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桂产藿香蓟乙醇提取物镇痛作用研究



全 文 :·论 著· 中国医药导报 2014 年 1 月第 11 卷第 2 期
CHINA MEDICAL HERALD Vol. 11 No. 2 January 2014
桂产藿香蓟乙醇提取物镇痛作用研究
唐秀能 韦红棉▲ 陆翠林 周至品 李建哲 刘冠达
广西中医药大学附属瑞康医院,广西南宁 530011
[摘要] 目的 观察桂产藿香蓟乙醇提取物的镇痛作用,探讨其作用机制。 方法 各自分别取 60 只合格昆明小鼠,
随机分为空白对照组、阿司匹林组(0.4 g/kg)、桂产藿香蓟乙醇提取物高、中、低剂量组,每组各 12 只。 采用热板
法、扭体法和甩尾法来观察桂产藿香蓟乙醇提取物的镇痛作用,并测定热板法小鼠血清丙二醛(MDA)、前列腺素
E2(PGE2)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性。 结果 ①与空白对照组比较,桂产藿香蓟乙醇提取物能显著提高热
板法小鼠热刺激痛阈,在给药后 30、60、90、120 min 均能显著延长小鼠舔足反应的潜伏期,差异均有统计学意义
(P < 0.05 或 P < 0.01),显著降低小鼠血清 MDA 和 PGE2含量,提高 SOD 活性,差异有统计学意义(P < 0.05 或 P
< 0.01)。②与空白对照组比较,桂产藿香蓟乙醇提取物均可显著减少醋酸致痛时小鼠扭体反应的次数,差异有统
计学意义(P < 0.05 或 P < 0.01),其中桂产藿香蓟乙醇提取物高、中和低剂量组(6.0、3.0、1.5 g/kg)扭体抑制率分
别为 45.45%、35.65%和 15.66%。 ③无论是与空白对照组比较还是与本组给药前比较,桂产藿香蓟乙醇提取物在
给药后 30、60、90、120 min 能显著延长小鼠甩尾反应潜伏期, 差异有统计学意义 (P < 0.05 或 P < 0.01)。 结论
桂产藿香蓟乙醇提取物具有显著的镇痛作用,其机制之一可能与减少炎症介质释放、清除氧自由基有关。
[关键词] 桂产藿香蓟乙醇提取物;镇痛;机制
[中图分类号] R285 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2014)01(b)-0020-04
Study on analgesic effects of ethanol extract of Ageratum conyzoides.L.
from Guangxi
TANG Xiuneng WEI Hongmian▲ LU Cuilin ZHOU Zhipin LI Jianzhe LIU Guanda
Ruikang Hospital Affiliated to Guangxi University of Chinese Medicine, Guangxi Zhuang Autonomous Region, Nanning
530011, China
[Abstract] Objective To observe analgesic effects of ethanol extract of Ageratum conyzoides.L. from Guangxi and to
explore its analgesic mechanisms. Methods 60 Kunming mice were selected individually in hot-plate method, body-
torsion method and swinging-tail method, all of them were divided into blank control group, Aspirin group (0.4 g/kg), Agera-
tum conyzoides.L. low dosage group, medium dosage group, high dosage group with 12 rats in each group. Hot-plate
method, body-torsion method and swinging-tail method were used respectively to investigate the analgesic effects of
ethanol extract of Ageratum conyzoides.L. from Guangxi, and then, the contents of malondialdehyde (MAD) and prostaglandin
E2 (PGE2) and the activity of superoxide dismutase (SOD) in hot-plate mice serum were measured. Results ①Compared
with blank control group, thermal stimulation threshold in hot-plate mice was enhanced by the ethanol extract of Ager-
atum conyzoides.L. from Guangxi, the latency time of the mices licking at 30, 60, 90, 120 min respectively were pro-
longed, the differences were statistically significant(P < 0.05 or P < 0.01). Meanwhile, MDA and PGE2 productions were
reduced and SOD level in mice serum enhanced, the differences were statistically significant (P < 0.05 or P < 0.01).
