全 文 ：植 物 学 报 5 9 9 1, 3 一 ( 7 ) : 5 4 9一 5 5 3
诵 tC a B o t a而 e a & n i c 。
密花滇紫草蔡酿成分研究及
紫草素含量测定
艾克蕙 李凤英* 李勇* 王伟波* 吴玉蓉
(四川大学化学系 , 成都 6 10 0 6 4 )
摘 要
从密花滇紫草 ( O二 0 5 , a c o o f o r` “ 。 w · w · Sm i` h ) 根的石油醚提取物中分离出四种化合
物 , 根据其理化常数 、 光谱数据 ( M S、 IR 、 ’ H 一 N M R 、 C D ) 及 H P L C 等鉴定为 : 去氧紫草素
( I )
、 产, 月一二甲基丙烯酞紫草素 ( 1 1) 、 乙酸紫草素 ( 1 1) 和紫草素 ( vI ) 。 并对紫草素衍生物碱
水解所得紫草素总含量进行了测定 。
关键词 紫草素 ;蔡酮衍生物
S T U D I E S O N T H E N A P H T H A Q U IN O N E C O N S T I T U E N T S
0 万 0 5 别姚 C O N F E R T U M W . W . S M I T H A N D Q U A N T I·
T A T I V E D E T E R M IN A T I O N O F S H I K O N IN
龙 K-he u i, L i F e n g 一 y i n g , L i Y o n g , W a n g W e i一 bo a n d W u Y u ~ y o n g
( D o Pa r , m 。 。 x o j C汤。 。 i : , r夕, S i c h , a 二 U o i , 。 r ` i t y , C h o n g d u 6 10 0 6 4)
A b s t r a c t
F o u r e o m P o u n d s w e r e is o l a t e d f r om O
n o了m a c o n f
e r t “ m
t i f i e d a s d e o x y s h i k o n i n e ( I )
, 尽, 月一d im e ht y l a e r y l s h k o n in ( 11) ,
i n ( IV )
a e c o r d i n g t o t h e i r
H P L C d e t e r m i n a t i o n
.
T h e
r i v a t i v e s w a s d e t e r m i n e d
.
p h哪 ie a l a n d c h e m i e a l c o n s t a n t s
W
.
W
.
S m i t h
.
a e e t y l s h ik o n i n e
f r o m M S
,
IR
T h e y w e r e
O F
记 e n -
( 111) a n d
s h i k o n
-
I
H
一N M R
,
C D
-
t ot a l q u a n t i t y o f s h i k o n i n o b t a i n e d a f t e r b a s i c h y d r o l y s is of i铭 d e -
K e y w
o r d s s h i k o n i n : A l k a n n i n ; N a p h th a q u i n o
n e d e r i v a t iv e
紫草是我国传统 中药之一 ,其根人药 , 具有多种药理作用乌 s1 。 密花滇紫草 ( o on : 。 。
co 好er 、 m w . w . s m it h) 为紫草科滇紫草属植物 , 资源丰富 ,质量次于新疆软紫草 , 价
格低廉 , 应用很少 。 近年来 , 对新疆软紫草 ( 汉 r n e b i a e u c 人r o m a ( R o y l e ) J o h n s t . ) 研究
本文于 l , 87 苹 8 月收到 , 1 98 8 年元月收到修改稿 。
* 四月l大学化学系毕业生 。
元素分析由四川大学化学系邓应翔同志测定 ,其它仪器分析由四川大学测试中』白代作 ,在此一并致谢 .
植 物 学 报 3 1卷
甚多比 ` ,习 , 但对四川密花滇紫草的研究尚未见报道 。 为探索该品种是否具有开发价值 , 我
们对其化学成分进行了研究 。
研究结果表明 , 该紫草的主要化学成分有两种 : 夕, 口一二甲基丙烯酸紫草 素 , , 夕-
d i m e山 y l a e r y l s h i k o n i n ) ( 11) , 和乙酸紫草素 ( a e e t y l s h i k o n i n ) ( 111 ) , 含量少的有去氧紫
草素 ( d e o x y s h i k o n i n ) ( I ) 和紫草素 ( s h i k o n i n ) ( I V )等 。 ( 11) 、 ( 111) 、 ( Iv ) 均系光学右
旋体。 据报道 , ( 11) 及 ( 111) 具有较高的生理活性 〔卫,` ,8 」。
H O O拟HO O C H C H : C H~ C五R c/ H ,\ e H ,
R : H ( I )
0
0 O H
.
