全 文 ：　　收稿日期:2006-04-12
基金项目:新疆建设兵团科技攻关计划医药卫生专项资金资助项目 2006GG52
作者简介:张　芹(1973-)女 ,硕士生 ,从事药物分析研究。
通讯作者:唐　辉(1967-)女 ,副教授 ,从事天然药物分析及新药研究。
第 24卷　第 6期
2006年 12月
石河子大学学报(自然科学版)
Journal of Shihezi University(Natural Science) Vol.24　No.6Dec.2006
文章编号:1007-7383(2006)05-0709-04
天山花楸中总黄酮和槲皮素测定
张　芹1 , 刘保刚2 , 李　鹏1 , 唐　辉1
(1 新疆特种植物药资源省部共建教育部重点实验室 ,新疆石河子 832002;
2 新疆生产建设兵团农四师医院 , 新疆伊犁 835000)
摘要:以芦丁 、槲皮素为标准品建立了用分光光度法测定天山花楸叶中总黄酮的含量和果实中槲皮素含量的测定
方法 ,分别采用 5%NaNO2 ～ 10%Al(NO3)3 ～ 4%NaOH 和 2%AlCl3显色系统 ,并分别在 510 nm 和 422 nm 处进行了含
量测定。结果表明:天山花楸果实中总黄酮为 7.75%(RSD%=1.09), 在 1.596 ～ 6.384 mg/100 mL(R2=0.9999)
范围内 , 线性关系良好;7 月天山花楸叶子中槲皮素为 0.777%(RSD%=0.66)、8 月其叶子中槲皮素为 0.397%
(RSD%=0.81),叶子中槲皮素在 0.241～ 0.723 mg/100mL(R2=0.9995)范围内 ,线性关系良好。
关键词:分光光度法;总黄酮;芦丁;槲皮素;含量测定;天山花楸
中图分类号:S816.17　　　　文献标识码:A　　　　
　　蔷薇科 Rosaceae 花楸属植物天山花楸S.tians-
chanica ,为维吾尔族和哈萨克族民间常用药物 。天
山花楸内含黄酮类化合物 、绿原酸 、花青素 、双联苯
酚 、类山梨酸苷 、生氰苷等[ 1 ,2] 。药理试验显
示[ 3 ～ 5] ,天山花楸枝叶兼有止咳 、平喘 、强心等多种
药理功效 ,并且毒性很低 。《中华本草》记载[ 6] :民间
以嫩枝叶 、果实和茎皮入药。嫩枝叶和茎皮:味苦 、
性寒 、无毒;果实:味甘苦 、性平 。功能:清热利肺 、补
脾生津 、止咳;主治:肺结核 、哮喘 、咳嗽 、胃炎 、胃痛 、
维生素A 和 C 缺乏症 。常用于治疗肺结核 、哮喘 、
咳嗽 、胃疼等症 。欧洲花楸果浆中黄酮醇 、黄酮类化
合物具有抗氧化作用 ,可对抗动脉粥样硬化 、心脏病
和癌症[ 7] 。由于黄酮类化合物的定量研究尚未见深
入报道 ,为了解天山花楸中黄酮的含量 ,更全面 、综
合地评价此药用植物 ,我们对天山花楸果实中总黄
酮和叶子中槲皮素进行了测定 ,为进一步了解其药
理作用和合理开发天山花楸此资源提供依据 。
1　材料与试剂
1.1　实验材料
供试品采自玛纳斯林场 ,海拔 2000 ～ 2500 m ,由
石河子大学药学院成玉怀高级实验师鉴定为蔷薇科
Rosaceae 花楸属植物天山花楸S.tianschanica 。
1.2　实验仪器
日本岛津UV 2401(PC)紫外光谱仪;德国 Sarto-
rius BP211D十万分之一电子分析天平;索氏抽提装
置;恒温水浴锅。
1.3　实验试剂
标准品芦丁 、槲皮素由中国药品生物制品鉴定
所提供;乙醚 ,甲醇 ,亚硝酸钠 ,硝酸铝 ,氢氧化钠及
其它试剂均为分析纯。
2　实验方法
2.1 　天山花楸果实中总黄酮含量的测
定[ 8～ 10]
2.1.1　芦丁标准品溶液的制备　取 120℃常压干
燥至恒重的芦丁标准品约 20mg ,精密称量 ,用甲醇
溶解并移至 100mL 容量瓶中 ,定容 ,获得芦丁标准
品溶液 。
2.1.2　天山花楸果实供试品溶液的制备　取 3份
60℃常压干燥至恒重的天山花楸果实粉末约 0.5g ,
置索氏提取器中加甲醇 80mL ,加热回流提取至无
DOI :10.13880/j.cnki.65-1174/n.2006.06.013
色 ,移至 100mL容量瓶中 ,甲醇定容 ,即得待测天山
花楸果溶液。
2.1.3　天山花楸果实中总黄酮测定波长的选择　
分别量取上述芦丁标准品溶液 6mL 和天山花楸果
实供试品溶液 2.5mL ,置于 25mL 的容量瓶中 , 加
5%NaNO2 溶液 1mL ,混匀 ,放置 6min ,加入 10%A1
(NO3)3溶液 1mL 摇匀 ,放置 6min ,再加入 4%NaOH
溶液 10mL ,加水至刻度摇匀 ,放置 15min后 ,以溶液
介质为空白 ,在 400nm ～ 800nm 范围扫描 ,获得紫外
吸收光谱(图 1)。图 1表明 ,两者在 510nm 有共同
最大吸收 ,因此选择 510nm处为测定波长。
图 1　芦丁标准品及天山花楸果样品液的吸收光谱
2.1.4　芦丁标准品溶液标准曲线的绘制　精密量
取芦丁标准品溶液 2.0 、3.0 、5.0 、7.0 、8.0mL ,分别
置于 25mL 的容量瓶中 ,加 5%NaNO2 溶液 1mL ,混
