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鄂产竹节参多糖的抗炎、镇痛活性



全 文 :入、全面的研究。
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[收稿日期]2011-09-28
[基金项目]国家科技基础性工作专项重点项目(编号:SB2007FY020);武汉工业学院研究生创新基金资助(编号:09CX016) [作者简介]王
如锋,男,硕士,E-mail:wrffrw0801@163.com [通讯作者]陈平,女,教授,电话:027-83943842,E-mail:chenpingvip24@163.com
鄂产竹节参多糖的抗炎、镇痛活性
王如锋,陈平,贾放,马芳,汤进,杨小林 (武汉工业学院生物与制药工程学院,湖北 武汉430023)
[摘要] 目的:提取分离竹节参多糖,初步研究其化学组成及评价抗炎镇痛的活性。方法:采用化学法测定竹节参多糖的成
分,红外光谱分析其结构;采用二甲苯致耳肿胀模型、腹腔毛细血管通透性试验和小鼠热板、扭体试验分别考察其抗炎、镇痛
效果。结果:分析显示竹节参多糖中含有α-吡喃糖环结构;竹节参多糖能够有效延长小鼠痛阈值,减少扭体次数,抑制耳肿
胀,降低毛细血管通透性。结论:竹节参多糖为竹节参中抗炎镇痛活性成分之一。
[关键词] 竹节参多糖;成分;活性
[中图分类号]R96  [文献标识码]A  [文章编号]1001-5213(2012)07-0491-04
Study on the anti-inflammatory and analgesic activities of polysaccharides from Hubei Panax ja-
ponicas
WEANG Ru-feng,CHEN Ping,JIA Fang,MA Fang,TANG Jin,YANG Xiao-lin(School of biology &phar-
macy Engineering,Wuhan Polytechnic University,Hubei Wuhan 430023,China)
ABSTRACT:OBJECTIVE To extract polysaccharides fromPanax japonicus,study its composition and investigate its anti-in-
flammatory and analgesic activities.METHODS Panax japonicus polysaccharide ingredients were determined by chemical
methods.The polysaccharides structure was studied through the infrared spectrum.Models of anti-inflammatory reaction were
investigated by dimethyl benzene induced ear edema and celiac capilary's permeability experiments.Writhing test and hot-plate
were used to examine analgesic effects.RESULTS Analytic results indicated the presence ofα-pyranose of the glucose residue;
Panax japonicus polysaccharides effectively prolonged the pain threshold,reduced the number of writhing,inhibited the ear
sweling and decreased the capilary permeability.CONCLUSION Panax japonicus polysaccharides was one of the important
·194·中国医院药学杂志2012年第32卷第7期Chin Hosp Pharm J,2012 Apr,Vol 32,No.07
DOI:10.13286/j.cnki.chinhosppharmacyj.2012.07.002
ingredients for anti-inflammatory analgesic activities.
KEY WORDS:Panax japonicas polysaccharides;constituent;activity
  竹节参(Panax japonicus C.A.Mey)是五加科
人参属植物。在土家族苗族聚居区民间医疗中被
