全 文 ：秃疮花中异紫堇碱的提取分离纯化工艺研究
冯 艳1，2，杨爱梅1* ，柳军玺2* ，邸多隆2，刘言娟2，李 敏1，2
(1．兰州理工大学生命科学与工程学院，甘肃 兰州 730050;2．中国科学院兰州化学物理研究所 / 中国科学
院西北特色植物资源化学重点实验室 /甘肃省天然药物研究重点实验室，甘肃 兰州 730000)
收稿日期:2012-12-11
基金项目:甘肃省科技支撑计划(090NKCA127) ;中科院“西部之光联合学者”项目资助
作者简介:冯艳(1988-) ，女，硕士研究生，专业方向:天然药物化学。
* 通讯作者:杨爱梅，Tel:0931-2976703，E-mail:aimeiyang@ 163． com;柳军玺，Tel:0931-4968249，E-mail:liujx@ licp． cas． cn。
摘要 目的:研究秃疮花中提取异紫堇碱的最佳工艺条件及采用大孔吸附树脂分离纯化异紫堇碱的方法。方
法:采用正交试验设计，优化异紫堇碱的提取工艺; 通过静态吸附/解吸附试验筛选最佳吸附异紫堇碱的大孔树脂。
结果:最佳提取条件为:料液比1∶ 15(g /mL)、1%的酸水溶液为溶剂，提取时间 1h × 3 次;LX28 树脂为最佳吸附树脂。
结论:采用最佳试验条件提取秃疮花，异紫堇碱得率可达0． 88%; 提取液经LX28 树脂分离纯化，得到质量分数为
85． 34%的异紫堇碱，产率达 68． 64%。
关键词 异紫堇碱;提取工艺;正交试验;大孔树脂;分离纯化
中图分类号:Ｒ284． 2 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2013)05-0807-03
Extraction and Purification of Isocorydine from Dicranostigma leptopodum
FENG Yan1，2，YANG Ai-mei1，LIU Jun-xi2，DI Duo-long2，LIU Yan-juan2，LI Min1，2
(1． College of Life Science ＆ Engineering，Lanzhou University of Technology，Lanzhou 730050，China;2． Lanzhou Institute of
Chemical Physics，Chinese Academy of Sciences /Key Laboratory of Chemistry of Northwestern Plant Ｒesources / Key Laboratory for
Natural Medicine of Gansu Province，Lanzhou 73000，China)
Abstract Objective:To optimize the conditions of extraction and purification of isocorydine from Dicranostigma leptopodum．
Methods:Extraction conditions of isocorydine were selected on the basis of orthogonal experimental design，the static adsorption /desorp-
tion experiments were used to evaluate the optimum resin． Ｒesults :The optimum extraction parameters were as follows:the ratio of raw
materials to solvent 1∶ 15 (g /mL) ，extraction solvent 1% vitriol，the extraction three times and 1 h each time． LX28 resin exhibited
higher adsorption efficiency． Conclusion:Under the above optimum conditions，the extraction yield of isocorydine is 0． 88% ． The purity