匀 ,放置 6min ,加入 10%A1(NO3)3 溶液 1mL 摇匀 ,
放置 6min ,再加入 4%NaOH溶液 10mL ,加水至刻度
摇匀 , 放置 15min后 ,以溶液介质为空白 ,在 510nm
处测定吸光度A。以吸光度 A对质量浓度 C 回归 ,
得标准曲线方程为:
A=0.1251C+0.0185 ,R 2=0.9999;
线性范围为 1.596 ～ 6.384 mg/100mL。
2.1.5　精密度和重现性试验　分别精密量取芦丁
标准品溶液 5mL 和同一份待测天山花楸果溶液 2.
5mL ,分别置于 25mL的容量瓶中 ,按“2.1.4”项下同
法操作 , 重复测定 5 次 , 记录 A , 精密度实验的
RSD%为 0.40;重现性实验的 RSD %为 0.82。
2.1.6　回收率试验　精密量取已知黄酮含量的天
山花楸果溶液加入一定量芦丁标准品溶液 , 置于
25mL的容量瓶中 ,按“2.1.4”项下方法测定 A。结
果见表 1。
表 1　天山花楸果实中总黄酮的回收率
样品中
总黄酮量/mg
标准品
加入量/mg 吸光度 A 回收率/ %
平均回
收率/ % RSD/ %
0.5394 0.2674 0.4249 102.0
0.4197 98.13 99.84 1.98
0.4214 99.40
0.5394 0.4938 0.5348 99.72
0.5365 100.4 100.6 0.95
0.5394 101.6
0.5394 0.7199 0.6510 100.6
0.6479 99.79 100.1 0.43
0.6485 99.96
2.1.7　天山花楸果实样品测定　精密量取待测样
品溶液 2.5mL ,置于 25mL 的容量瓶中 ,按“2.1.4”项
下方法测定A 。结果见表 2。
表 2　天山花楸果实中总黄酮的含量
样品 吸光度A C/ mg·100mL-1 总黄酮/生药/ % 平均含量/ % RSD/ %
1 0.5092 39.22 7.84
2 0.5013 38.60 7.72 7.75 1.02
3 0.4995 38.45 7.69
2.2　天山花楸叶中槲皮素含量的测定
2.2.1　槲皮素标准品溶液的制备　取 120℃常压
干燥至恒重的槲皮素标准品约 10mg ,精密称定 ,用
甲醇溶解并移至 100mL 容量瓶中 ,定容 ,得槲皮素
标准品溶液。
2.2.2　天山花楸叶供试品溶液的制备　取 60℃常
压干燥至恒重的 7 、8月采摘的天山花楸叶粉末 ,约
0.5g ,各 3份 ,置索氏提取器中 ,加乙醚约 80mL ,加
热回流至无色 , 弃去乙醚 , 药渣挥干;再加甲醇
80mL ,加热回流提取至无色 ,转移至 100mL 容量瓶
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中 ,甲醇定容;取上述溶液 40mL ,再加 10mL;10%
HCl冷凝回流 3h后 ,用甲醇定容于 50mL 容量瓶中 ,
即得待测的天山花楸叶样品溶液。
图 2　槲皮素标准品及天山花楸叶提取液的吸光光谱
2.2.3　天山花楸叶中槲皮素测定波长的选择　分
别量取上述槲皮素标准品溶液 0.5mL 和天山花楸
叶样品溶液 2mL ,分别置于 10mL 的量瓶中 ,加 2%
AlCl3 甲醇溶液2.5mL ,摇匀放置 20min;以溶液介质
为空白 ,在 350nm ～ 500nm 范围扫描 ,得紫外吸收光
谱 ,由图 2表明 ,两者在422nm处有共同最大吸收 。
因此选择422nm为测定波长。
2.2.4　槲皮素标准品标准曲线的绘制　精密量取
槲皮素标准品溶液 0.2 、0.3 、0.4 、0.5 、0.6mL ,分别
置于 10mL容量瓶中 ,加 2%AlCl3 甲醇溶液 2.5mL ,
摇匀放置 20min;以溶液介质为空白 ,在 422nm处测
定吸光度 ,以吸光度(A)对质量浓度(C)回归得标准
曲线方程为:A=0.7851C+0.0075 , R2 =0.9995;线
性范围为0.241 ～ 0.723mg/100mL。
2.2.5　精密度和重现性试验　分别精密吸取槲皮
素标准品溶液 0.3mL 和同一份天山花楸叶样品溶
液 1.8mL ,分别置于 10mL容量瓶中 ,按“2.2.4”项下
同法操作测定 A , 重复测定 5 次 ,精密度实验的
RSD%为 2.30;重现性实验的 RSD %为 1.62。
2.2.6　回收率试验　精密量取已知槲皮素含量的
天山花楸叶供试品溶液加入一定量槲皮素标准品溶
液 ,置于 10mL 容量瓶中 ,按“2.2.4”项下方法测定
A 。结果见表 3。
表 3　天山花楸叶中槲皮素的回收率
样品中
总黄酮量/μg
标准品
加入量/μg 吸光度 A 回收率/ %
平均回
收率/ % RSD/ %
23.03 24.10 0.3809 101.8
0.3813 102.0 101.9 0.10
0.3801 101.9
35.99 36.15 0.5809 102.5
0.5813 102.4 100.4 0.06
