全 文 ：收稿日期:2008-09-15;　修订日期:2008-12-24
基金项目:新疆建设兵团科技攻关计划医药卫生专项资金资助项目
(No.2006GG52)
作者简介:王鲁妹(1964-),女(汉族),陕西合阳人 ,现任石河子大学医学
院第一附属医院主管药师 ,主要从事药品检验工作.
＊通讯作者简介:唐　辉(1967-), 女(汉族),重庆人 ,现任石河子大学药
学院教授 , 硕士研究生导师 ,博士学位 , 主要从事天然药物分析及新药研
究工作.
天山花楸叶醇提液的絮凝工艺
王鲁妹 1 ,张　芹 2 ,唐　辉2＊ , 马伟伟 2
(1.石河子大学医学院第一附属医院 ,新疆 石河子　832008;
2.省部共建新疆特种植物药资源教育部重点实验室 ,新疆 石河子　832002)
摘要:目的 优选壳聚糖用于天山花楸醇提液的纯化工艺。方法 以总黄酮损失率 、溶液中透光率和固形物收率为指标考
察工艺 3个因素对絮凝的影响。结果 天山花楸醇提液絮凝工艺为:1%壳聚糖溶液加入量 8%(V/V), 温度 50℃, 药液
pH值为 5.0。结论 该工艺条件下醇提液澄清效果良好。
关键词:天山花楸;　壳聚糖;　絮凝
中图分类号:R284.2　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2009)06-1376-01
　　天山花楸为蔷薇科(Rosaceae)花楸属植物 Sorbustianshanica
Rupr,系新疆维吾尔族和哈萨克族民间用药 , 《新疆维吾尔自治
区药品标准》(第一册)记载:民间以嫩枝叶 、果实和茎皮入药。
嫩枝叶和茎皮:味苦 ,性寒 , 无毒;果实:味甘苦 ,性平。功能:清热
利肺 , 补脾生津 ,止咳;主治肺结核 、哮喘 、咳嗽 、胃炎 、胃痛 、维生
素 A和维生素 C缺乏症。
天山花楸叶的醇提液含有鞣质 、叶绿素 、蛋白质等大分子物
质 ,由于要对天山花楸叶醇提液的有效成分进行分离纯化 , 必须除
去鞣质 、叶绿素 、蛋白质等大分子物质, 因为鞣质 、叶绿素、蛋白质
等大分子物质能够污染树脂 , 影响树脂再生 , 因而需要进行絮凝 ,
以除去鞣质、叶绿素 、蛋白质等大分子物质 ,才能进行分离纯化。
絮凝澄清专用壳聚糖应用于水质净化 、果汁澄清 、酒类除浊 、
废水处理 、中药澄清 、大分子物质回收等领域 ,具有天然 、安全 、无
毒 、无害且价格合适 、实验操作方便等特点。本研究拟采用壳聚
糖对其醇提液进行絮凝工艺的研究;絮凝后醇提液采用以透光率
高 、总黄酮含量变化小并且固形物收率低为指标优选天山花楸叶
醇提液的絮凝工艺。
1 　仪器与试剂
1.1 　仪器 日本岛津 UV2401(PC)紫外光谱仪 , 德国 Sartorius
BP211D电子分析天平 , 上海雷磁 PHS-3C酸度计 , 北京长安
HH.S1-Ni电热恒温水浴锅。
1.2　试剂与配制 冰醋酸 、氢氧化钠 、硝酸铝 、亚硝酸钠 、盐酸等
均为分析纯 , 1%壳聚糖溶液(自制)。 1%壳聚糖溶液的配制:取
2 ml冰醋酸 ,用蒸馏水将其稀释到 50 ml, 精密称取 1 g壳聚糖放
入其中 , 使其完全溶解 ,最后用蒸馏水将其定容到 100 ml,配制成
1%的壳聚糖溶液 ,待用。
1.3 　供试品的制备 精密称取 10 g天山花楸叶倒入烧瓶中 ,每
瓶加入 60%的乙醇液 100 ml, 进行冷凝回流提取 30 min, 得醇提
液并定容到 100 ml,备用。
2 　方法
2.1 　絮凝 [ 1]方法 将天山花楸醇提液调至一定的 pH值 , 然后
精密移取 50.0 ml至比色管中 , 加入一定量的壳聚糖溶液 , 混合
均匀 , 静置过夜。然后移取上清液 , 进行澄清度的透光率的测定
和黄酮含量的测定。
2.2　 杂质透光率的测定 天山花楸叶的醇粗提液经全波扫描
可知 , 在 665 nm处有一吸收峰 ,而醇粗提液絮凝后此峰处的 [ 2]吸
光度明显降低 ,可知此峰即为杂质峰 , 且除杂效果明显 , 故选择
665 nm作为透光率的测定波长;因此 , 以 60%的乙醇为空白 , 在
紫外可见分光光度计上 665 nm处测定粗提液 、絮凝液均稀释 10
倍后的透光率。
2.3 　有效成分总黄酮含量的测定 [ 3] 用移液管精密移取 0.2 ml