产洲、 』既火产护次H e H Z e~ (二去’1 1! l 、 C H -月0 0 0
、 · H /
( IV )
” . /
R : O C C圣卜勺C
0
n
R : O C C妇 ,
紫草素总含量测定结果表明 , 滇紫草根的皮质部分所含紫草素衍生物 , 经碱水解得到
的紫草素总含量与中等品级的新张软紫草根的相应含量接近 ,而根的木质部分含量甚少 。
因此 ,应充分利用其根 `的皮部石该品种的根大皮厚且易剥落 ,故其根的皮容易获得 。
在分离提纯单体如过程中 ,发现两种同质异晶体 (J I a ) 和 (l I b ) 。 测其圆二色谱 , 均
为光学右旋体 , 且克分子椭圆度 (。 ) 接近。 在新疆软紫草中也发现过两种 口,口一二甲基丙
烯酞紫素的左旋同质异晶体氏弋
实 验 部 分
仪器及试剂 显微熔点测定仪 , 温度计未经校正 ; eP r ik n 一 lE m e r 5 9 9 B 型红外光谱
仪 ; JN M 一 9 0 Q 型核磁共振仪 ; F i n i g a i n 一 4 5 10 型质谱仪 ; 1 10 6 型元素分析 仪 ; J 一 , o o C
圆二色谱仪 ; L C一 4 A 型高效液相色谱仪 。 柱层析用青岛 ( 10 一斗o芦 m ) 硅胶 ; 薄层色谱
用青岛硅胶 G 。
实验材料 由四川米易县中药材公司廖仁邦同志提供 ,标本采 自米易县 ,经四川大学
生物系副教授方明渊鉴定 。
(一 ) 紫草素总含量的测定
1
. 测定方法 〔2] 精密称取紫草根皮的干燥粉末 5g , 在索氏提取器中用石油醚 ( 30 一
6 0 0C )提取 , 提取液冷却后依次用 o . Zm o l八 N a o H 水溶液 3 0 、 2 0 、 l o m l 萃取及水 l o m l 洗
涤 ; 台并萃取液和洗液 ,放置 24 小时后 , 加人 。 . , m ol 八 H Z s O ; 30 m l (溶液由蓝色变为红
色 ) ,摇匀 ,放置 2 小时 ,析出晶体 ,过滤于恒重的漏斗中 ,用水 l om l 洗涤 3 次 , 105 ℃ 干
燥至恒重 ,精密称量即得试品中所含紫草素的重量 。
2
. 被侧物质的确定 由上述所得紫红色固体 , 用苯重结晶得红褐 色针状 晶 , m . .P
艾克蕙等 :密花滇紫草蔡醒成分研究及紫草素含量侧定
,朴 ~ 149 ℃ , 经元素分析 、圆二色谱测定以及 M S 、 IR 、 ’ H 一 N M R 等方法确 定为右旋紫
草素 ( s h ik o n i n ) 。 图谱与 ( I V ) 同 。
3
. 测定数据与结果
表 1 测 定 数 据
T a b l e 1 D e t e r m i n e d d a t a
测定项 目
D e t e r m i n e d
取样量 ( g )
A m o u n t
o f
s a m P l e ( g )
紫草素量 ( g )
样品 名称 ~
N a m e o f s a m P l e s
l e C O n t e n t 0 1
s h i k o n i n ( g )
百分含量 (% )
C o n t e n t (% ) 叱% )
密花滇紫草根的皮质部
R o o r b a r k o f O n o s o a c o n j
亡 , 才“ 解
5
.
0 9 4 4
4
。
9 8 7 7
5
.
