全 文 ：Feb. 2016 Vol.28 No.2
2016 年 2 月第 28 卷第 2 期
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Clinical journal of traditional chinese medicine
杂志
文章编号：1672-7134（2016）02-0093
中图分类号：R965　　文献标志码：B　　DOI：10.16448/j.cjtcm.2016.0093
百华花楸果实乙醇提取物的急性毒性实验研究
孟令锴 1，侯甲福 1，李洁 2
1　牡丹江医学院天然药物化学与生药学教研室　黑龙江牡丹江　157011
2　牡丹江医学院附属红旗医院血液科　黑龙江牡丹江　157011　　　　
摘要　目的：探讨百华花楸果实乙醇提取物的急性毒性反应。方法：采用经典的急性毒性试验方法，对百华花楸果实
乙醇提取物不同溶剂（石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水）分离组分进行系统的急性毒性研究。结果：乙酸乙酯组分与正
丁醇组分的半数致死量（LD50）及95%可信范围分别为41.23g·kg-1（36.83～46.15g·kg-1）、52.07g·kg-1（42.94～63.14g·kg-1）；
水组分与石油醚组分最大给药量（MLD）分别为 88.77g·kg-1、93.42g·kg-1。结论：百华花楸果实乙醇提取物各分离组
分毒性较低，用药较为安全。
关键词　百华花楸果实；乙醇提取物；半数致死量；最大给药量；急性毒性
The acute toxicological study on alcohol extracts of Srobus pohuashanensis fruit
MENG Lingkai1, HOU Jiafu 1, LI Jie2
1. Mudanjiang Medical College, Heilongjiang Mudanjiang 157011,China
2. Hongqing Hospital Affiliated of Mudanjiang Medical College, Heilongjiang Mudanjiang 157011,China
ABSTRACT Objective: To observe the acute toxicity of alcohol extracts of Srobus pohuashanensis fruit. Methods: To
use classical method of the acute toxicity, research the Srobus pohuashanensis fruit of ethanol extracts with differ-
ent Solvents (petroleum ether, ethyl acetate, butanol, water) separated components acute toxicity. Results: The LD50
and 95% confidence limit of ethyl acetate and butanol component was 41.23 g·kg-1 (36.83~46.15 g·kg-1), 52.07 g·kg-1
(42.94~63.14 g·kg-1). The MLD of petroleum ether component and the water component was 88.77 g·kg-1、93.42 g·kg-1.
Conclusion: There is lower toxicity of alcohol extracts of each separate component of Srobus pohuashanensis fruit medi-
cine is relatively safe.
KEYWORDS Srobus pohuashanensis fruit, alcohol extracts, minimum lethal dose, maximum tolerance dose, acute
toxicity trial
基金项目：黑龙江省卫生计生委科研项目（编号：2014-214）；黑龙江省中医药科研项目（编号：ZHY12-W049）；牡丹江医学院科学技术研究项目（编
号：ZS201326）
作者简介：孟令锴，男，硕士研究生，讲师，研究方向：生药鉴定及品质评价
通讯作者：李洁，女，硕士研究生，主治医师，研究方向：年轻急性淋巴细胞白血病治疗临床研究。E-mail：mdlbaby@163.com
百 华 花 楸（Srobus pohuashanensis）为 蔷 薇 科
（Rosaceae）花楸属（Sorbus）植物，又名花楸树，其果
实称“花楸果”。早在《中华本草》就有记载：花楸果