上清液于 25ml的容量瓶中 , 加入 1ml5%的亚硝酸钠 , 6 min后 ,
加入 1 ml10%的硝酸铝 , 6 min后 , 加入 10ml4%的氢氧化钠 , 然
后用蒸馏水定容 , 15 min后 , 在 510 nm处测定总黄酮吸光度 。代
入已建立的标准曲线方程:A=0.125 1C+0.018, R2 =0.999 9, 并
计算总黄酮含量。
2.4 　固形物收率的测定 [ 4] 取各样品液 20 ml, 按固形物测定方
法测定固形物重 ,并计算其收率。
3　结果
3.1　壳聚糖加入量对絮凝效果的影响 [ 5] 在絮凝温度室温 、醇
提液 pH值为 5.5条件下 ,将 1%壳聚糖加入量设定为 5个水平 ,
即分别向醇提液中加入 1, 2, 3, 4, 5 ml壳聚糖溶液。按照以上的
实验方法进行实验。结果见表 1。
表 1　壳聚糖加入量对絮凝效果的影响
壳聚糖加入量 总黄酮损失率(%)透光率(%) 固形物收率(%)
0 0.0 12.23 48.32
2 8.5 68.13 33.44
4 13.5 72.66 33.10
6 19.8 72.42 32.82
8 21.1 78.47 31.52
10 20.1 76.84 32.10
　　n=3
综合总黄酮含量 、透光率和固形物收率这 3项指标 , 壳聚糖
用量为 4 ml, 即壳聚糖用量相当于粗提液 8%时 , 絮凝效果较好。
3.2　絮凝温度对絮凝效果的影响 设定实验条件如下:醇提液
pH值为 5.5, 壳聚糖加入量为 4ml,絮凝温度设定为 5个水平 , 即
20, 30, 40, 50, 60℃。按照以上的实验方法进行实验。结果见表 2。
表 2　絮凝温度对絮凝效果的影响
絮凝温度 T/℃ 总黄酮损失率(%)透光率(%) 固形物收率(%)
20 21.10 78.47 31.52
30 20.70 78.31 32.82
40 21.14 74.13 33.00
50 6.40 75.66 32.98
60 5.24 72.90 33.50
　　n=3
综合总黄酮含量 、透光率和固形物收率这 3项指标 , 絮凝温
度在 50℃时 ,絮凝效果较好。
3.3　醇提液的 pH对絮凝效果的影响 [ 6] 设定实验条件:絮凝温
度 50℃,壳聚糖加入量为 4ml,醇提液 pH设定为 5个水平即 3.5,
4.0, 4.5, 5.0, 5.5。按照以上实验方法进行实验。结果见表 3。
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时珍国医国药 2009年第 20卷第 6期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2009VOL.20NO.6
表 3　醇提液的 pH对絮凝效果的影响
絮凝 pH 总黄酮损失率(%) 透光率(%) 固形物收率(%)
3.5 14.4 68.13 34.55
4.0 10.8 72.66 32.93
4.5 10.7 72.42 32.20
5.0 3.84 78.47 32.06
5.5 6.40 76.84 32.82
　　n=3
综合总黄酮含量 、透光率和固形物收率这 3项指标 , 醇提液
pH在 5.0时 , 絮凝效果较好。
4　讨论 [ 7]
由于天山花楸叶的醇提液含有大量的叶绿素 、鞣质 、蛋白质
等大分子物质。在进行大孔树脂纯化前 , 为了避免污染树脂 ,影
响树脂再生 , 采用了壳聚糖絮凝法除去叶绿素 , 糅质等大分子物
质 , 并以絮凝后黄酮含量 ,透光率(澄清度)和固形物收率为考察
指标 , 对絮凝工艺进行了优化。
壳聚糖加入量对絮凝液澄清度的影响很大 ,分析其原因可能是
因为当壳聚糖加入量较少时, 不足以和叶绿素, 蛋白质 ,鞣酸等杂质
分子发生较强的吸附架桥和电中和作用, 因此形成的絮凝物体积较
小 ,不能沉淀到溶液底部 ,而是悬浮于溶液中 ,故溶液较混浊,透光率
低。随着壳聚糖加入量的增加,吸附架桥和电中和作用得到加强 ,絮
凝效果逐渐达到最佳,但是 ,由于壳聚糖是长链高分子化合物 [ 8] ,当
加入量过高时,提取液中的微粒反而会被壳聚糖包围,以致失去其在
微粒间发挥的架桥作用 ,胶体表面发生二次吸附 ,微粒处于再稳定状
态 ,不易沉降 ,因此壳聚糖加入量不是越多越好。
絮凝时 ,絮凝温度对絮凝效果有一定的影响。随着温度的升高,