of isocorydine can reach 85． 34% with a yield rate of 68． 64% ．
Key words Isocorydine;Extraction technology;Orthogonal experimental design;Macroporous resin;Separation and purification
秃疮花 Dicranostigma leptopodum (Maxim．)
Fedde为罂粟科秃疮花属二年或多年生草本植物，
可全草入药，有抗炎、抑菌、消肿止痛、清热解毒等功
效〔1〕。异紫堇碱(Isocorydine) 为阿朴啡类生物碱，
具有较好的药理学活性，如抗心律失常、舒张血管、
抗缺氧作用等〔2〕。
本研究组在对西北特色植物秃疮花的化学成分
研究中发现，异紫堇碱在该植物中的含量较高〔3〕。
基于此本研究着眼于秃疮花中异紫堇碱的提取分离
纯化工艺，采用正交试验设计对提取工艺进行优选，
采用大孔吸附树脂分离纯化异紫堇碱，以期为异紫
堇碱及秃疮花的有效利用提供科学依据。
1 仪器与材料
1． 1 仪器 ZFD-5090 电热恒温干燥箱( 上海至诚
分析仪器制造厂) ;ＲE-52C 旋转蒸发仪( 巩义市予
华仪器公司) ;Agilent 1200 Series HPLC 色谱仪( 美
国安捷伦科技公司) ;Sartorius BT224S电子天平。
1． 2 材料 秃疮花采集于甘肃省平凉市，由兰州
大学马志刚教授鉴定为罂粟科秃疮花属植物秃疮花
Dicranostigma leptopodum(Maxim．)Fedde 的全草。
全草阴干，粉碎备用。异紫堇碱对照品由本实验室
从秃疮花中分离纯化得到〔3〕，质量分数≥99． 5%。
分析纯乙腈、磷酸和三乙胺购于天津化学试剂公司。
大孔树脂购于西安蓝晓科技有限公司。
2 方法
2． 1 异紫堇碱的含量测定
2． 1． 1 色谱条件: 流动相为乙腈-水(0． 2%磷酸和
0． 5%三乙胺按 17∶ 83 配制，V /V) ;色谱柱为Hyper-
sil BDS C18柱(250 mm ×4． 6 mm，5 μm) ;柱温为30
℃;流速、进样量和检测波长分别设为 1． 0 mL /min、
20． 0 μL 和 280 nm。
2． 1． 2 线性关系考察: 精密称取异紫堇碱对照品
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DOI:10.13863/j.issn1001-4454.2013.05.035
5． 0 mg，置 25 mL容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至
刻度，摇匀，作为对照品母液。精密吸取一定量对照
品母液置于 10 mL容量瓶中，加入蒸馏水稀释至刻
度摇匀，分别配成 0． 01、0． 02、0． 05、0． 1、0． 15 和 0． 2
mg /mL的异紫堇碱对照品溶液，按上述色谱条件进
样测定峰面积。以异紫堇碱峰面积 y 为纵坐标，浓
度 x为横坐标，进行线性回归。得回归方程 y = 18
267x － 56． 501(r = 0． 9999，n = 6)。异紫堇碱浓度在
0． 01 ～0． 2 mg /mL范围内与峰面积呈良好线性关系。
2． 1． 3 样品溶液制备及测定: 秃疮花提取液0． 45
μm滤膜过滤，分别吸取 50 μL，稀释 100 倍，HPLC
测定峰面积，按外标法定量，计算异紫堇碱浓度。
2． 2 秃疮花不同提取方法比较
2． 2． 1 甲醇超声提取:称取秃疮花粗粉4 g 置圆底
烧瓶中，加甲醇 20 倍量超声提取 3 次，每次 1 h，滤
过合并滤液，浓缩。
2． 2． 2 甲醇回流提取:称取秃疮花粗粉4 g 置圆底
烧瓶中，加甲醇 20 倍量回流提取 3 次，每次 1 h，滤
过合并滤液，浓缩。
2． 2． 3 酸水煎煮提取:称取秃疮花粗粉4 g 置圆底
烧瓶中，加 20 倍量的 1%硫酸水溶液加热煎煮提取
3 次，每次 1 h，滤过合并滤液，1 mol /L 氢氧化钠调
pH中性，浓缩。