0 0 7 4
5
.
0 07 0
4
。
9 97 7
0
。
09 6 9
0
。
10 4 0
0
.
1 0 j 0
O
。
10 64
0
。
1 0 88
密花滇紫草根的木质部
卫 o o t x y l e m o 士 O 俘 。 ,解 a c o 月 f e r t “ 叨
4
。
99 6 9
5
。
0 13 4
4
。
9 97 6
0
.
0 18 9
0
.
0 20 0
0
.
0 2 19
0
。
3 8
0
。
40
0
。
4 4
新疆软紫草的根
R o o f o f A r 月 亡b f a 亡u c h r o 仍 a
5
。
06 9 1
5
.
0 1 1 1
4
。
9 9 7 7
5
.
0 0 19
0
.
0 6 90
0
.
0 8 0 9
0
.
06 9 6
0
。
0 7 4 1
3 6
6 l
3 9
牛8
{
平均含 :巨…弓
据报道 〔2 1新疆软紫草中紫草素的含量 (多) : 优等品为 斗. 98 一 4 . 3 ;3 中等品 为 .3 42 一
2
.
21 ; 次等品为 1 . 5 一 1 . 1 1 。 由实验可知密花滇紫草根的皮部质量应接近中等品 级 的 新
疆软紫草 。
(二 ) 单体的分离与鉴定
1
. 提取分离
四川密花滇紫草根皮的干粉 , 石油醚 ( 30 一 60 ℃ )索氏提取 ,得暗红色稠状物 ,收得率
为 5 . 3 8多 。 用甲醇溶解 ,滤去不溶物 , 回收甲醇 ,残留物用石油醚溶解 ,柱层分离 。 湿法装
柱 ,柱比 、砂 . 5 x 37 c m , 石油醚 一乙酸乙醋 ( 10 0 :0 一 .3 3 )梯度淋洗 , 得 10 多个谱带 , 主要
有两个 , 分离得到 5 个单体 。
2
. 化学结构鉴定
( )I
, 由柱上分离所得的粉红色带的洗脱液 ,经浓缩 、丙酮溶解 、 冷却 、 滤去白色不溶
物 , 滤液浓缩得红色固体 , 经正己烷重结晶 ,得鲜红色片状晶 , m . p . 90 一 91 ℃ 。 M s ( m /
二 ) : 2 7 3 ( M + 十 1 ) , 2 7 2 ( M + ) , 2 0斗 [ 2 7 3 一 6 9 ( ( C H 。 ) ZC一 C H C H Z ) ] , 8 3 ( ( C H 。 ) ZC =
C H C } { Z C H
Z
)
, 6 9 (基峰 , ( e -l1 3 ) ZC一 c H e H Z ) 。 I R K B r ( e m 一 ` ) : 16 1 0 ( C一 O ) , 15 7 0 、 x 4 6 0
( A
r )
,
1 38 0 ( C H
3
)
,
12 4 0
、
1 2 10 ( O H )
,
s x o ( A r 取代 ) 。 ` H 一 N M R 仁C D C I: )占: 1 . 6牛 , 2. 6 8 ( s ,
各 3 H ,
)
C一 C ( e H 玉)2 ) , 2 · 2 9 (m
·
ZH
, e H
ZC H
Z ( : 、。一C戈) , 2 · 6 3 ( t , ZH , C H ZC H Z C H一 ( ) ,
,
· ` 2
(
t , `H , C H Z一 C H一
( )
, 6
·
8 3 ( 8
,
I H
,
Q
· `一 H ) , 7 · 12 ( S , Z H , 2 x A一 H ) , * 2 · 5 1 , 1 2 · 4 ;
( s
, 各 I H , 2 x A r 一 o H ) 。 数据与文献中去氧紫草素 ( d e 。 、 、 s h i k 。 n i n ) 一致 卜 , , 5 , e
( n )
, 由柱上红色带的洗脱液 ,浓缩得暗红色固体 , 经石油醚多次重结晶得两种晶体 。
52 5植 物 学 报 31卷
( l
a
)
, 石油醚重结晶得红棕色长方形片状晶 , m . p . 1 15 . 5 一 1 16 .0 ℃ , 圆二色谱测
定为光学右旋体 。 C D ( d e g · e m ` · dm o l一 , ) : [。 ] , 、 ; n 。 + 1 60 4 , [。 ] 3, ; n 。 一 1 3 0 9 , [ 。 ] 2 7。。 。 十
2 6 19
,
[。 ] 2 08 。 二 + 2 6 19 4 。 元素分析 C Z , H , 2 0 。 ( 多 ) , 计算 信 : C , 6 8 . 0 8 ; H , 5 . 9 9。 实钡〔值 :
C
, 6 7
.
