全 文 ：量相关已达到了显著水平(0. 651＊＊) ，主茎节数可
以作为判断根部长势较好的选择性指标。
根条的形态性状是桔梗重要的商品性状。一般
认为优质根条应该直且长，主根鲜重 /总根鲜重比值
大。在桔梗的 18 个组合中，15 个组合表现为主根
粗壮;其中有 4 个组合比值优于对照组。组合 16 和
17 表现尤为突出，它们的总根鲜重的超标优势在
30%以上，主根鲜重与总根鲜重的比值都有所增加;
地上部长势繁茂，具体表现为株高较高，主茎节数增
加，主茎较粗，一级分枝数多，地上部生长量增加。
综上所述，桔梗 F1 杂交组合优势在植株的株型
和根部性状上都有所体现，收获部位的突出优势表
现使得雄性不育杂交育种在桔梗育种上具有实用价
值，我们可通过这种方式选育出更多的桔梗新品种。
本实验结果对于以营养器官为收获部位的药材，尤
其是以根部为经济器官的中草药育种研究具有借鉴
意义。
参 考 文 献
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收稿日期:2011-06-13
基金项目:国家自然科学基金(81102796) ;贵州省中药现代化专项(黔科合中药字［2011］5053 号) ;贵州省教育厅重点项目(黔教高发
2011［278］号)
作者简介:罗正伟(1986-) ，男，彝族，硕士研究生，主要从事植物生物技术的研究。
* 通讯作者:孙敏，Tel:023-68254901，E-mail jwcsm@ swu. edu. cn。
竹节参离体培养及植株再生
罗正伟1，张 来1，2，吕翠萍1，张显强1，谌金吾1，孙 敏1*
(1. 西南大学生命科学学院三峡库区生态环境教育部重点实验室，重庆 北碚 400715;2. 安顺学院化学与
生物农学系，贵州 安顺 561000)
摘要 目的:探索竹节参离体培养与植株再生技术及优化培养条件。方法:以竹节参的胚、茎、叶作为外植体，
应用正交的方法，筛选出竹节参最佳的愈伤组织诱导和分化培养基。结果:竹节参不同外植体的最优消毒方法分
别为，种子消毒采用 75%酒精浸泡 60 s，0. 1%氯化汞浸泡 12 min;茎和叶片采用 75%酒精浸泡 15 s，5%次氯酸钠
浸泡 5 min。光照条件下愈伤组织诱导的最佳培养基配方是，胚用 MS + 1. 5 mg /L NAA + 1. 5 mg /L 2，4-D + 0. 1 mg /
L KT;茎用 MS + 1. 5 mg /L NAA + 1. 0 mg /L 2，4-D + 0. 1 mg /L KT，叶为MS + 1. 5 mg /L NAA + 1. 0 mg /L 2，4-D + 0. 2
mg /L KT;黑暗条件下，胚为 MS + 1. 0 mg /L NAA + 1. 5 mg /L 2，4-D + 0. 2 mg /L KT，茎为 MS + 1. 5 mg /L NAA + 1. 5
mg /L 2，4-D + 0. 1 mg /L KT，叶为 MS + 1. 5 mg /L NAA + 1. 0 mg /L 2，4-D + 0. 1 mg /L KT。丛芽诱导最佳培养基为
MS + 3. 0 mg /L 6-BA + 1. 0 mg /L GA3。生根诱导最佳培养基为 MS + 1. 0 mg /L 6-BA + 3. 0 mg /L IBA。结论:本实验
建立了竹节参离体培养及植株再生体系。
关键词 竹节参;离体培养;植株再生
中图分类号:R282. 2 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2011)12-1818-06
·8181· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 34 卷第 12 期 2011 年 12 月
Culture in vitro and Plant Regeneration of Panax japonicus
LUO Zheng-wei1，ZHANG Lai1，2，LV Cui-ping1，ZHANG Xian-qiang1，CHEN Jin-wu1，SUN Min1