具有止咳化痰，健脾利水的功效 [1]。现代研究表明，花
楸属植物中含有较丰富的黄酮、花青素、生氰苷、醌等
成分，具有强抗氧化、抗癌、抗辐射和止咳平喘等药理
作用，因而该属植物引起国内外的关注 [2-3]。黑龙江
省分布的百华花楸相关研究较少，本课题组成员前期
工作证实具有很强的抗炎、镇咳平喘的作用 [4-5]，因此
其具有很好的开发前景。本课题旨在对百华花楸果
实乙醇提取物的不同溶剂分离组分进行系统的急性
毒性考察，评价安全性，为今后进一步开发利用该药
用资源奠定基础。
材料与方法
1　仪器与材料
1.1　实验材料　试验用药材采自牡丹江市北山风景
区，经牡丹江医学院药学院吴兆华教授鉴定为蔷薇
科（Rosaceae）花楸属（Sorbus）百华花楸（Srobus po-
huashanensis）干燥成熟的果实。
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1.2　实验动物　SPF 级昆明小鼠 220 只，雌雄各半，
体重 18 ～ 22g（由佳木斯大学实验动物中心提供，许
可证号：SYXK（黑）2011-021）。
1.3　实验仪器　灌胃器、动物天平（上海海康电子仪
器厂）、RE-52CS 旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）。
2　方法
2.1　供试样品制备　取花楸果干品 2kg 粉碎，用 80%
乙醇回流提取 2 次，减压浓缩，得乙醇浸膏，依次用石
油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，剩余部分用水溶解得水
组分，将萃取液蒸干备用，残渣溶解，过滤浓缩，蒸干。
所得产品 4℃冰箱保存备用。
2.2　预实验　参照经典的急性毒性实验方法 [6-8] 进
行预实验，选用 SPF 级健康小鼠 10 只，雌雄各半，体
重 18 ～ 22g，分笼饲养。实验前，小鼠不禁水、禁食
24h 后，灌胃给药 1 次。观察 24h，记录小鼠死亡情况，
找出 0% 与 100% 的估计致死量（Dn，Dm）。
2.3　正式实验
2.3.1　乙酸乙酯组分 LD50 测定　根据预实验结果，正式
实验设置 7 个剂量组，分别为 50.50g·kg-1、45.45g·kg-1、
40.91g·kg-1、36.81g·kg-1、33.13g·kg-1、29.82g·kg-1
（r=0.9）及空白对照组，70 只小鼠，雌雄各半，分为 7
组，24h 禁食，自由饮水后，一次性灌胃给药，记录给
药后 1h，2h，4h，6h，8h，12h 内小鼠毒性症状及死亡情
况，连续观察 1 周，按动物急性毒性观察，记录小鼠中
毒表现及死亡情况，最后处死存活小鼠，进行大体解
剖，肉眼观察脏器病理变化。
2.3.2　正丁醇组分 LD50 测定　采用与乙酸乙酯组
分 LD50 测定方法相同方法进行实验。根据预实验结
果，正式实验设置 7 个剂量组，分别为 60.48g·kg-1、
54.43g·kg-1、48.98g·kg-1、44.09g·kg-1、39.68g·kg-1、
35.71g·kg-1（r=0.9）及空白对照组进行试验。
2.3.3　水组分 MLD 测定　根据预实验，用最大给药
量法进行急性毒性试验，取小鼠 20 只，雌雄各半，实
验前 24h 禁食、不禁水，以浓度 88.77g·kg-1（最大浓
度），按 0.4mL/10g（最大体积）一次性灌胃，连续观察
1 周，记录小鼠体重变化情况、中毒表现及死亡情况，
最后处死存活小鼠，进行大体解剖，肉眼观察脏器病
理变化。
2.3.4　石油醚组分 MLD 测定　采用与水组分 MLD
测定方法相同方法进行实验。根据预实验，以浓度
93.42g·kg-1，按 0.4mL/10g（最大体积）进行实验。
3　统计学方法
应用 SPSS17.0 软件进行分析，采用 LSD-t 方差分
析，数据以（x
_
±s）表示，P<0.05 为差异有统计学意义。
实验结果
1　乙酸乙酯组分急性毒性实验结果
乙酸乙酯组分小鼠于给药后 12h 内未见死亡，各
组死亡小鼠数量分别为 9 只、7 只、4 只、2 只、1 只、
1 只。LD50 计算结果为 41.23g·kg-1，其 95% 可信范围为
36.83g·kg-1 ～ 46.15g·kg-1。观察小鼠中毒表现及死亡
情况显示，实验动物急性毒性症状发生率与给药剂量
存在相关性。卷缩不动症状开始时间较早，各剂量组
均在 2h 左右；闭目症状只在组分 1、2、3 中发生，开始
时间在 8h、12h 左右；其余各组未见症状；反应迟钝症
状只在乙酸乙酯组分 1、2 组中发生，开始时间在 2h；
其余各组未见症状。1 周后，颈椎脱臼处死存活小鼠
并解剖，经过观察，处死小鼠心、肝、脾、胃、肺及肾均
正常。见表 1。
2　正丁醇组分急性毒性实验结果
正丁醇组分小鼠于给药后 12h 内未见死亡，各
组死亡小鼠数量分别为 8 只、6 只、4 只、1 只、1 只、