9 6 ; H
, 5
.
9 5 。 M S ( m /
z ) : 3 7 0 ( M
十
)
, 3 5 3 [M
千一 x s ( O H ) } , 2 7 l LM ` 一 9 9匕( e H ,、 ` C 一
·· ·。 。 )」, 2 7 0 1· 、 - 1。。 (· · / ) 2· - · · · · 。 · J , 2 5 5 L2 7 。一{忡),B 3 (基峰 , ( e H 3 ) ZC 一 e H C O ) , 6 9 ( ( C H 3 ) ZC 一 C H C H , ) 。 I R K 。 「 ( c m 一 ’ ) : 3 4 2 0 ( O H ) , 3 0 6 0 ,
1 5 7 5
,
14 65 ( A
r
)
,
17 2 0
,
1 14 0 ( C O O R )
,
16 2 0 ( C一 O ) , 16 5 0 ( C = C ) , 12 2 0 , 12 10 ( o H ) , 5 6 0 ,
7 6 0 ( A r 取代 ) 。 ’ H 一 N M R ( C D C 13 ) ` : 1 . 6 8 , 1 . 5 8 ( 。 , 各 3 H , H C一 C ( e H 3 ) : ) , 2 . 16 , 1 . 9 4 ( s ,
各 3H , ( e H 3 ) , C = e H e o ) , 2 . 5 5 (m , ZH , C H Z ( C H 3 ) ZC一 C H C H Z ) , 5 . 14 ( t , J 一 6 · 6 H z ,
I H
, e H
Z e H
=c <
)
, 。 · 7 8 ( 名 , I H ·
)
e 一 e H C o ) , 6 ·。 2 ( t , J 一 6 · ZH 一 , H , O C H C H Z ) ,
6
·
9 7 (
s , I H
,
Q u i n 一 H )
,
7
.
18 ( s
,
ZH
,
2 x A r 一 H )
,
22
.
5 3
,
12
.
4 2 (
s , 各 I H , 2 x A r O H )。 数
据 与文献中 夕,月一二甲基丙烯酞紫草素 (月,月一d im e t } I v l a e r y l s h i k o n i n ) 一致 〔` , , ,。
( H
b
)
, 石油醚重结晶得深红色花状针晶 , m . p . 1 05 ~ 106 ℃ , 圆二色谱测定为光学
右旋体 。 C D ( d e g · 。m , · d m 。 l一 ` ) : [。 1二 。 二 + 15 2 1 , [。 1。1、 。 。 一 一0 9 5 , [。 ] 27 0 。 。 + 2 5 3斗 ,
[。 ] , 。 : n m 十 2 5 3 4 2 。 元素分析 C Z: H 22 o 。 (务 ) ,计算值 : C , 6 8 · 0 8 ; H , 5 · 9 9。 实测值 : C ,
6 7
.