2． 3 正交试验法优化提取最佳工艺 根据影响酸
水提取的主要因素，制定因素水平表，以料液比
(A)、酸浓度(B)、提取时间(C) 和提取次数(D) 为
考察因素，每因素选取 3 个水平，进行 L9(3
4) 正交
表进行试验。以异紫堇碱得率作为衡量提取效率的
客观指标，优选最佳工艺。因素水平见表 1。
表 1 因素水平表
水平
A料液比
/(W/V)
B酸浓度
/%
C提取时间
/h
D提取次数
/n
1 1∶ 15 1 1 1
2 1∶ 20 1． 5 1． 5 2
3 1∶ 25 2 2 3
2． 4 静态吸附 /解吸附试验 称取一定量预处理
后树脂( 相当于约1． 0 g干树脂) 和30 mL已知浓度
的异紫堇碱提取溶液加入 100 mL锥形瓶中，将锥形
瓶置电动振荡机上在 100 r /min温度 25 ℃条件下振
荡 5 h，充分吸附。通过 HPLC测定吸附后溶液中异
紫堇碱浓度。吸附平衡后，将上述已吸附饱和的树
脂加入 30 mL 70%乙醇，于电动振荡机上 25 ℃、100
r /min振荡 2 h，定时取样，计算异紫堇碱吸附及解
吸浓度。通过吸附率 /解吸率评价最优吸附树脂。
2． 5 异紫堇碱分离纯化 将异紫堇碱提取液以
1．0 mL/min流速通过大孔树脂吸附柱，吸附饱和后
用蒸馏水洗柱去除杂质; 用70%乙醇进行洗脱，减
压回收溶剂，真空干燥，得到高质量分数的异紫堇碱
产品。
3 结果与讨论
3． 1 秃疮花不同提取方法比较 从不同提取方法
的实验结果( 表2) 发现，酸水煎煮提法所得的异紫
堇碱的含量和得率都高于其他提取方法，因此从工
业化、生产成本和工艺方面考虑，确定酸水煎煮提法
为最佳提取方法。
表 2 不同提取方法比较
提取方法 异紫堇碱含量 /mg 异紫堇碱得率 /%
甲醇超声提法 24． 88 0． 62
甲醇回流提法 32． 21 0． 80
酸水煎煮提法 36． 13 0． 89
表 3 正交试验结果
实验号 A B C D 异紫堇碱
得率 /%
1 1 1 1 1 0． 64
2 1 2 2 2 0． 76
3 1 3 3 3 0． 67
4 2 1 2 3 0． 75
5 2 2 3 1 0． 49
6 2 3 1 2 0． 70
7 3 1 3 2 0． 62
8 3 2 1 3 0． 75
9 3 3 2 1 0． 49
K1 0． 69 0． 67 0． 70 0． 54
K2 0． 65 0． 67 0． 67 0． 69
K3 0． 62 0． 62 0． 59 0． 72
Ｒ 0． 07 0． 05 0． 11 0． 18
3． 2 正交试验法结果分析 从正交试验结果表 3
中极差分析 Ｒ 得出影响因素大小顺序为 D ＞ C ＞ A
＞ B，即提取次数 ＞提取时间 ＞料液比 ＞酸浓度; 经
方差分析表 4 可知，因素 D( 提取次数) 对秃疮花中
异紫堇碱提取有显著性影响，而因素 A( 料液比)、B
( 酸浓度) 及C( 提取时间) 对秃疮花中异紫堇碱提
取无显著性影响。根据实际情况结合经济效益，最
终确定提取工艺为 A1B1C1D3，即药材粉碎成粗粉，
分别加 15 倍量 1%硫酸水溶液煎煮提取 3 次，每次
1 h，过滤，合并滤液。
表 4 正交试验方差分析
方差来源 偏差平方和 自由度 F值 P值
A 0． 007 2 0． 442
B 0． 005 2 0． 277
C 0． 017 2 2． 785
D 0． 058 2 9． 529 *
注:F0． 10(2，2)= 9． 00
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3． 3 验证试验 按照 A1B1C1D3 的条件进行提取，
秃疮花中异紫堇碱的平均得率为 0． 88%(n = 3) ，表
明方案可行。
3． 4 大孔吸附树脂的选择 选取 8 种预处理后树
脂，通过静态吸附 /解吸附试验方法分别计算出静态
吸附率和解吸率，筛选最佳吸附行为树脂，结果见表
5。由表 5 可知，XDA6 树脂吸附率最大，而解吸率
LX28 最大。从吸附率和解吸率两方面综合考虑，
LX28 是较合适的树脂，因此选择 LX28 树脂进行分
离纯化异紫堇碱。
表 5 大孔树脂对异紫堇碱的静态吸附率及解析率
项目
树脂型号