沉淀的体积有变小的趋势[ 9] ,絮凝液的澄清度下降。分析其原因可
能是温度升高 ,沉淀不易聚集而悬浮于溶液中 ,使透光率降低。
醇提液的 pH值 [ 10]对透光率影响较大 , 但表现出先升高后
降低的趋势。可能是因为壳聚糖是一种阳离子型絮凝剂 ,在酸性
条件下 ,壳聚糖分子中的氨基与氢离子结合成阳离子 , 与溶液中
的微粒发生架桥与电中和作用 , 从而使杂质聚集而沉淀下来 , 故
醇提液的 pH值要调到酸性条件下。但是 ,当溶液 pH值过低时 ,
壳聚糖会发生水解 ,导致絮凝效果下降 , 而且酸度过高会导致醇
提液自身的稳定性下降 ,包括黄酮在内的许多组分就不能稳定的
存在于溶液中 ,导致黄酮含量下降。
用壳聚糖作为絮凝剂 ,不仅实验操作方便 , 而且价格便宜 , 澄
清效果好 ,无毒 , 无害 ,具有广阔的应用前景。
参考文献:
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收稿日期:2008-06-11;　修订日期:2008-10-12
基金项目:广东省科技计划项目(No.2007B031405005)
作者简介:李晓燕(1983-),女(汉族),河南原阳人 ,现为广东药学院在读
硕士研究生 ,学士学位 ,主要从事中药新剂型新技术工作.
＊通讯作者简介:霍务贞(1976-), 女(汉族),广东江门人 , 现任广东药学
院中药开发研究所助理研究员 ,硕士学位 ,主要从事新药开发与质量标准
研究工作.
高效液相色谱法测定喘平滴丸中东莨菪碱的含量
李晓燕 ,冯　中 ,吴燕红 ,朱盛山 ,霍务贞＊
(广东药学院中药开发研究所 ,广东 广州　510006)
摘要:目的 建立测定喘平滴丸中东莨菪碱含量的高效液相色谱法。方法 采用 ZORBAXSB-C18(4.6 mm×250 mm, 5
μm)为色谱柱 ,以甲醇 -0.001mol· L-1磷酸(70∶30)(流动相含 0.02 mol· L-1十二烷基硫酸钠)为流动相 , 检测波长:
216nm, 流速:1.0ml· min-1 , 外标法定量。结果 东莨菪碱在 0.028 5 ～ 0.285 μg范围内呈线性关系 , 方法回收率为
98.86%(n=6), RSD为 2.54%。结论 此法简便 、准确 , 重复性好 ,可用于喘平滴丸中东莨菪碱含量测定。
关键词:高效液相色谱法;　喘平滴丸;　东莨菪碱
中图分类号:R284.1　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2009)06-1377-02
　　喘平滴丸由麻黄 、洋金花等中药组成的中药复方制剂。其中
洋金花的主要化学成分东莨菪碱 ,有显著的中枢抑制 、麻醉作用 ,
一般剂量就能消除情绪激动 , 使人产生倦意 , 进入无梦的睡眠状
态 , 产生 “健忘”等症 ,严重者嗜睡 、昏迷 , 最后死于呼吸中枢抑制
或麻痹 ,呼吸和循环衰竭。方中洋金花处方量虽然比例小 , 为了
该复方制剂的用药安全 ,本课题组对该复方制剂中微量的东莨菪
碱进行含量监控 , 为该药的安全使用提供数据参考。
1　仪器与试药
1.1　仪器 Agilent1100高效液相色谱仪系列(G1311A四元泵 、
G1313A自动进样器 、G1314A-VWD检测器);色谱柱:ZORBAX
SB-C18(4.6mm×250 mm, 5μm), SN:USCL017850, BP211D电
子分析天平(Sartorius)。
1.2　试药 甲醇为色谱纯试剂 ,水为三蒸水 , 其它试剂均为分析
纯。氢溴酸东莨菪碱对照品由中国药品生物制品检定所提供
(批号:100049 -200308), 喘平滴丸 3批 (本所研制 , 批号:
20070516, 20070518, 20070520)。
2　方法与结果
2.1　溶液的制备
2.1.1　对照品溶液的制备 取氢溴酸东莨菪碱对照品约 10 mg,
精密称定 , 置 50 ml容量瓶 , 加甲醇使溶解并稀释至刻度 , 摇匀 ,
得对照品贮备液。精密量取对照品贮备液 1.0 ml,置 10.0ml量
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2009VOL.20NO.6 时珍国医国药 2009年第 20卷第 6期