全 文 ：药 学 学 报
A et aPh ar m a c e ut ie a S in i e a8 1 9 5, 2 0 ( 5 ) : 32 6、 3 3 0
直茎紫荃对细粒棘球蜘作用的电镜观察
陈钦铭
王志刚
叶于聪
熊素梅
寇星灿
方明明令
许子俊
阎风菊 .
(青海省高原心胜病研究所 , * 青海省测试计算中心 , 西宁 )
握共 感染细拉棘球拗 病的小白鼠经直茎紫茧总碱治疗后 , 其体内棘球坳生发膜的超微结构
有明显变化 , 主要表现为生发膜皮层细胞微 毛消失 , 细胞器 排列紊乱 , 胞浆中微管局限性扩张 、
破裂 , 溶阵体增多 , 高尔基复合体数目减少 , 线粒体肿胀和退行性变 。 棘球坳生发 膜外表 面和 内
表面出现许多陷窝 , 如同 “溃疡 ”外观 。 初步结果表明直茎 紫茧总喊对 细拉棘球翰有 广泛的细胞内
效应。
关. 词 直茎紫茧 , 细粒棘球勤 , 透射电子显微镜 , 扫描电子显微镜
直茎紫荃 (co o d al is st 八 ct a st eP h , 中国科学院西北高原生物研究所何廷农同志鉴定 )
系罄粟科紫荃属植物 。 该属植物在我国分布较广 , 资源丰富。 国内外对本属植物已进行过一
些化学研究 ` , , 2 ’ , 发现所含成分主要为异哇琳类生物碱 , 有镇静 、 止痉 、 消炎 、 降压 、 增加
冠脉血流量等药理作用 ` 2 , 3 , 。
本文报道的直茎紫茧为多年生草本植物 ,生长在我国青海高原玉树 、 互助等地海拔 2 5 0 0
~ 4 1。。 m的山坡地 。 民间用于清肝胆之热 , 治瘟病时疫 。 用直茎紫荃治疗包虫病在国内外尚
未见有报道 。 我们在发现直茎紫茧对小鼠包虫病有较好疗效的基础上“ ’ , 应用透射 电 镜 和
扫描电镜观察了直茎紫荃总碱对 实验性 细粒棘球坳超微结构 的影响 , 以便为临床用药提供
依据。
材 料 与 方 法
直茎紫茧 采自青海省互助县 , 系全草 , 利用离子交换树脂 法提取 总碱 (每 1 k g 生药
中含 570 m g 总碱 ) , 做成含 。 . 2%直茎 紫荃总碱的药饵 。
棘球坳 实验用 25 ~ 30 9雌性昆明种小鼠 , 每鼠腹腔注人细粒棘球绦虫原头蝴 2 0 0 0 个。
将 20 只感染原头拗 2个月的小鼠随机分为两组 , 对照组服正常饲料 , 实验组灌服直茎紫 董
总碱食饵 , 平均每鼠服药总量为 6 50 m g / K g , 停药后观察 1个月 , 于小鼠感染后 5 个月拉颈
处死 , 取棘球拗 , 称重 ; 计算囊肿减轻率 , 少数坳囊供制作病理切片与电镜观察标本 , 其余
拗衰供腹腔重移植试验用 , 经 3 个月后解剖小鼠 , 观察棘球坳的最终转归与生发膜修复的可
能性 。
透射电镜标本制备 从两组棘球坳中各取 Z x 4 m m 组织块一个 , 用 2 . 5% 戊二醛和 l %
俄酸固定 , 梯度乙醇脱水 , 环氧树醋 6 18 包埋 , L K B 超薄切片机切片 , 醋酸铀 与拘椽 酸铅
双重染色 。 H 一 60 0 型透射电镜下观察 ( “ ’ 。
扫描电镜标本制备 材料来源与透射电镜同 , 分别 经戊 二醛 、 1% 镶酸和 2% 丹宁酸固
定 , 梯度乙醉脱水 , 醋酸异戊醋置换 , 临界点干燥 , 真空喷镀铂后用 H一 3 0 型扫 描 附 件观
本文于 1 98 4 年 8 月 1 日收到
5期 药 学 学 报
察 (` ’ 。
结 果
感染后 10 5夭的 0 1只对照组小鼠 , 每鼠体内的棘球蜘数平均为 2 0 ~ 3 0 个 , 体积平均
24 0土 57 m m ” , 湿重平均 5 0 士 1 3 m g , 囊内含无色或淡黄色液体 , 病理切片可见 发育 良好
的生发膜与排列整齐 、 较厚的板状层 , 直茎紫荃总碱治疗组的 10 只 小鼠 , 每鼠体内棘球坳