0.5807 102.4
35.99 48.20 0.6683 99.96
0.6672 99.67 99.94 0.27
0.6692 100.2
2.2.7　样品测定　精密量取 7 、8月份天山花楸叶
子供试品溶液各 1.8mL ,置于 10mL 容量瓶中 ,按“2.
2.4”项下方法测定 A。结果见表 4。
表 4　天山花楸叶中槲皮素含量
采集时间 吸光度 A C/ mg·100mL-1 槲皮素/生药/ % 平均含量/ % RSD/ %
7 月 0.5523 3.855 0.771
0.5574 3.891 0.778 0.777 0.66
0.5591 3.903 0.781
8 月 0.2875 1.981 0.396
0.2909 2.005 0.401 0.397 0.81
0.2864 1.973 0.395
3　讨论
1)天山花楸叶中含有多种黄酮类成分 ,先用乙
醚回流提取可除去其中的脂溶性干扰物质 ,再用甲
醇提取后制成供试品溶液 ,干扰可明显减少;但是叶
绿素等杂质对以芦丁为标准品在 NaNO2-Al(NO3)3
-NaOH显色系统测定总黄酮仍有干扰;本试验按
4/1比例采用 10%的 HCl回流 2.5h 水解样品中槲
皮素苷得槲皮素苷元后 ,以槲皮素为标准品定天山
花楸叶中黄酮含量 ,即可排除叶绿素等杂质的干扰。
711第 6期　　　　　　　　　　　　　　　张　芹 ,等:天山花楸中总黄酮和槲皮素测定　　　　　　　　　　　　　　　
2)果实水解液加AlCl3 显色在 422nm 无明显吸
收 ,无法用 AlCl3显色法测定槲皮素含量;且果实总
黄酮测定时无叶绿素杂质干扰 。所以本实验建立了
以芦丁为标准品 5%NaNO2 ～ 10%Al(NO3)3 ～ 4%
NaOH显色测定果实中总黄酮方法 ,为天山花楸这
一药材提供一个稳定 、简便 、快速的质量控制指标 。
3)七月份叶子中槲皮素含量明显高于八月份 ,
提示采药时间影响药材品质。
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(1):8-9.
Determination of Total Flavone in the Fruit and Quercetin in the
Leaf of S .tianschanica by Spectrophotometry
ZHANG Qin1 , LIU Bao-gang2 , LI Peng1 , TANG Hui1
(1 Key Laboratory of Phytomedicine Resources &Modemization of TCM , Shihezi University , Shihezi , Xinjiang 832002 , China;
2 the Fouth Division Hospital of BINGTUAN , Xinjiang 835000 , China)
Abstract:A method for determination of total flavone in the fruit of S.tianschanica and of quercetin in the leaf of S.
tianschanica was set up in which reference substance was rutin and quercetin , 5%NaNO2 ～ 10%Al(NO3)3 ～ 10%NaOH
and 2%AlCl3 were chromogenic agent and the detection wavelengths were at 510nm and 422nm.Results showed that the
total flavone in the fruit of S.tianschanica was 7.75%(RSD%=1.09)with the linear range of 1.596 ～ 6.384mg/
100mL(R 2=0.9999);the quercetin in the leaf of S.tianschanica in July was 0.777%(RSD%=0.66)and in august
was 0.397%(RSD %=0.81)with the line arrangement of 0.241 ～ 0.273mg/100mL (R2=0.9995).Conclution:This
method is simple , convenient , rapid and is suitable for determination of total flavone and quercetin in S.tianschanica.
Key words:spectrophotometry;total flavone;rutin;quercetin;determining content;Sorbus tianschanica
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