全 文 ：新疆中医药 2009年 第 27卷 第 2期（总第 120期）
x±sD=98．34-2．38％ RSD=2．42％
4.7 稳定性试验
取样品溶液，分别在 0，2，4，6，8，24h 于
313.0nm、390.0nm波长处测定吸收度，此样品溶液
在 24h内稳定。RSD=1.90％。
4.8 样品的测定
精密称取骆驼蓬总碱颗粒 1g，照“样品溶液制
备”同法操作，得样品溶液，以 0.1mol/L HCl溶液为
空白对照液，分别在 313.0nm、390.0nm波长处测定
吸收度，并代入标准方程得样品中骆驼蓬总生物碱
的含量，结果见表 3。
5 结果与讨论
本文采用紫外分光光度法测定骆驼蓬总碱颗
粒中骆驼蓬总碱的含量，该方法操作准确，灵敏度
高，可作为骆驼蓬总碱颗粒剂的质量控制标准方法
之一。
骆驼蓬总碱颗粒剂是骆驼蓬籽通过索氏提取
器提取而制成的中药颗粒剂，为使总碱与其他成分
有效分离，经实验证实，采用索氏提取器提取，有效
的消除了其他生物碱干扰。
参考文献
[1] Windholz M，et The Merck Index,9 edition．Merck&，USA，1976：
727.
[2] 潘启超，杨小平，李春杰，等.骆驼蓬总碱药理作用的研究.中山
医科大学学报 1997:18（3）：165-167.
[3] 齐海，马特，王仁裕，等．骆驼蓬混合生物碱治疗食管鳞癌 57例
临床病理观察.中华胸心血管外科杂志，1991，7（1）：37-38．
（收稿日期∶2008- 09- 16）
λ2
2.33
表 3 样品的含量测定
样品
A
C（μg/mL）
1 2 3 4 5
λ1
1.73
λ2
2.33
λ1
1.73
λ2
2.33
λ1
1.73
λ2
2.33
λ1
1.73
λ2
2.33
λ1
1.73
230.5 229.2 229.2 229.2 229.3
摘 要 目的：对唇形科植物香青兰中总黄酮类成分进行纯化及定量分析。方法：采用 D101型大孔树脂及紫外分光
光度法，对香青兰中总黄酮进行纯化和含量测定。结果：香青兰中总黄酮成分的含量由纯化前的 1.37%提高到 4.37%，并
测得香青兰药材中总黄酮的含量为 17.810mg/g。结论：大孔树脂吸附法在分离、纯化、富集中药材的有效成分方面具有一
定的推广价值，是克服中药新药开发研究中制备工艺低水平重复可尝试的技术。
关键词 香青兰；总黄酮；大孔树脂；紫外分光光度法
香青兰中总黄酮的纯化与含量测定
张 丽 1，贺金华 2，王新堂 2
（1.新疆华康药业有限责任公司，新疆 乌鲁木齐 830006； 2.自治区药物研究所，新疆 乌鲁木齐 830004）
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
唇形科（Labiatae）植物香青兰（Dracocephalum
moldavica L.）为一年生草本植物，新疆的南疆及东
疆栽培较多，维吾尔医以全草入药，有补脑安神、养
肝暖胃、镇咳止喘的作用[1]。用于心脏病高血压引起
的心神不安、胃寒作痛、气管炎等病症。香青兰是一
种抗逆性强、香型独特，很有应用价值的新香型香
料植物，为北方野生资源开发利用提出新的方向。
该植物为一年生苗及自然脱落的种籽可以安全过
冬，土壤由粘至沙均有生长，常见于干燥山地、丘
陵、草地林缘、山坡、路旁、梯田、地埂、山崖等地，是
一种喜光、耐旱、耐脊薄但不耐涝（漫灌积水 3~4h
出现部分根烂死）的植物[4]。全草含有挥发油、黄酮
类、胡萝卜素等成分[2]。其中，黄酮类化合物不但可
以降血脂、抑制血小板聚集，而且还具有保肝、抗
炎、抗病毒、抗菌等作用[3]。为了进一步研究该植物
中的黄酮类化合物，特进行如下实验。
1 仪器与试剂
1.1 仪器
紫外分光光度仪（SHMADZU UV-2501PC），
电子天平（Sartorliux)，超声提取（天津奥特赛恩斯仪
器有限公司 AS10200BDT），真空干燥仪（上海精宏
仪器设备有限公司 DZF-6050型）。
1.2 试剂
芦丁标准品，亚硝酸钠（北京红星化工厂
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770209），硝酸铝（上海精细学化学品公司 07001），