1 只。LD50 计算结果为 52.07g·kg-1，其 95% 可信范围为
42.94g·kg-1 ～ 63.14g·kg-1。观察小鼠中毒表现及死亡
情况显示，实验动物急性毒性症状发生率与给药剂量
存在相关性。自发活动减少症状开始时间各剂量组
均在 4h 左右；反应迟钝症状在组分 1、2 剂量组发生，
发生时间于 4h、6h 左右。1 周后，颈椎脱臼处死存活
小鼠并解剖，经过观察，处死小鼠心、肝、脾、胃、肺及
肾均正常。见表 2。
表 1　乙酸乙酯组分动物急性毒性症状情况
组别 例数 卷缩不动 闭目 反应迟钝发生率 /% 发生时间 / h 发生率 /% 发生时间 / h 发生率 /% 发生时间 / h
乙酸乙酯组分 1 10 100 2 80 8 100 2
乙酸乙酯组分 2 10 100 2 50 8 40 2
乙酸乙酯组分 3 10 50 2 50 12 0 -
乙酸乙酯组分 4 10 10 2 0 - 0 -
乙酸乙酯组分 5 10 10 2 0 - 0 -
乙酸乙酯组分 6 10 10 2 0 - 0 -
空白对照组 10 - - - - - -
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3　水组分急性毒性实验结果
通过实验观察，给药后小鼠生长良好、体重增加，
活动正常，无任何中毒症状，无死亡现象。1 周后，颈
椎脱臼处死存活小鼠并解剖，经过观察，处死小鼠心、
肝、脾、胃、肺及肾均正常。因此，经计算，水组分 MLD
为88.77g·kg-1。各组间P>0.05，无统计学意义。见表3。
4　石油醚组分急性毒性实验结果
给药后小鼠生长良好、体重增加，活动正常，无
任何中毒症状，无死亡现象。1 周后，颈椎脱臼处死
存活小鼠并解剖，经过观察，处死小鼠心、肝、脾、胃、
肺及肾均正常。因此，经计算，石油醚组分 MLD 为
93.42g·kg-1。各组间 P>0.05，无统计学意义。见表 4。
表 2　正丁醇组分动物急性毒性症状情况
组别 例数 自发活动减少 反应迟钝发生率 /% 发生时间 / h 发生率 /% 发生时间 / h
乙酸乙酯组分 1 10 100 4 100 4
乙酸乙酯组分 2 10 100 4 40 6
乙酸乙酯组分 3 10 80 4 0 -
乙酸乙酯组分 4 10 40 4 0 -
乙酸乙酯组分 5 10 20 4 0 -
乙酸乙酯组分 6 10 20 4 0 -
空白对照组 10 - - - -
表 3　水组分急性毒性实验小鼠体重变化情况（x
_
±s）
时间 /d 1 2 3 4 5 6 7
体重变化 /g 18.32±0.14 18.50±0.37 18.92±0.22 19.00±0.33 19.01±0.40 19.42±0.47 19.50±0.38
表 4　石油醚组分急性毒性实验小鼠体重变化情况（x
_
±s）
时间 /d 1 2 3 4 5 6 7
体重变化 /g 18.47±0.82 18.77±0.76 19.02±0.33 19.32±0.77 19.87±0.79 19.97±0.67 20.55±0.32
讨　　论
本实验对百华花楸果实乙醇提取物进行急性毒
性实验研究，旨在对其不同溶剂（石油醚、乙酸乙酯、
正丁醇、水）分离组分进行系统的毒性认知，进而为今
后下一步药效学研究奠定基础。实验结果显示：①以
成人（60kg 体重为准）日用生药量 1.67g·kg-1 计，乙酸
乙酯组分 LD50 为 41.23g·kg-1，折合生药量为1178g·kg-1，
相当于成人日用量的 707 倍；正丁醇组分 LD50 为
52.07g·kg-1，折合生药量为1302g·kg-1，相当于成人日用
量的 787 倍；水组分 MLD 为 88.77g·kg-1，折合生药量
为 1973g·kg-1，相当于成人日用量的 1184 倍；石油醚
组分 MLD 为 93.42g·kg-1，折合生药量为2525g·kg-1，相
当于成人日用量的 1515 倍；②通过对不同组分小鼠
毒性数据比较发现，乙酸乙酯组分毒性最大，其次为
正丁醇组分，而水组分、石油醚组分无急性毒性，试验
中未见死亡或中毒症状；③对各组分急性毒性实验存
活小鼠检查发现，其主要脏器无明显异常；④对乙酸
乙酯组分、正丁醇组分急性毒性症状观察发现，乙酸
乙酯组分小鼠急性毒性症状多呈现为卷缩不动、反应
迟钝、闭目；正丁醇组分小鼠急性毒性症状多呈现为
自发活动减少、反应迟钝；⑤课题组成员前期对百华
花楸果实水提物进行了急性毒性实验研究 [9]，发现其
水提物的 LD50 为 0.283mL/（10g·d），折合日用生药量为
28.3g·kg-1，其急性毒性远高于乙醇提物分离各组分；
通过以上结果表明百华花楸果实乙醇提取物各分离
组分毒性较低，用药较为安全。
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收稿日期：2015-11-27　审稿：史天陆　责任编校：鲍洁