平均为 4 0~ 5 0个 , 体积平均 4 7 土 1 2 m m 3 、 湿重平均 1 6 4 士 5 7 m g , 两组相 比有 非常显 著差
异 ( P < 。 . 0 1 ) 。 病理切片显示整个囊壁很薄 、 板状层纤维断 裂并 有空饱形成 , 生发膜呈现
退行性变 。
囊肿重移植试验结果表明对照组的棘球坳给 10 只小鼠重移植 , 全部 引起包虫 感染 (阳
性率为 1 0 % ) , 直茎紫茧总碱治疗组蝴囊给 10 只小鼠重移植 , 有 4 只小鼠仍引 起包虫感染
<阳性率为 40 % ) , 其余 6 只小鼠体内的拗囊呈现变性 , 坏死 , 失去感染能力 。
《一 ) 扫描电镜现察
对照组生发膜外表面 (板状层面 ) 有高低不平的丘状隆起 , 表面可见长短不等直径较一
致的微绒毛 (图 l) 。 生发膜内表面 (囊腔面 ) 呈现柱状 、 丘状突起 与深 浅不一的 凹陷 , . 表
面有许多球形与鹅卵石样的小赘生物 , 系内生性子囊 , 其表面可见微绒毛 (图 2 ) 。
实验组生发膜外表面 (板状层面 ) 有许多大小不等 、 深浅不一 、 边缘不整齐的沟 ( gr 。 。 -
v 。 ) 和洞 ( h ol es ) , 并可见脱落的细胞碎片 (图 3) 。 生发膜内表面 (囊腔面 ) 的乳 头 状或
柱状突起排列紊乱 , 未见有内生性子囊 , 但可见大量不规则形细胞碎片与喷火口 样结构 ( c卜
a t e r l i k e s t r u e t u r e ) (图 4 ) 。
《二 )透射电镜观察
对照组棘球坳的板状层由细丝和小泡构成 。 生发膜含皮层细胞 、 肌细胞 、 焰细胞 、 导管
细胞等 , 细胞间未发现连续性复合物 。 其中以皮层细胞为最重要 。
1
. 皮层区与板状层相邻接 , 由皮层细胞的远端胞浆和微毛构成胞浆合胞体区带 , 微毛
数量多 、 发育良好 , 其壁具有内外双层膜结构 , 中间含有低电子密度物质 (图 5 ) 。
2
. 皮层细胞区为生发膜的第二区带 , 皮层细胞通常有一个位于细胞 中央 的胞核 , 核内
有一个大核仁 , 核质均匀 , 核膜为双层膜 , 并有核孔 , 在核周胞浆内可见丰富的微管 、 高尔
基复合体 、 线粒体 、 溶酶体 、 内质网 、 囊泡 、 核糖体及糖原颗粒等 (图 6 )
经直茎紫荃总碱治疗后的棘球坳生发膜有一系列超微结构改变 : 微毛发育不良或消失 ,
皮层细胞微管扩张 、 破裂 (图 7 ) ; 线粒体排列紊乱 、 内外膜肿胀 、 峭变形或断裂 , 有些线
粒体基质混浊 , 而另一些线粒体的基质减少 、 电子密度降低 、 出现空饱等退行性变 (图 8 ) ,
高尔基复合体离开核附近 , 解体为不规则的高尔基器 , 出现小饱与小池散布于胞浆中 , 溶酶体
数量增多 (图 9 ) , 有些细胞核的核周间隙扩大 , 呈现异染色质边聚现象 ( C h or m at in m ar -
g i n a t i o n )
, 有的胞核核膜破裂 , 核质外溢 (图 2 0 ) 。
讨 论
已知生发膜具有产生原头蝴 、 形成子囊 、 分泌囊液等功能 , 并与板状层的形成有关 。 经
直茎紫茧总碱治疗后 , 扫描 电镜观察到生发膜表面出现许多大小不等陷窝 , 如同糜烂面 。 一
般认为皮层细胞合成的分泌物与板状层形成有关 , 而后者又起到保护层作用 , 使虫体免遭宿
主攻击 , 并控制着营养物质的输送 , 另外皮层细胞合成的水解酶经微管系统运转到板状层 ,
药 学 学 报 2 0卷
S a n n ei ng el ec t ro nmi o r es eo y Po fE ei h .o o e e e“ aG ra” “ lo a“ 5c ys ts .