5 。 ; H , , . 9 6。 IR 、 M s 、 ` H一 N M R 数据与 I l a 完全相同 , 是另一种晶形 的 夕,声一二甲基
丙烯酚紫草素【,一飞
( IJ )
, 继续洗脱一红色带 , 洗脱液浓缩 , 冷却后即得晶体 。 石油醚一乙酸乙醋 ( 9 , :匀
重结晶 , 得红色长针状晶 , m . p . 107 一 108 ℃ 。 圆二色谱测定为光学右旋体 。 C D ( d e g ·
c m
,
·
d m o l
一 ,
)
: [。 ] , n m + 9 15 0 , [。 ] 2、 n 。 一 6 2 0 0 , L。 ] 2 ; , n 。 十 8 0 8 8 , 〔。 ] 21 2 n 口 + 2 6 9 6 0 。 元
素分析 C : SH : , 0 6 (关 ) ,计算值 : e , 6 5 . 4 4 ; H , 。 . 4 9 。 实测值 : c , 6 5 . 6 5 ; H , 5 . 4 7。 M s ( m /
z
)
: 3 3 0 ( M
+
)
,
3 2 3 [M
+ 一 一7 ( o H ) ] , 2 7 0 [基峰 , M + we 60 ( e H 3C O O H ) ] , 2 7 1 [ M + 一 弓9
、
(一 ) , , 2 5 5 〔’ 7。 一 `” (一 ” , 2 , 6 L2 7 ` 一 ’ 5 ( C H ” ” ’ 2 ` 9 {护广C一 )”6 9 ( ( C H 3 ) ZC= e H C H Z )。 IR K B r (。 m一 ` ) : 3 4 7 0 , 12 15 ( o H ) , 17 4 0 , 12 4 5 ( C O O R ) , 一6 2 5 ( C一
o )
, 1 6 5 5 ( C一C ) , 1 5 8 0 , 14 6 0 ( A r ) , 7 9 0 ( A : 取代 ) 。 ’ H 一 N M R ( C D C 13冲 : 1 . 6 9 , 1. 5 8 ( s , 各
3 H
,
( C H
3
)
ZC = C H )
, 2
.
15 (
s , 3H
,
e H
, e o )
,
2
.
5 2 ( m
,
ZH
,
e H一 C H Z ) , 5 . 1 3 ( t , I H , C H Z -
e H一 C<)
,
6
·。 2 ( t , I H , o 一 e H 一 e H Z ) , 6
.
9 9 (
S , I H
,
o · i一H ) , 7 · 18 ( S , 2 x A r 一 o H ) 。 数据
与文献报道乙酞紫草素 ( a e e t y l s h i k o n i n ) 一致。 , , , ` , 。
( Iv )
, 由石油醚一乙酸乙醋 ( 10 : 3 . 3 )洗脱液中 , 得一暗红色固体 , 晶 , 得
红褐色微针状晶 ,
d。 。 l一 ` ) : [。 ]。 4 a 二
m
.
p
.
14 8 一 14 9℃ , 圆二色谱测定为光学 右 旋体 。
用苯重结
C D ( d
e g
一
C IU
+ 4 0 0 0
,
[。 ] 3: 。。 二 一 l斗1 5 , L。 ] 2, , n 二 + 斗0 0 0 , [。 12 : 3 n 二 十 1 8 1 3 3 。 元素分
7期 艾克蕙等 :密花滇紫草茶酮成分研究及紫草素含量测定 5 53
析 C:6 H:6 0, ( 务 ) , 计算值 : C , 6 6 . 6 7 : H , 5 . 5 6 。 实测值 : C , 6 6 . 8 4 : H , 5 . 5 3 。 M s ( m / z ) :
2 8 9 ( M
+
+ x )
,
2 7 1 [ 2 8 9 一 18 ( H ? O ) ] , 2 2 0 [基峰 , 2 8 9一 6 9 ( ( C H 3 ) ZC = C H e H Z ) ] , 2 19 [M 十一
6 9 [ ( e H
,
)
ZC 一 c H e H Z ] , 2 0 2 [ 2 2 0 一 18 ( H ? O ) ] , 19 1 [ 2 2 0 一 2 9 ( C H O ) ] , 一6 3 [ 2一9一
5 6 ( 2 x C一 O ) ] , 6 9 [ ( C H 、 ) ZC一 C H C H Z ) ] 。 IR K B r ( e m 一 ` ) : 3 2 7 0 , 12 3 5 , 12 10 ( O H ) , 1 6 10 ,
( C一O ) , 1 5 7 5 , 1斗5 6 ( A r ) , 1 1 10 ( C一 O ) , 7 7 5 ( b r , A r 取代 ) 。 ` H 一 N M R ( C D C 1 3冲 : 1 . 6 7 , 1 . 7 6
( s
,各 3 H , ( C H , ) ZC = C H ) , 2 . 4 9 ( m , Z H , C H 一 C H Z ) , 斗· 9 2 ( m , I H , C H 一 C H Z ) , 5 . 2 1 ( t , I H ,
e H
Z一 e H一 ) , 7 . 1 9 心s , 3 x A r 一 H ) , 7 . 2 8 ( s , O H , D , O 交换消失 , 与芳环默基鳌合〔7 , ) ,
12
.