乙醇（医用级，腾远商贸公司），氢氧化钠（天津市化
学试剂一厂），蒸溜水。
2 标准曲线的制备
2.1 对照品溶液的制备
精 密 称 取 干 燥 至 恒 重 的 芦 丁 对 照 品
50.3324μg，置于 25mL容量瓶中，加乙醇完全溶解
稀释至刻度，摇匀，即得芦丁对照品溶液储备液。
2.2 芦丁标准曲线绘制
精密量取芦丁对照品溶液储备液 10mL 于
100mL 容量瓶中加入乙醇稀释至刻度配制成
0.20132μg/mL，对照品溶液。然后精密量取对照品溶
液 0.5、1.0、3.0、5.0、7.0、9.0、13、17、23mL 置于 50mL
容量瓶中，加 5%亚硝酸钠溶液 1.0mL放置 6min,加
10%硝酸铝 1.0mL 放置 6min，加入 4%氢氧化钠
10.0mL用蒸馏水稀释至刻度摇匀，放置 10min，在
508nm处测定吸收度值。标准曲线图略。回归方程
为：Y=0.6722X-0.0102，相关系数 R2=0.9981，线形范
围为：0.10066μg/mL~4.63036μg/mL.测定结果见表 1。
3 香青兰中总黄酮的提取液的制备
3.1 提取溶剂的选择
经阅读大量文献，得知用甲醇和 95%乙醇提
取，香青兰中总黄酮的提取率较高，由于 95%乙醇
毒性相对较小，使用广泛，因而选择 95%乙醇作为
提取溶剂。
3.2 萃取溶媒的选择及提取液的制备
3.2.1 萃取溶媒的选择 精密称取 1kg 香青兰粉
末，加入乙醇 3.5L，回流提取 3次，每次 2h，收集提
取液，浓缩至 50mL，用乙酸乙醇萃取，分别收集乙
酸层和正丁醇层减压浓缩至干粉，将乙酸乙酯与正
丁醇萃取得到的等量干粉用乙醇溶解，点样于聚酰
胺薄层版上，以芦丁标准品溶液为对照品，用无水
乙醇：水（7∶3）展开，展距 7cm，晾干，喷 5%ALCL3乙
醇溶液显色，在紫外灯下检测，乙酸乙酯与正丁醇
提取物所形成的斑点的大小和颜色有明显的区别，
且乙酸乙酯中的含量较大，因此萃取溶剂选用乙酸
乙酯。
3.2.2 提取液的制备 精密称取乙酸乙酯萃取得
到的干粉 10.3000g，至 1L容量瓶中，用 95%乙醇定
容。
4 大孔吸附树脂富集纯化工艺
4.1 静态最大吸附量的测定
按测定“标准曲线”项下方法，取 25ML香青兰
提取液，测得提取液中总黄酮含量为 4434.186μg，
加入 10ML预处理后的大孔树脂，静止 24h，再次测
定总黄酮含量为 2563.546μg，静态最大吸附量为
157.064μg/ML。
4.2 洗脱溶液浓度的选择
量取预处理后的 D101大孔树脂 150ML装柱，
用蒸馏水洗至无醇味，再精密吸取 40ML供试品溶
液上柱，分别用水，20%，30%，40%，70%，80%，95%
的乙醇梯度洗脱，收集各部分洗脱液，浓缩，置
50ML容量瓶中，用 95%乙醇定容，按“标准曲线”项
下方法，测定紫外吸收度，得到总黄酮的含量，结果
见表 2。
从洗脱曲线可知，洗脱液中总黄酮的含量随着
乙醇浓度增加而增大，在 40%和 50%乙醇洗脱液中
含量都较大，而利用聚酰胺薄层法得知 40%、50%乙
醇洗脱液中成分基本相同，因此，确定洗脱条件为
先用蒸馏水洗去水溶性杂质，再用 50%乙醇洗脱，
收集 50%洗脱部分。
5 纯化与含量测定
5.1 纯化
精密量取预处理好的 D101 大孔树脂 200mL，
装柱，平衡至柱床稳定后，精密加入 40mL香青兰总
黄酮提取液，先用水洗脱，再用 40%乙醇洗脱。收集
洗脱液，减压浓缩，置 50mL容量瓶中，用 95%乙醇
定容至刻度，即得。
5.2 含量测定
取纯化后香青兰总黄酮提取液 1mL，共 3份，
表 1 标准曲线
吸光度（A）
0.075
0.150
0.418
0.686
0.922
取样量（mL）
0.5
1
3
5
7
浓度（μg/mL）
0.101
0.201
0.604
1.007
1.409
表 2 不同浓度乙醇洗脱液中总黄酮含量
吸光度（A）
0.0043
0.0689
0.1313
0.3938
0.3340
0.0868
0.0937
0.0954
乙醇浓度（％）
0
20
30
40
50
70
80
95
浓度（μg/mL）