②Compared with model control group, mouse twisting munbers were remarkably reduced by Ageratum conyzoides.L.
from Guangxi, the differences were statistically significant (P < 0.05 or P < 0.01). Body twisting inhibition rate in high,
medium and low dosage group (6.0, 3.0, 1.5 g/kg) were 45.45%, 35.65% and 15.66% respectively. ③Not only com-
pared with blank control group but also compared with former dose in each group, the latency of the tail flick response
in the mice at 30, 60, 90, 120 min were prolonged respectively after given the ethanol extract of Ageratum conyzoides.
L. from Guangxi, the differences were statistically significant (P < 0.05 or P < 0.01). Conclusion The ethanol extract of
Ageratum conyzoides.L. from Guangxi has significantly
analgesic effects, one of its analgesic mechanisms may
be relate to its ability of scavenging oxygen free radicals
and reducing the release of inflammatory cytokines.
[Key words] Ethanol extract of Ageratum conyzoides.L.;
Analgesic; Mechanism
[基金项目] 广西壮族自治区卫生厅自筹经费科研课题(编号
Z2011251)。
[作者简介] 唐秀能(1971.4-),男,壮族,硕士,副主任药师,
硕士研究生导师;研究方向:生化药理学及临床药学。
▲通讯作者
20
中国医药导报 2014 年 1月第 11卷第 2期
CHINA MEDICAL HERALD Vol. 11 No. 2 January 2014
·论 著·
藿香蓟属于菊科植物藿香蓟,又名胜红蓟、白花
草、白花臭草、消炎草等,属一年生草本植物,多以全
草或叶及嫩茎入药,传统药用功效为清热解毒、止血、
止痛等,在亚洲、非洲、南美洲等地均广泛使用[1-2]。 我
国多分布于广东、广西、云南、贵州、四川、江西、福建
等地,民间常用于治感冒发热、咽喉肿痛、疗疮湿疹、
外伤出血、烧烫伤等[3]。本研究采用野生于广西田间荒
地的桂产藿香蓟进行镇痛作用研究,旨在探讨其镇痛
作用及机制。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物 健康昆明种小鼠:体重(20±2)g;SPF
级。 动物许可证号:SCXK 桂 2009-0002,广西医科大
学医学实验动物中心提供。
1.1.2 桂产藿香蓟乙醇提取物的制备 桂产藿香蓟地
上部分阴干后粉碎,精确称取 2 kg,加 20倍量 95%乙
醇浸泡 1 h 后加热回流提取 1 h,置冷后过滤,留置第
1次滤液;药渣加 10倍量 95%乙醇,加热回流提取 1 h,
置冷后过滤,留置第 2 次滤液。合并 2 次滤液,减压回
收乙醇,提取液减压浓缩,再分别配成实验所需的相
应浓度的桂产藿香蓟乙醇提取物[4]。
1.1.3 药物、试剂及仪器 阿司匹林肠溶片,湖南新汇
制药股份有限公司,批号 121104;盐酸吗啡片,青海