Fi g 1
.
No rm a la P Pa a r eo n e ef t hu o et es ru r fc ao efg . rmi na lm em b ra n e; no t et h emi r eo t ric h es
,
X 6 0 0 0
F ig 2
.
N o r m a l a P P e a r a n e e o f t h . in n o r s u r f a e e o f s e r m in a l m e m b r a n e s h o w in g P r o t r u s io n
a n d t h . b r o o d e a P s u l e x 6 0 0 0
F is 3
.
T h e i r r e ` u l a r o u t e r s u r f a e e o f g e r m i n a l m e m b r a n e a n d th e n u m e r o u s p i t s , x 12 0 0
.
F ig 一 T h e d i s o r d e r i n n e r s u r f a e o o f g e r m in a l m o m b r a n e , d r o P p e d c e l l d比 r is o s a n d t h e c r a t o r -
s h a P e d P i t s
.
x 2 40 0
T r a n s m i s s i o n . l . c t r o n m i e r o s e o p y o f t h e g e r m i n a l m e m b r a n e o f E e h i n o e o e e “ 吕 G r a ” “ 10 8 “ a c y s t s
可起到营养物质的细胞外消化作用 , 当胞浆微管系统遭受破坏时 , 引起水解酶在合成部位长
时间堆积 , 导致细胞 自溶 , 推想棘球坳表面陷窝的形成可能与此机理有关 。
透射电镜观察到皮层细胞远端胞浆与微毛发育不良 、 微毛结构破坏 、 远端胞浆内空泡增
多 。 L as ca n 。 等 ( 6) 认为生发膜皮层区是大分子物质渗透到棘球坳内唯一的物理屏障 , 因而随
着皮层区发育受阻与微毛消失 , 使生发膜对大分子物质渗透的栅栏作用受到影响 。 其次 , 胞
浆内微管局限性扩张或破裂 , 可引起细胞支架与细胞器间隔消失 , 分泌物在合成部位堆积与
运输通道的阻塞 , 导致细胞变性与溶解。 第三 , 核膜完整性破坏及核质外溢将对核内 、 外物
质交换及遗传信息传递产生产重影响 。
上述结果表明药物经胃肠道吸收后可以通过棘球勤囊壁的屏障进人囊腔 , 从而发挥药物
5 期 药 学 学 报
F ig 5
.
F i g 6
.
F i g 7
.
F ig 8
.
F ig 9
.
F 19 1幻
U n t r e a t o d m i e 。 : T h e n o r m a l a P P e a r a n c e o f t h o g e r m i n a l la y e r t i s s u e 15 s h o w n m i c r o t r i c h e s
(
a r r o w )
,
l a m i n a t e d l a y e r ( L L )
, x 2 0 0 00
U n t r e a t e d m i e 。 : T e g u 口 e o t a l e o l l s h a v o a l ig h t , e e n t r a l , h o m o g e n e o u s n u c l e u , , x 1 7 0 0 0
M o s t o f t h e m i c r o t u b u l e s f o e a l ly d i l a t e d a n d r u P t u r o d ( a r r o w )
.
x 8 0 0 0
S w e l l i n g a n d v a e u o la r d e g e n e r a t i o n o f m i t o e h o n d r i a i n t . g u m e n t a l e e l l s
, x 3 5 0 0 0
I n e r e a s e i n t h e a i z o a n d n u m b e r o f l y s o s o m e 宜n t e g u 口 e n t c e l l s ( a r r o w ) , x 8 0 0 0
.