(1. School of Life Sciense，Southwest University /Key Laboratory of Eco-environments in Three Gorges Reservoir Region(MOE) ，
Chongqing 400715，China;2. Department of Chemistry and Bio-agronomy，Anshun College，Anshun 561000，China)
Abstract Objective:To study the condition of culture in vitro and plant regeneration of Panax japonicus. Methods:Embryos，
stems and leaves of P. japonicus were used as explants，effects of different hormones for callus induction and plant regeneration were
studied and optimized. Results:The optimal way to obtain sterile explant for seeds was sterilized in 75% ethyl alcohol for 60 s then
0. 1% HgCL2 for 12 min;Stems and leaves were sterilized in 75% ethyl alcohol for 15 s then 5% NaClO for 5 min. Used MS as basic
medium，the optimal hormones combination for callus induction of embryos，stems and leaves were MS + 1. 5 mg /L NAA + 1. 5 mg /L 2，
4-D + 0. 1 mg /L KT;MS + 1. 5 mg /L NAA + 1. 0 mg /L 2，4-D + 0. 1 mg /L KT;MS + 1. 5 mg /L NAA + 1. 0 mg /L 2，4-D + 0. 2 mg /L
KT respectindy under the illumination. But under the darkness，the optimal callus induction hormones combination for embryos leaves
were MS + 1. 0 mg /L NAA + 1. 5 mg /L 2，4-D + 0. 2 mg /L KT;1. 5 mg /L NAA + 1. 5 mg /L 2，4-D + 0. 1 mg /L KT;MS + 1. 5 mg /L
NAA + 1. 0 mg /L 2，4-D + 0. 1 mg /L KT respectivety. The optimal medium for germination was MS + 3. 0 mg /L 6-BA + 1. 0 mg /L
GA3. The optimal medium for roots generation was MS + 1. 0 mg /L 6-BA + 3. 0 mg /L IBA. Conclusion:We establish the system of
culture in vitro and plant regeneration for P. japonicus.
Key words Panax japonicus C. A. Meyer;Culture in vitro;Plant regeneration
竹节参(Panax japonicus C. A. Meyer)为五加
科人参属药用植物，又称竹节人参、竹节七、竹鞭三
七、罗汉三七、土参、野三七等〔1〕。竹节参是我国民
间医药珍品，被誉为“草药之王”，属珍稀濒危的名
贵“七类”中草药，具有南药三七活血化瘀和北药人
参滋补强壮之功效，主要药用成分为人参皂苷。到
目前为止，有关竹节参的研究主要集中于资源分布、
生物学特性、药理活性、有效成分、生药学鉴定和临
床应用等领域，而有关竹节参组织培养的研究仅有