制药厂,批号 20130317;冰醋酸、甲醇、氢氧化钾均为
分析纯; 超氧化物歧化酶 (SOD) 试剂盒、 丙二醛
(MDA) 试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供;
GJ-8402 型热板测痛仪,浙江宁海白石电子医药仪器
厂。
1.2 方法
1.2.1 对小鼠热板实验的影响 将雌性小鼠放在水温
调节到 55℃的恒温水浴热板上,以小鼠舔后足的时间
为痛阈指标。 所有小鼠在给药之前均进行测痛,以痛
阈值 10~30 s 为合格鼠。 将合格小鼠 60 只随机分为
5组:空白对照组、阿司匹林组(0.4 g/kg)、桂产藿香蓟
乙醇提取物高、中、低剂量组(分别相当于生药 6.0、
3.0、1.5 g/kg),每组各 12只。1次/d,连续灌胃给药 7 d,
末次给药后 0.5、1、1.5、2 h 各重复测定小鼠痛阈值,
当痛阈值大于 60 s时停止测试,按 60 s记痛阈值。所
有痛阈值测定结束后,立即行小鼠眼球取血,3500 r/min
离心 15 min,弃下层沉淀,留上清液 。 将上清液置
于-20℃冰箱保存, 随后按照试剂盒说明书的方法测
定前列腺素 E2(PGE2)、MDA的含量和 SOD活性[5]。
1.2.2 对醋酸诱发小鼠扭体反应的影响 另取一批小
鼠 60只, 体重 (20±2)g, 雌雄各半, 分组及给药同
“1.2.1” 项下。 末次给药后 1 h, 每只小鼠腹部注射
0.6%醋酸溶液 0.2 mL, 立即记录注射后 15 min 内各
组小鼠的扭体反应次数,并计算扭体抑制率[6-7]。 扭体
抑制率 (%)=[(空白对照组小鼠扭体均数-给药组小
鼠扭体均数)/空白对照组小鼠扭体均数]×100%。
1.2.3 对甩尾法实验的影响 另取一批小鼠,将小鼠尾尖
3 cm 渗入(48.0±0.5)℃恒温水中,以小鼠第 1 次甩尾
反应时间作为痛阈指标,所有小鼠在给药之前均进行
测痛,以痛阈值 10~30 s 为合格鼠,共 60 只。 随后分
组及给药同“1.2.1项下”。末次给药后 1 h,测定小鼠痛
阈值,当痛阈值大于 60 s 时停止测试,按 60 s 记痛阈
值[8]。
1.3 统计学方法
采用统计软件 SPSS 13.0 对数据进行分析, 正态
分布计量资料以均数±标准差(x±s)表示,多组间比较
采用方差分析, 两两比较采用 LSD-t 检验。 以 P <
0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 桂产藿香蓟乙醇提取物对小鼠热板实验的影响
与空白对照组比较,阿司匹林组、桂产藿香蓟乙
醇提取物高剂量组、 中剂量组在给药后 30、60、90、
120 min均能显著延长小鼠舔足反应的潜伏期(P < 0.05
或 P < 0.01), 桂产藿香蓟乙醇提取物低剂量组有延
长的趋势,但差异无统计学意义(P > 0.05)。本组给药
前后比较,桂产藿香蓟乙醇提取物高剂量组、中剂量
组在给药后 30、60、90、120 min 均能显著延长小鼠舔
足反应的潜伏期(P < 0.05 或 P < 0.01),桂产藿香蓟
乙醇提取物低剂量组有延长的趋势,但差异无统计学
意义(P > 0.05)。 见表 1。
2.2 桂产藿香蓟乙醇提取物对小鼠血清 PGE2、MDA
含量及 SOD活性的影响
与空白对照组比较,阿司匹林组、桂产藿香蓟乙
空白对照组
阿司匹林组
桂产藿香蓟醇提物高剂量组
桂产藿香蓟醇提物中剂量组
桂产藿香蓟醇提物低剂量组
12
12
12
12
12
-
0.4
6.0
3.0
1.5
19.21±4.08
22.36±5.56
21.12±6.31
22.25±5.23
22.42±6.88
19.76±5.39
40.15±11.67**▲▲
31.28±11.60*▲
30.82±13.71
24.24±6.69
21.08±7.05
40.58±14.22**▲▲
37.59±12.07**▲▲
33.11±12.72*▲
25.74±6.04
19.07±6.25
30.27±11.28
36.03±9.34**▲▲