T h e n u c l e a r e n v e lo P e i n t e g u m e n t a l e e l l s d i s r u P t e d ( a r r o w )
, x 2 0 0 0 0
30 3药 学 学 报 0 2卷
的生理活性 。 有关该药的单一有效成分有待进一步分离提取 , 其详细作用机理亦有待今后研
究 。
参 考 文 献
1
.
M a n s k e R H
.
T h o a l介a l o id a e h e饥 i s t r y a ” d 夕h夕 a i o l o g 夕 . Z r d e d . T h o A t h lo n e P r e s s o f t h o U n i v e r s i t y o f
L o n d o n
,
1 97牙: 32 9 ~ 3 3 0 .
2
. 方起程等 . 紫盆植物生物玻的化学 . 药学学报 1 9 8 h 1. : 7 98 .
3
. 黄燮南等 . 岩黄连总生物玻的安定作用 . 中国药理学推 1 9 8 b 2 : 1 56 .
4
. 叶于聪等 . 成药紫蓝治疗小鼠包虫病的实验研究 . 寄生虫学与寄生虫病杂志 . 待发表 .
5
. 陈钦铭等 . 甲苯咪哇对棘球蝴超微结构的影响 . 寄生虫学与寄生虫病杂志 19 8幻 2 : 78 .
6
.
L a s e a n o E F
, . t a l
.
F i n e s t r u c t u r e o f t h e g e r xn i o a l m e m b r a n o o f E g c y s t
.
J P a r a 月 i一0 1 19 7 5 , 6 1 : 8 5 3 .
E L E C T R O N M I C R O S C O P I C S T U D I E S O N T H E E F F E C T O F
C O R YD A L IS 5 2 ,R CI Z, A S T E P H O N EX P E R IM E N T A L
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Y E Y u
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A B S T R A C T T h e u l t r a s t r u e t u r a l e h a n g e s o f t h e g e r m i n a l m e m b r a n e o f cE h艺n o -
e o c c 材 5 9 了 a n 触 10 君“ 8 t r e a t e d w i t h t o t a l a l k a l o i d s i s o l a t e d f r o m OC r y d a l葱5 s t r 感e t a S t e P h
f o r 6 0 d a y s w e r e o b s e r v e d
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C y s t s f r o m t h e t o t a l a lk a l o i d
一 t r e a t e d m i e e w e r e s h o w n
b y t r a n s m i s s i o n e l e e t r o n m i e r o s e o P y t o h a v e d i s s o l u t i o n o f t h e m i e r o t r i e h e s
,
d i s t u r
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b a n e e o f o r g a n e l l e s i n t h e i r a r r a n g e m e n t
,
d i s r u P t e d a g g r e g a t e s o f m i e r o t u b u l e s
,
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,
d e e r e a s e i n n u m b e r o f n o r m a l a P P e a r i n g
G o l g i b o d i e s
,
d e e r e a s e d d e n s i t y a n d s w e l l i n g o f m i t o e h o n d r i a
.
M a n y P i t s w e r e
o b s e r v e d a r i s i n g f r o m t h e o u t e r a n d i n t e r i o r s u r f a e e o f t h e g e r m i n a l m e m b r a p e a s
t h e o u t e r s u r f a e e o f u l e e r u n d e r s e a n n i n g e l e e t r o n m i e r o s e o P y
.
I t s e e m s e l e a r t h a t
t h e t o t a l a l k a l o id h a s a P r o f o u n d i n t r a e e l l u l a r e f f e e t o n e x P e r im e n t a l cE h艺n o e o c e “ 吕
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t o t a l a l k a l o id s w e r e a l s o d i s e u s s e d
.
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r y d a l云5 s t r 玄c t a S t e P h ; cE h `. o e o c e “ 5 9 犷a n “ 10 5 材 5 e y s t s ; T r a n s m i s s i o n
七 l e e t r o n m i c r o s e o Py ; S c a n n i n g e l e e t r o n m i e r o s e o P y