简单报道但不深入〔2-4〕。因此，系统开展竹节参组织
培养及植株再生体系的研究，为保存竹节参种质资
源和满足日益增长的医药需求提供基础的参考资
料。
1 材料
竹节参种子购于湖北恩施济源药业科技开发公
司。经后熟处理的种子播种于湿沙中，当种子开始
膨大有萌发趋势时，经消毒后剥取胚作为外植体，当
小苗长至 5 cm左右，分别取小苗的茎和叶作为外植
体。
2 方法
2. 1 培养基与培养条件 基本培养基为 MS，pH
5. 8，蔗糖 30 g /L，琼脂 6. 5 g /L。培养温度为(23 ±
1)℃，光照强度 1500 lx，光照时间 16 h /d。
2. 2 消毒 外植体经流水冲洗 2 h，用不同消毒方
法消毒后，无菌水冲洗 5 次，接种于含 1 mg /L 2，4-D
的 MS 固体培养基上〔2〕，每种方法处理 30 个外植
体，光照培养 15 d后记录外植体污染数和存活数。
2. 3 光照条件下竹节参愈伤组织的诱导 竹节参
种子经消毒后剥取胚;茎切成长约 1 cm 的小段，叶
片切成 5 mm ×5 mm的小块，经消毒后，接种于不含
激素的 MS培养基上，预培养 5 d，取无污染的外植
体接种于采用 L9(3
4)正交设计的含不同激素的 MS
固体培养基上光照培养。每瓶接种 10 个外植体，每
个水平 3 次重复。
2. 4 黑暗条件下竹节参愈伤组织的诱导 外植体
处理方法，培养基同 2. 3 所述，外植体接种后，于(23
± 1)℃下黑暗培养。
2. 5 竹节参丛生芽的诱导 选择生长旺盛的愈伤
组织，将其转移到附加不同浓度的 6-BA 和 GA3 培
养基中，每瓶接种 10 块愈伤组织，每个水平重复 3
次，光照培养 60 d后记录发芽率。
2. 6 竹节参丛生芽的生根培养 当竹节参芽生长
至 1 ～ 1. 5 cm左右时，剪下生长健壮的小苗，接种于
附加不同浓度的 6-BA 和 IBA 的培养基中，每瓶接
种 10 棵，每个水平重复 3 次，光照培养 30 d 后记录
生根率和平均发根数。生根率 =生根小苗数 /总苗
数 × 100%;平均发根数 =总发根条数 /总苗数。
2. 7 竹节参再生植株的移栽 选择生长健壮的竹
节参再生植株，打开封口膜，室内培养 7 d 左右，洗
尽根上残余的培养基，将小苗移栽于经高锰酸钾消
毒的腐殖土和蛭石(5∶ 1)混合的土壤中室内培养 10
d后，将其移至室外阴凉处栽培，每两周浇一次不加
激素和蔗糖的 MS 液体培养基，直至小苗能正常生
长。另一组将生根后的竹节参再生植株接种于无激
素的 MS培养基中继续复壮培养 20 d 左右，待根充
分生长以及幼苗叶片完全伸展后进行室外移栽实
验。
3 结果与分析
·9181·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 34 卷第 12 期 2011 年 12 月
3. 1 不同消毒方法对竹节参愈伤诱导的影响 竹
节参的嫩茎和叶对酒精的敏感度较高，掌握适当的
酒精处理时间对获得茎和叶的无菌外植体非常重
要。竹节参果实是浆果，种皮较为粗糙，播种前需经
沙埋后熟处理，胚在剥离前本身的污染就较严重，且
竹节参子叶淀粉化程度高，导致消毒难度大。结果
如表 1 所示，种子经 75%酒精处理 60 s 后经 0. 1%
氯化汞浸泡 12 min 消毒所获得的胚具有较高的成
活率和较低的污染率;嫩茎和叶片采用 75%酒精处
理 15 s后 5%次氯酸钠浸泡 5 min，能达到较好的消
毒效果。
3. 2 不同激素水平对竹节参愈伤组织的影响
3. 2. 1 光照条件下不同激素水平对不同外植体愈
伤组织诱导的影响:在光照条件下，竹节参胚和茎段
所诱导出的愈伤组织均出现不同程度的褐化(图 1，
A、B)。统计结果见表 2。
表 1 不同消毒方法对竹节参外植体成活率的影响
外植体 处理方法 接种数 污染数 污染率 /% 存活数 成活率 /%
种子 75%酒精 30 s，0. 1%氯化汞浸泡 12 min 30 29 96. 67 0 0
75%酒精 45 s，0. 1%氯化汞浸泡 12 min 30 26 86. 67 1 3. 33
75%酒精 60 s，0. 1%氯化汞浸泡 12 min 30 20 66. 67 5 16. 67