视为“草药之王”,属珍稀濒危的名贵中草药之一。
具有滋补强壮、消肿止痛、止血袪淤的功效,临床
上主要用于治疗病后虚弱,唠嗽咯血,咳嗽痰多,
跌扑损伤[1]。长期以来本课题组对鄂产竹节参进
行了较为系统的研究,前期工作主要是集中于脂
溶性部分的研究[2-3],对多糖成分研究较少;本课
题对湖北恩施产竹节参多糖成分进行了初步分析
并对其抗炎镇痛活性进行评价,为竹节参的开发
利用奠定基础。
1 材料
1.1 仪器 UV-5800PC型紫外分光光度计(上
海元析仪器有限公司);NEXUS 670傅立叶红外光
谱仪(英国Nicolet公司);高速万能粉碎机FW80-
1(天津市泰斯特仪器有限公司)。
1.2 试药 竹节参购于恩施[经武汉工业学院陈平
教授鉴定为五加科人参属植物竹节参(Panax ja-
ponicus C.A.Mey)的根茎];考马斯亮蓝、牛血清白
蛋白 (Biosharp,Germany);间羟基联苯 (Acros
Orgincs,Belgium);淀粉、葡萄糖(上海国药集团有
限公司);阿司匹林片(武汉远大制药集团有限公司,
H42021692),其余试剂均为分析纯。
1.3 实验动物 昆明种系实验小白鼠,体质量20
~30 g(武汉生物制品研究所实验动物中心,
SVXK:2008-0003),所有试验动物均食用全价混
合饲料,自由摄食、取水。
2 方法
2.1 竹节参多糖成分的提取分离 将竹节参粉
碎,过60目筛,取粉末500 g;用1 500 mL80%乙
醇75℃回流提取4 h,提取3次,晾干;分别加入
12,10,8倍量纯化水,水浴95℃提取3次,每次3
h;过滤,离心,上清液浓缩至一定体积,缓缓加入
95%乙醇至乙醇体积分数为80%,静置,过夜,离
心。干燥,得竹节参粗多糖;利用Sevage法(V氯仿∶
V正丁醇=4∶1)除蛋白,浓缩多糖水溶液至一定体
积,醇沉(乙醇终体积分数为80%),4 000 r·min-1
离心收集沉淀,依次用95%乙醇、无水乙醇、丙酮、
无水乙醚洗涤,干燥。
2.2 竹节参多糖化学成分的测定 采用硫酸-苯酚
法[4]、间羟基联苯法[5]、考马斯亮蓝法[6]和碘显色
法[7]分别测定竹节参多糖中总糖、糖醛酸、蛋白质和
淀粉含量。
2.3 FT-IR光谱结构表征 取少量多糖,KBr压
片,在4 000~400 cm-1范围内进行红外扫描分析。
2.4 抗炎镇痛活性研究[8-9] 抗炎试验选用雌性小
鼠;镇痛试验选用雄性小鼠,其中热板试验选用经预
选[热板温度在(55±0.5)℃,小鼠痛阈在5~30 s
之间)合格小鼠进行。各项试验均取50只随机分为
5组,每组10只,即模型组(给予等量生理盐水);阳
性对照组[给予阿司匹林溶液(280 mg·kg-1)];竹
节参多糖低(60 mg·kg-1)、中(120 mg·kg-1)、高
(240 mg·kg-1)剂量组,每次按0.2 mL·10 g-1,连
续灌胃给药7 d。
2.4.1 二甲苯致小鼠耳肿胀试验 末次给药后1
h,按0.1 mL·10 g-1于小鼠右耳前后两面涂抹二甲
苯,1 h后处死小鼠,剪下双耳,用直径8 mm的打孔
器于耳廓的相同部位打下圆耳片,称重并计算耳肿
胀度和抑制率。肿胀度=右耳质量-左耳质量,抑
制率=(空白组肿胀程度-药物组肿胀程度)/空白
组肿胀程度×100%。
2.4.2 醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性试验 末
次给药后1 h,按0.1 mL·(10 g)-1尾静脉注射
0.5%依文思蓝生理盐水,随即按0.1 mL·(10 g)-1
腹腔注射0.6%醋酸生理盐水,25 min后颈椎脱处
死小鼠,剪开腹腔,用6 mL生理盐水分3次冲洗腹
腔,吸出腹腔液至带刻度试管中,生理盐水补至10
mL,4 000 r·min-1离心15 min,取上清液于590 nm
处测定OD值。
2.4.3 小鼠扭体试验 末次给药后1 h,按0.1 mL
·10 g-1腹腔注射0.6%醋酸生理盐水,记录注射醋
酸后25 min内小鼠扭体次数。
2.4.4 小鼠热板试验 各组给药前测定基础痛阈
(s)。末次给药后,分别测定30,60,90,120 min时
的小鼠痛阈值。痛阈值大于60 s者视为60 s。
2.4.5 统计学方法 采用软件SPSS18.0进行试
验数据处理,用LSD-t检验进行各试验组与空白组
的比较,以珚x±s表示。
3 结果
3.1 竹节参多糖收率 通过该方法获得灰白色竹节
参粗多糖96.4 g,收率为19.28%。
3.2 竹节参多糖化学成分的测定 竹节参多糖中
相关化学成分的标准曲线回归方程(A为纵坐标,C
mg·mL-1为横坐标)见表1。试验测得竹节参多糖
·294· 中国医院药学杂志2012年第32卷第7期Chin Hosp Pharm J,2012 Apr,Vol 32,No.07