34.19±12.66*▲
25.36±6.98
19.36±5.96
25.73±9.05
35.85±10.03**▲▲
37.36±11.08**▲▲
29.79±10.82
组别 只数 剂量(g/kg) 给药前 给药后 30 min 给药后 60 min 给药后 90 min 给药后 120 min
表 1 桂产藿香蓟乙醇提取物对小鼠热板实验痛阈值的影响(s,x±s)
注:与空白对照组比较,*P < 0.05,**P < 0.01;与同组给药前比较,▲P < 0.05,▲▲P < 0.01;“-”表示未给药
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·论 著· 中国医药导报 2014 年 1 月第 11 卷第 2 期
CHINA MEDICAL HERALD Vol. 11 No. 2 January 2014
醇提取物对小鼠血清 PGE2、MDA 含量及 SOD 活性具
有显著的影响。 阿司匹林组、桂产藿香蓟乙醇提取物
高剂量组、 中剂量组均能显著降低小鼠血清 PGE2、
MDA含量,明显提高小鼠血清 SOD 活性(P < 0.05 或
P < 0.01)。 见表 2。
2.3 桂产藿香蓟乙醇提取物对醋酸诱发小鼠扭体反应
的影响
与空白对照组比较,阿司匹林组、桂产藿香蓟乙
醇提取物高剂量组、中剂量组均可显著减少醋酸致痛
时小鼠扭体反应的次数(P < 0.05 或 P < 0.01),桂产
藿香蓟乙醇提取物低剂量组有减少醋酸致痛时小鼠
扭体反应的次数的趋势,差异无统计学意义(P > 0.05)。
见表3。
2.4 桂产藿香蓟乙醇提取物对小鼠甩尾反应的影响
与空白对照组比较,阿司匹林组、桂产藿香蓟乙
醇提取物对小鼠甩尾反应具有显著影响。 阿司匹林
空白对照组
阿司匹林组
桂产藿香蓟醇提物高计量组
桂产藿香蓟醇提物中剂量组
桂产藿香蓟醇提物低计量组
12
12
12
12
12
-
0.4
6.0
3.0
1.5
0.824±0.215
0.426±0.187**
0.528±0.179**
0.596±0.195**
0.642±0.119*
4.16±0.35
2.05±0.26**
2.64±0.28**
2.79±0.31**
3.52±0.38
28.62±2.77
42.45±3.97**
40.08±3.15**
37.11±3.06**
30.51±2.99
组别 只数 剂量(g/kg) PGE2(ng/mL) MDA(nmol/mL) SOD(U/mL)
表 2 桂产藿香蓟乙醇提取物对小鼠血清 PGEa、MDA 含量及 SOD 活性的影响(x±s)
注:与空白对照组比较,*P < 0.05,**P < 0.01;“-”表示未给药;PGF2:前列腺素 E2;MDA:丙二醛;SOD:超氧化物歧化酶
组、桂产藿香蓟乙醇提取物高剂量组、中剂量组在给
药后 30、60、90、120 min 均能显著延长小鼠甩尾反应
潜伏期(P < 0.05 或 P < 0.01),桂产藿香蓟乙醇提取
物低剂量组有延长的趋势,但差异无统计学意义(P >
0.05)。 组内给药前后比较,桂产藿香蓟乙醇提取物高
剂量组、中剂量组在给药后 30、60、90、120 min均能显
著延长小鼠甩尾反应潜伏期(P < 0.05或 P < 0.01),桂
产藿香蓟乙醇提取物低剂量组有延长的趋势,但差异
无统计学意义(P > 0.05)。 见表 4。
3 讨论
热板法和甩尾法是两种较为典型的物理刺激致
痛模型, 扭体法致痛模型中较为典型的化学刺激模
型。本实验采用物理刺激致痛模型和化学刺激致痛模
型的方法来观察桂产藿香蓟乙醇提取物对实验小鼠
的镇痛作用,结果显示,桂产藿香蓟乙醇提取物能显
著提高热板法小鼠热刺激痛阈,在给药后 30、60、90、
空白对照组
阿司匹林组
桂产藿香蓟醇提物高剂量组
桂产藿香蓟醇提物中剂量组
桂产藿香蓟醇提物低剂量组
12
12
12
12
12
-
0.4
6.0
3.0
1.5
39.6±9.28
17.3±5.36**
21.6±6.78**
25.1±7.13**
33.4±8.06