, 8
,
12
.
4 8 (
s , 2 x A r 一 O H , D ZO 交
换消失 ) 。 数据与文献中紫草素 ( s hi
k o n i n )一致 “ , 5 ] 。
柱色谱还分离得到一种红色固体
v 不口一种黑紫色固体 VI ,需进一步确
定结构 。
3
. 图 1 为四川密花滇紫草根皮的
石油醚提取物的 H P L C 结果。 色谱
条 件 是 : 色 谱 柱 O D s 一 e ; 、 , 10 ; ` m ,
4
·
6价 X 2 5 Om m (自装 ) 。 流动相 : i氯
仿 ( 14 ) : 甲醇 ( 5 2 ) : 水 ( 28 ) : 冰醋酸
( 6 ) ]
: [甲醇 ] 一 8 0 : 2 0 ( V / V ) 。 流
速 , l m l /m i n 。 温度 , 4 0℃ 。 压力 ,
14 1k g / e m
, 。 检测波长 , U V 2 7 O n m ,衰
减 , 0 . OZ a . u . f . s . 。
图中各成分的相对峰面积是 : [ I]
和 【川 共占 7 7 . 7 8弧 (由柱色谱带可
知 ( I ) 含量极少 ) , ( 111) 占 15 . 6 5多 ,
( I V ) 占 0 . 6 7多。 可见该紫草的主 要
成分是 ( H )和 ( 1 ) , 而这两种成分正
是紫草具有药理活性之所在 。
参
图 l
F i g
.
分 ( m i n )
四川密花滇紫草根皮的石油醚提取物的 H P L C 图
H P L C o f P e t r o l e t h e r
o f o ” o 万m a c o n f e r r “ 邢 W . W
.
e x t r a c t o f r o o t b a r k
S m i t h o f Si e h u a n
考 文 献
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12: 10 1一 10 5 。
仁4 1 林志彬 、 王佩 、 阮元 、 郭怜新 、 卢馥荪 , 19 8:0 月, 月一二甲基丙烯戮紫草素的伉炎症作 用的研究 。 中国药理学报 ,
1
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6 0一 6 3。
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[ 6 1 M o
r , m o , 0
.
1 T K i s ll i , 5
.
I k
e g a m i
「
a n
d Y
.
H i r a t a
,
19 6 , : N
a ph t h o q u i
n o n e d e r i , a t i v e : f r o m 口 t h口 , Po r . , .
亡 r y了人。无i之。 月 5 i e b o l d e t z u c c a r i n ; T e t r a 人a d r o 月 肠 `多 J , 5 2 : 4 7 37一4 7 3 9 -
{ 7 ] P a p
a g e o r g i o u
,
v
.
P
,
19 7 9 : I H
`
N M R s p e
e t r a o f n : t u r a l l y o c e u r r i n g i : ho
e x e n 了I n a p h t ha z a r in 禅g m e n t s , p l a ,
留a 材 e d ~ 3 7 : 18 5一 18 7 .
〔 8 ] Sa n k a w a , U , , 19 7 7 : A n t i t u m o r a e t i v i r y o f s b ik o n i n a n d i t s d e r i v a t i v e s . c 人e m . p人a r 二 . 刀。 11 , 2 5 : 2 39 2一
2 3 9 5
.