中总糖含量高达96.64%,糖醛酸含量为18.32%,蛋
白质含量为0.73%,淀粉含量为19.72%,这表明该
方法提取分离所得竹节参多糖中蛋白质含量很少,
Sevage法可以较好除去杂蛋白。
表1 竹节参多糖化学成分的标准曲线回归方程
Tab 1 The standard curve regression equations of the in-
gredients of Panax japonicus polysaccharides
标准曲线 回归方程 r
葡萄糖 A=1.452 5C+0.059 9  0.999 8
半乳糖醛酸 A=0.001 4C+0.000 3  0.999 9
牛血清白蛋白 A=0.445 0C-0.012 4  0.999 1
淀粉 A=0.127 0C+0.002 4  0.999 7
3.3 竹节参多糖红外光谱[10-11] 红外光谱见图1
结果显示:竹节参多糖在3424.78 cm-1处强而宽峰
是羟基 O-H 键的伸缩振动产生的吸收峰,2 930
cm-1处是亚甲基上的-CH-的伸缩振动峰,1 633
cm-1是C=O键的吸收峰;v(C=O),1 736 cm-1和
vas(C=O),1 627 cm-1,这两处峰说明(COO-)的
存在;v(C-O),1 412 cm-1;1 738,1 627和1 405
cm-1三处吸收峰暗示糖醛酸的存在;1 157 cm-1处
为α-吡喃糖环的醚键 C-O-C 伸缩振动峰,1378
cm-1附近是-C-H的变角振动峰,1 083 cm-1处再次
说明环内醚 C-O-C的存在,1 020 cm-1处为羟基
C6-O-H变角振动峰,762 cm-1处为吡喃环的对称
伸缩振动峰。
图1 竹节参多糖红外光谱
Fig 1 IR spectra of Panax japonicus polysaccharides
3.4 抗炎镇痛活性
3.4.1 二甲苯致小鼠耳肿胀试验 试验结果表明,
竹节参多糖对消除小鼠耳肿胀有一定的作用,在低、
中、高3组别中,多糖中剂量组表现出最好的抑制作
用,抑制率达到38.08%,但与阿司匹林抑制效果
(55.95%)相比有一定差距,结果见表2。
表2 对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响(珚x±s,n=10)
Tab 2 Effect on ear edema induced by dimethyl benzene in
mice(珚x±s,n=10)
组别 剂量/mg·kg-1·d-1 耳肿胀度/mg 抑制率/%
空白组 - 38.6±9.8 -
阳性对照组 280  17±4.5b  56.0
多糖低剂量组 60  31.2±8.6  19.2
多糖中剂量组 120  28.6±8.2a 38.1
多糖高剂量组 240  28.3±10.4a 26.7
注:与空白组比较,aP<0.05
3.4.2 醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性试验 结
果表明,与空白组相比,竹节参多糖低剂量组无显著
性差异(P>0.05),中剂量组有显著性差异(P<
0.05),多糖高剂量有极显著性差异(P<0.01);但
三者的效果都低于阿司匹林组,结果见图3。
图3 对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性影响
Fig 3 Effect on permeability of celiac capilary induced by acetic
acid in mice
3.4.3 小鼠扭体试验 由图4可知,与空白组相
比,竹节参多糖中、高两个剂量组均能明显降低小鼠
扭体次数(中剂量P<0.05,高剂量组P<0.01),虽
效果不及阿司匹林组,但仍具有统计学意义。
图4 对小鼠扭体试验的影响
Fig 4 Effect on acctic-acid induced writhing in mice
3.4.4 小鼠热板试验 由表3可知,多糖中剂量组
和高剂量组在不同时间均对延长痛阈值表现出显著
和极显著作用,且疗效相似。
表3 热板试验结果(珚x±s,n=10)
Tab 3 Effect on the pain threshold of hot plate test in mice(珚x±s,n=10)
组别 给药前阈值
给药后阈值
30 min  60 min  90 min  120 min
空白组 12.1±1.6  12.2±2.5  12.8±3.3  13.6±2.6  14.2±4.2
阳性对照组 11.8±2.0 27.5±5.4b  28.7±7.6b  27.7±4.0b  24.7±6.1b