YWD12G DM130 07C LX28 HPD450 LSA40 XDA6 YWD01F
极性 强 弱 中 中 弱 中 中 非
吸附率 /% 79． 90 95． 17 57． 40 97． 33 95． 70 89． 16 97． 79 95． 33
解吸率 /% 58． 45 99． 12 89． 76 99． 66 50． 24 42． 62 79． 92 97． 54
3． 5 异紫堇碱分离纯化 通过静态吸附 /解吸附
试验筛选出 LX28 树脂作为吸附树脂，经过树脂分
离纯化，得到质量分数为 85． 34%，产率达 68． 64%
的异紫堇碱粗品，该粗品通过活性炭脱色，乙醇重结
晶，异紫堇碱的质量分数可以达到 90%，能够达到
药品标准中异紫堇碱含量要求。
4 结论
本研究建立了秃疮花中异紫堇碱的提取分离制
备方法，以高效液相色谱分析方法为检测手段，通过
正交试验设计优选 1%的酸水回流提取异紫堇碱的
最佳方法，通过大孔吸附树脂建立了秃疮花提取液
中异紫堇碱的分离方法，经过重结晶等后处理方法
使异紫堇碱的质量分数可以达到药品标准的要求，
为西北特色植物秃疮花的开发利用提供一定的科学
依据，为异紫堇碱及其衍生物的进一步药理作用研
究提供技术支撑。
参 考 文 献
［1］江苏省植物研究所． 新华本草纲要［M］． 上海: 上海科
学技术出版社，1988:238．
［2］赵强，杨明，李一鸥，等．红茂草化学成分及药理作用的
研究进展［J］．农业科技与信息，2008，16:29-30．
［3］刘大护，张天才，柳军玺，等．秃疮花生物碱类化学成分
研究［J］．中草药，2011，42(8) :1505-1508．
正交试验法优选伤科洁肤液的制备工艺
刘效栓，陈二林，张小华，李季文，李燕魁，李喜香
(甘肃省中医院，甘肃 兰州730050)
摘要 目的:优选伤科洁肤液的制备工艺。方法:利用正交试验法，考察加水量、提取次数、提取时间对提取工
艺的影响;考察醇沉浓度、时间及浓缩液比重对醇沉工艺的影响。每个因素设计 3 个水平，以苦参碱含量和干浸膏
得率为考察指标。用高效液相色谱法测定苦参碱含量，烘干法测定干浸膏得率。结果: 最佳提取工艺为:10 倍量
水，煎煮 3 次，每次 2 h;最佳醇沉工艺为:醇沉浓度为50%，时间为 15 h，浓缩液比重为 1． 05 g /mL。结论:该制备工
艺稳定、可行，操作简便，为伤科洁肤液规范化生产提供了理论依据。
关键词 正交试验法;伤科洁肤液;制备工艺
中图分类号:Ｒ286． 1 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2013)05-0809-04
收稿日期:2012-12-03
基金项目:甘肃省中医药管理局中医药项目(GZK-2011-65)
作者简介:刘效栓(1964-) ，男，主任药师，研究方向:中药制剂质量控制;Tel:0931-2687057，E-mail:liuxiaoshuan1964@ 163． com。
Optimization for Preparation Technology of Shangke Jiefu Lotion by Orthogonal Test
LIU Xiao-shuan，CHEN Er-lin，ZHANG Xiao-hua，LI Ji-wen，LI Yan-kui，LI Xi-xiang
(Gansu Hospital of TCM，Lanzhou 730050，China)
Abstract Objective:To optimize the preparation technology of Shangke Jiefu lotion． Methods:The extraction process was opti-
mized by orthogonal test，with water addition，extraction times and time used for extraction as factors of investigation． In refined
·908·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 5 期 2013 年 5 月