茎 75%酒精 10 s，5%次氯酸钠浸泡 5 min 30 19 63. 33 10 33. 33
75%酒精 15 s，5%次氯酸钠浸泡 5 min 30 13 43. 33 16 53. 33
75%酒精 20 s，5%次氯酸钠浸泡 5 min 30 8 26. 67 13 43. 33
叶 75%酒精 10 s，5%次氯酸钠浸泡 5 min 30 16 53. 33 8 26. 67
75%酒精 15 s，5%次氯酸钠浸泡 5 min 30 10 33. 33 13 43. 33
75%酒精 20 s，5%次氯酸钠浸泡 5 min 30 5 16. 67 10 33. 33
表 2 光照条件下竹节参不同外植体愈伤组织诱导正交试验结果
编号
激素水平
NAA
/(mg /L)
2，4-D
/(mg /L)
KT
/(mg /L)
胚
诱导率
/% 褐化程度
茎
诱导率
/% 褐化程度
叶
诱导率
/% 褐化程度
1 0. 5 0. 5 0. 1 60. 00 +++++ 66. 67 +++++ 10. 00 +
2 0. 5 1. 0 0. 2 66. 67 ++++ 76. 67 ++++ 36. 67 ++
3 0. 5 1. 5 0. 3 60. 00 +++++ 63. 33 +++++ 20. 00 ++
4 1. 0 0. 5 0. 2 63. 33 +++ 66. 67 +++ 23. 33 ++
5 1. 0 1. 0 0. 3 76. 67 ++ 86. 67 ++ 43. 33 ++
6 1. 0 1. 5 0. 1 83. 33 ++ 90. 00 ++ 43. 33 ++
7 1. 5 0. 5 0. 3 70. 00 +++ 76. 67 +++ 33. 33 +
8 1. 5 1. 0 0. 1 96. 67 + 100. 00 + 50. 00 +
9 1. 5 1. 5 0. 2 100. 00 ++ 100. 00 ++ 56. 67 +
注:用“ +”表示褐化程度，将褐化程度分为五个等级，“ +”越多表示褐化程度越高
竹节参胚接种到相应浓度的培养基上 25 d 左
右开始发芽，继而基部形成愈伤组织，继续培养约
45 d 左右，萌发的小苗开始枯萎死亡，愈伤组织继
续生长。茎段接种到相应浓度的培养基上 5 d 左
右，茎两端切口处开始膨大，10 d 左右长出淡黄绿
色愈伤组织，愈伤组织增殖较快。叶接种到相应浓
度的培养基后 20 d左右开始形成愈伤组织，诱导出
的愈伤组织生长缓慢，疏松易碎，呈晶体状，相对于
胚和嫩茎诱导出的愈伤组织，褐化程度较轻，但增殖
速度较慢。极差和方差分析如表 3 所示，在光照条
件下 NAA和 2，4-D对竹节参的胚、茎和叶的愈伤组
织诱导的影响达到极显著水平。KT 对胚愈伤组织
的诱导达到显著水平，对茎和叶愈伤组织的诱导影
响则不显著。三种激素对胚、茎和叶愈伤组织诱导
的影响程度大小都是 NAA ＞ 2，4-D ＞ KT，从正交试
验优先原则和诱导率选择判断来看，胚用 1. 5 mg /L
NAA + 1. 5 mg /L 2，4-D + 0. 1 mg /L KT;茎用 1. 5
mg /L NAA + 1. 0 mg /L 2，4-D + 0. 1 mg /L KT;叶用
1. 5 mg /L NAA + 1. 0mg /L 2，4-D + 0. 2 mg /L KT 的
激素配比能较好地诱导出愈伤组织，茎相对于胚和
·0281· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 34 卷第 12 期 2011 年 12 月
叶片较易诱导出愈伤组织，且其增殖速度快。
表 3 光照条件下竹节参不同外植体愈伤
组织诱导正交试验极差及方差分析
材料 NAA 2，4-D KT
胚 K1 62. 22 64. 44 80. 00
K2 74. 44 80. 00 76. 67
K3 88. 89 81. 11 68. 89
R 26. 67 16. 67 11. 11
F 55. 97＊＊ 25. 52＊＊ 7. 40*
茎 K1 68. 89 70. 00 85. 56
K2 81. 11 87. 78 81. 11
K3 92. 22 84. 44 75. 56