0.659
10.558
20.120
60.343
51.180
13.301
1.436
1.462
总黄酮含量（μg）
32.945
527.889
1005.976
3017.162
2558.995
665.032
71.790
73.092
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新疆中医药 2009年 第 27卷 第 2期（总第 120期）
至 10mL容量瓶中，按标准曲线制作方法进行含量
测定，结果见表 3。
从以上实验数据计算得出药材中总黄酮的含
量为 17.810mg/g。
5.2.1 稳定性试验 取供试品溶液 2.5mL，至 25mL
容量瓶中，按“标准曲线的制备”项下方法操作，每
隔 10min测定一次，结果见表 4。
结果显示供试品在 1h内的稳定性好。
5.2.2 精密度 取供试品溶液 1mL，至 10mL容量
瓶中，按“标准曲线的制备”项下方法连续测定 6
次，记录吸收度值，结果见表 5。
5.2.3 重复性 取供试品溶液 1mL，至 10mL容量
瓶中，共 6份，按“标准曲线的制备”项下方法测定，
记录吸收度值，结果见表 6。
5.2.4 加样回收率 精密量取 D101大孔吸附树脂
200mL，装柱，平衡至柱床稳定后，精密加入 20mL
供试品溶液，先用水洗脱，再用 40%乙醇洗脱。收集
洗脱液，减压浓缩，置 50mL容量瓶中，用 95%乙醇
定容至刻度。精密吸取 1mL供试品溶液，至 10mL
容量瓶中，加入浓度为 0.20132μg/mL，芦丁标准品
溶液 7.6mL，按“标准曲线的制备”项下方法操作，测
得结果见表 7。
6 讨论
（1）在薄层色谱分析中，分别用硅胶 G板和聚
酰胺板进行薄层层析分离，发现硅胶 G板不能将香
青兰提取液中的黄酮类成分分离，而利用聚酰胺薄
层分离效果较好。
（2）芦丁作为对照品，应用硝酸铝、亚硝酸钠法
测定总黄酮含量的方法简单、稳定、可靠。
（3）从结果分析，应用大孔吸附树脂富集纯化
工艺，香青兰中总黄酮成分的含量由纯化前的
1.37%提高到 4.37%，采用此法可较好地纯化香青兰
总黄酮，而且大孔树脂吸附法具有吸附快、易解吸、
树脂再生简便等优点，在分离、纯化、富集中药材的
有效成分方面具有一定的推广价值，也是克服中药
新药开发研究中制备工艺低水平重复可尝试的技
术。
（4）由稳定性试验结果得知标准品与样品显色
后较为稳定，同时实验中样品测定时，需要同一供
试品作为比色参比液，以扣除未显色成分的影响，
而且也要考虑到植物香青兰的具体产地、存放时间
等因素的影响。
（收稿日期 2009- 01- 22）
表 5 精密度实验
吸收度
0.3878
0.3891
0.4079
0.3909
0.4002
0.3929
浓度（μg/mL）
59.424
59.623
62.504
59.899
61.324
60.205
RSD（％）
1.97
表 4 稳定性实验
吸光度
0.3908
0.3921
0.3898
0.399
0.4012
0.389
浓度（μg/mL）
59.884
60.083
59.730
61.140
61.477
59.608
RSD（％）
1.31
表 3 含量测定
浓度（μg/mL）
58.811
61.630
61.676
吸光度
0.3838
0.4022
0.4025
平均值（μg/mL）
60.706
RSD（％）
2.704
表 6 重复性实验
吸收度
0.3779
0.3821
0.3699
0.3809
0.3902
0.3729
浓度（μg/mL）
57.907
58.550
56.681
58.367
59.792
57.140
RSD（％）
1.90
表 7 加样回收实验
样品
号
1
2
3
4
5
6
标准品加入
量（μg）
1.5087
1.5087
1.5087
1.5087
1.5087
1.5087
实测量
μg
3.0631
3.0179
3.0631
3.0708
3.0164
3.0126
回收率
（％）
1.030
1.000
1.030
1.036
0.999
0.997
平均回收率
（％）
1.016
RSD
％）
1.8
69