多糖低剂量 12.4±2.3  13.5±2.4  15.5±3.5  16.6±4.3  14.8±2.6
多糖中剂量 12.0±2.2  15.4±2.0a 20.4±3.1b  19.3±3.6b  16.9±3.0a
多糖高剂量 12.1±1.9  15.8±2.0a 19.7±3.2b  17.5±2.7a 17.6±3.4a
注:与空白组比较,aP<0.05,b P<0.01
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4 讨论
通过对湖北恩施产竹节参多糖成分的初步分析
研究,表明竹节参多糖中含有部分糖醛酸,红外光谱
进一步证实糖醛酸的存在,并提示该多糖含有α-吡
喃糖环的结构;近年来,有关不同植物多糖的抗炎镇
痛活性研究的文献报道逐渐增多,例如树舌多糖、刺
山柑多糖和金晶绿舒筋多糖等。本文通过对抗炎镇
痛活性的研究,表明竹节参多糖具有一定的抗炎镇
痛功效,为竹节参药材的进一步开发利用提供了实
验依据。
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[收稿日期]2011-10-10
[基金项目]陕西省自然科学基础研究计划重点项目(编号:Sj08-2D07) [作者简介]魏少阳,男,硕士,研究员,电话:029-87253356 [通讯作
者]陈萍,女,硕士,研究员,电话:029-87251787,E-mail:cp3049033@163.com
朱砂在不同消化液中溶出汞的含量测定及影响因素分析
魏少阳1,朱胤龙1,粱馨月2,力荔1,陈萍1 (1.陕西省中医药研究院,陕西 西安710003;2.西安石油大学,陕西 西安
710065)
[摘要] 目的:测定朱砂在消化液中不同形态汞的含量,分析影响汞溶出的因素。方法:采用化学消化-原子吸收光谱法,考察
胃肠道中存在的各种化学因素(酸度、胃蛋白酶、硫化钠、单质硫、氯化钠、氯化钾离子浓度等)对朱砂不同形态溶出的影响,并
与纯品硫化汞做对比。结果:pH对朱砂中汞的溶出量有较大的影响,朱砂在人工肠液中溶解极少,含 Na2S及单质硫对朱砂
中汞溶出量的影响显著,溶液离子(Na+、K-)、胃蛋白酶对朱砂溶出影响很小。结论:朱砂在消化液中的不同形态汞(无机态、
有机态、离子态)的溶出量与 HgS含量、酸度、硫化物有关。
[关键词] 朱砂;硫化汞;形态;AAS
[中图分类号]R284.1  [文献标识码]A  [文章编号]1001-5213(2012)07-0494-03
Determination of the content of mercury and analysis of the influencing factors on the dissolution
of cinnabar in digestive juice
WEI Shao-yang1,ZHU Ying-long1,LIANG Xing-yue2,LI Li 1,CHEN Ping1(1.Academy of Traditional Chinese
Medicine of Shanxi province,Shanxi Xi’an 710003,China;2.Xi'an Petroleum Institute,Shanxi Xi’an 710065,China)
ABSTRACT:OBJECTIVE To determine the content of mercury in different speciation and analysis the of influencing factors on
the dissolution of cinnabar in digestive juice.METHODS The content of total mercury in various dissolution of cinnabar were
analyzed by Chemical digestion method-AAS method.The effects of different chemical factors in gastrointestinal tract,i.e.
pH,pepsin,ionicstrength,Na2S,So,Na+、K+on the dissolution speciation of cinnabar were investigated.RESULTS The solu-
bility of cinnabar could be increased significantly in the presence of Na2S/So,and strong acidic pH,respectively.While Na+,
·494· 中国医院药学杂志2012年第32卷第7期Chin Hosp Pharm J,2012 Apr,Vol 32,No.07