R 23. 33 17. 78 10. 00
F 40. 32＊＊ 24. 68＊＊ 3. 29
叶 K1 22. 22 22. 22 34. 44
K2 36. 66 43. 33 38. 89
K3 46. 67 40. 00 32. 22
R 24. 45 21. 11 6. 67
F 46. 08＊＊ 38. 69＊＊ － 0. 41
注:F0. 05(2. 9)= 5. 117;F0. 01(2. 9)= 10. 56;* 表示在 0. 05 水平上
显著，＊＊表示在 0. 01 水平上显著
3. 2. 2 黑暗条件下不同激素水平对不同外植体愈
伤组织诱导的影响:黑暗条件下竹节参愈伤组织的
诱导情况如表 4，“－”表示没有出现褐化。3 种外
植体在黑暗条件下诱导出的愈伤组织均呈黄色或淡
黄色，不发生褐化(图 1，C) ，实验表明在竹节参的愈
伤组织培养过程中，黑暗培养能减轻愈伤组织的褐
化，但黑暗条件下愈伤组织的总体诱导率较光照条
件下低。茎愈伤组织的诱导率要高于胚和叶片。
竹节参胚接种到相应浓度的培养基上，黑暗条
件下，竹节参胚的萌发较光照条件慢 5d 左右，40 d
左右形成愈伤组织，萌发的小苗培养一段时间后枯
萎死亡，但不影响愈伤组织的生长。竹节参茎段接
种到相应浓度的培养基上 15 d 左右开始形成愈伤
组织，愈伤组织呈黄色或淡黄色，接种在 8 号培养基
上的愈伤组织培养 3 个月后有白色体细胞胚形成
(图 1，D) ，将其转接于附加 1. 5 mg /L GA3 的 MS 培
养基上光照培养 25 d 后能正常萌发出芽。叶片接
种到相应浓度的培养基上 25 d 左右开始出现晶体
状、疏松易碎的愈伤组织，并且其生长速度较慢。极
差分析表明，3 种激素对竹节参胚和叶片愈伤组织
诱导的影响程度大小依次为 NAA ＞ 2，4-D ＞ KT，从
正交试验优先原则和诱导率选择判断来看，胚用
1. 0 mg /L NAA +1. 5 mg /L 2，4-D +0. 2 mg /L KT;叶
片用 1. 5 mg /L NAA + 1. 0 mg /L 2，4-D + 0. 1 mg /L
KT的激素配比能达到较好的诱导效果。3 种激素
对竹节参茎愈伤组织的影响依次为 2，4-D ＞ NAA ＞
KT，激素配比为 1. 5 mg /L NAA +1. 5 mg /L 2，4-D +
0. 1 mg /L KT时能达到较好的诱导效果。但整体分
析来看，茎的诱导率最高，叶片的诱导率最低。方差
分析如表 5 所示，黑暗条件下 NAA对竹节参的胚和
叶片的愈伤组织的诱导的影响达到极显著水平，对
茎愈伤组织的诱导的影响达到显著水平;2，4-D对 3
种外植体愈伤组织诱导的影响达到极显著水平。
KT对胚、茎、叶愈伤组织的诱导则无显著影响。
图 1 竹节参愈伤组织的诱导状况
A、B. 光照条件下不同褐化程度的愈伤组织 C. 黑暗条件
下的愈伤组织 D. 黑暗条件下产生体细胞胚的愈伤组织
3. 3 不同激素水平对竹节参芽诱导的影响 竹节
参愈伤组织接种于表 6 所示的培养基上 45 d 左右
丛生芽开始萌发，1 号培养基中的少数愈伤组织发
芽并生长出根，但所得小苗生长势弱(图 2，A)。5
号和 7 号培养基丛生芽导率能达到 80%以上(图 2，
B)。丛生芽形成的启动阶段，芽生长和分化速度较
慢，但继续培养 20 d左右，丛生芽的生长速度加快，
芽分化的数量增多。结果表明竹节参愈伤组织在激
素配比为 3. 0 mg /L 6-BA +1. 0 mg /L GA3 的培养中
丛生芽的诱导率最高。
3. 4 不同激素水平对竹节参根诱导的影响 当芽
长至 1. 5 cm左右，选择生长健壮，发育良好的小苗，
将其切下，接种于表 7 所示的培养基上，接种 10 d
左右小苗开始生根。表 7 中的 9 个组合均能诱导竹
节参的芽生根(图 2，C) ，但用 1 号、5 号、7 号培养基
诱导出的根细弱，在激素配比为 1. 0 mg /L 6-BA +
3. 0 mg /L IBA 的 3 号培养基中，芽的生根率最高，
根生长健壮，所得的再生试管苗可用于室外移栽。
·1281·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 34 卷第 12 期 2011 年 12 月