-
56.31
45.45
36.65
15.66
组别 只数
剂量
(g/kg)
15 min 内扭体
次数(次,x±s)
扭体抑制率
(%)
表 3 桂产藿香蓟乙醇提取物对醋酸诱发小鼠扭体反应的影响
注:与空白对照组比较,**P < 0.01;“-”表示未给药及无数据
空白对照组
阿司匹林组
桂产藿香蓟醇提物高剂量组
桂产藿香蓟醇提物中剂量组
桂产藿香蓟醇提物低剂量组
12
12
12
12
12
-
0.4
6.0
3.0
1.5
23.46±4.37
25.68±5.92
24.21±6.02
25.61±5.87
25.32±4.96
24.36±5.28
43.89±10.24**▲▲
35.61±9.01*▲
33.48±9.62
25.53±6.85
24.65±6.17
41.26±13.21**▲▲
36.48±11.82*▲
34.21±12.24*▲
28.67±8.10
24.56±7.23
39.23±9.46*▲
42.15±10.36**▲▲
39.66±9.98*▲
31.36±8.89
24.64±6.25
30.06±9.55
40.27±11.36**▲▲
40.68±12.58*▲
30.33±8.41
组别 只数 剂量(g/kg) 给药前 给药后 30 min 给药后 60 min 给药后 90 min 给药后 120 min
表 4 桂产藿香蓟乙醇提取物对小鼠甩尾潜伏期的影响(s,x±s)
注:与空白对照组比较,*P < 0.05,**P < 0.01;与本组给药前比较,▲P < 0.05,▲▲P < 0.01;“-”表示未给药
120 min均能显著延长小鼠舔足反应的潜伏期和小鼠
甩尾反应潜伏期,能显著减少醋酸致痛时小鼠扭体反
应的次数,统计学结果比较具有显著性差异。 说明桂
产藿香蓟乙醇具有明显的镇痛作用。
产生疼痛的主要原因大多由 PGE2、 白三烯和氧
自由基过多引起[9]。 PGE2是一种非常重要致痛介质,
可直接作用于神经末梢引起疼痛,下调痛觉感受器的
痛阈值,提高其对其他致痛因子的敏感性,也可启动
疼痛所介导的信号转导通路,在外周和中枢都有重要
的作用[10-12],同时能增强组胺、5-羟色胺、缓激肽等其
他炎症、疼痛介质的协同作用[13-14]。 MDA 是自由基引
发的脂质过氧化反应的产物,在外周和中枢氧自由基
均有致痛作用。 SOD是自由基有力的清除剂,可通过
减少自由基的大量产生而达到镇痛作用。本研究结果
显示桂产藿香蓟乙醇提取物能降低实验小鼠血清中
PGE2和 MDA 含量,提高小鼠血清 SOD 活性,提示桂
产藿香蓟乙醇提取物镇痛作用可能与减少炎症介质
释放、清除氧自由基有关。
有文献报道,小鼠热板法实验的舔足底反应不仅仅
是脊髓反应,而且可能和高级中枢有关 [15],而对冰醋
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·论 著·
酸引起小鼠疼痛的扭体法实验可能外周镇痛有关 [16],
本实验显示桂产藿香蓟乙醇提取物对热板法和扭体
法实验小鼠均有明显的镇痛作用,可以推测桂产藿香
蓟乙醇提取物的镇痛作用与中枢和外周均有关系。
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(收稿日期:2013-11-08 本文编辑:李继翔)
医药资讯
中英紧密合作,成功在国内推出标准临床用药管理平台产品
本刊讯(《中国医药导报》通讯员 吕 婧)2013 年 12 月 12 日,爱思唯尔集团在上海宣布,其具有创新意义的新一代
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而为医务工作者提供实时的临床用药决策支持服务。 对此, 爱思唯尔大中华区董事总经理 Yukun Harsono 说:“CMDS-
All 作为一种可实现性解决方案,在正确的时间提供正确的信息,帮助医务工作者做正确的临床用药决策,从而为患者
提供最佳的服务。 ”
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