正庚烷 、 N , N-二基甲酰胺 (DMF)均为色
谱纯。
　　样品:菟丝子总黄酮 (自制 , 采用 H-103型大
孔吸附树脂分离纯化[ 2 ～ 3] , 批号为 070501)。
2　方法与结果
2.1　色谱条件　HP-INNOWAX柱 (PEG20M , 30m×
0.53mm×1.0μm), FID 检测器 , 载气为 N2 , 流量
6ml/min , 气化室温度 230℃, 氢气压力 60kPa , 尾吹
气 (氮气)32ml/min , 柱温为程序升温:起始温度
40℃, 保持 5min , 以 5℃/min升至 80℃, 保持 3min ,
再以 20℃/min升至200℃。
2.2　顶空条件　顶空瓶加热温度 110℃, 平衡时间
10min , 输送管温度120℃, 顶空瓶加压时间 2min。
2.3　溶剂的选择　采用 N , N-二甲基甲酰胺
(DMF)。
2.4　溶液的配制　(1)对照品溶液:取各标准品适
量 , 用DMF 溶解并定容至 10ml , 得高浓度的Ⅰ号溶
液 , 再逐步稀释 , 配成Ⅱ-Ⅳ号不同浓度 , 作对照
品溶液 (见表 1)。 (2)样品溶液:菟丝子总黄酮精
密称定约 1.0g , 用 DMF溶解并定容至10ml。
2.5　标准曲线的制备　分别精密吸收Ⅰ -Ⅴ系列浓
度的对照品溶液各 2.0ml , 置顶空瓶中 , 加盖密封 ,
按上述条件测定 (对照品溶液色谱图见图 1)。以浓
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