表 4 黑暗条件下竹节参不同外植体愈伤组织诱导正交试验结果
编号
激素水平
NAA
/(mg /L)
2，4-D
/(mg /L)
KT
/(mg /L)
胚
诱导率
/% 褐化程度
茎
诱导率
/% 褐化程度
叶
诱导率
/% 褐化程度
1 0. 5 0. 5 0. 1 50. 00 － 60. 00 － 0. 00 －
2 0. 5 1. 0 0. 2 56. 67 － 66. 67 － 10. 00 －
3 0. 5 1. 5 0. 3 56. 67 － 60. 00 － 10. 00 －
4 1. 0 0. 5 0. 2 63. 33 － 60. 00 － 3. 00 －
5 1. 0 1. 0 0. 3 70. 00 － 70. 00 － 16. 67 －
6 1. 0 1. 5 0. 1 80. 00 － 83. 33 － 13. 33 －
7 1. 5 0. 5 0. 3 56. 67 － 63. 33 － 16. 67 －
8 1. 5 1. 0 0. 1 63. 33 － 73. 33 － 33. 33 －
9 1. 5 1. 5 0. 2 76. 67 － 80. 00 － 30. 00 －
表 5 黑暗条件下竹节参不同外植体愈伤
组织诱导正交试验极差及方差分析
材料 NAA 2，4-D KT
胚 K1 54. 45 56. 67 64. 44
K2 71. 11 63. 33 65. 56
K3 65. 56 71. 11 61. 11
R 16. 66 14. 44 4. 45
F 22. 21＊＊ 15. 64＊＊ － 0. 004
茎 K1 62. 22 61. 11 72. 22
K2 71. 11 70. 00 68. 89
K3 72. 22 74. 44 64. 44
R 10. 00 13. 33 7. 78
F 5. 76* 11. 11＊＊ 0. 82
叶 K1 6. 67 6. 56 15. 55
K2 11. 00 20. 00 14. 33
K3 26. 67 17. 78 14. 45
R 20. 00 13. 44 1. 22
F 36. 38＊＊ 16. 79＊＊ － 0. 37
注:F0. 05(2. 9)= 5. 117;F0. 01(2. 9) = 10. 56;* 表示在 0. 05 水平上
显著，＊＊表示在 0. 01 水平上显著。
表 6 不同激素水平对竹节参丛生芽诱导的影响
编号
激素水平
6-BA /(mg /L) GA3 /(mg /L)
诱导率 /%
1 1. 0 1. 0 50. 00
2 1. 0 1. 5 60. 00
3 1. 0 2. 0 53. 33
4 2. 0 1. 0 56. 67
5 2. 0 1. 5 80. 00
6 2. 0 2. 0 73. 33
7 3. 0 1. 0 86. 67
8 3. 0 1. 5 66. 67
9 3. 0 2. 0 56. 67
表 7 不同激素水平对竹节参生根诱导的影响
编号
激素水平
6-BA /(mg /L)IBA /(mg /L)
生根率
/%
平均发
根数 /条
1 1. 0 1. 0 83. 33 4
2 1. 0 2. 0 86. 67 6
3 1. 0 3. 0 100. 00 7
4 2. 0 1. 0 76. 67 5
5 2. 0 2. 0 90. 00 6
6 2. 0 3. 0 93. 33 6
7 3. 0 1. 0 70. 00 5
8 3. 0 2. 0 90. 00 6
9 3. 0 3. 0 83. 33 6
图 2 竹节参组培植株再生状况
A. 发芽的愈伤组织 B. 丛生芽 C. 生根培养 D. 室外
移栽
3. 5 竹节参室外移栽 竹节参为阴生植物，对光
的直射较为敏感，其野生环境对遮阴度要求较为苛
·2281· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 34 卷第 12 期 2011 年 12 月
刻，一年生竹节参要求遮蔽度在 60%左右，随着生
长年限的增加，遮蔽度逐年下降〔5〕。组织培养中获
得的再生植株较脆弱，移栽时严格控制光照强度和
空气湿度是移栽成活的关键。移栽实验中发现，没
有经过复壮培养的竹节参组培苗容易折干而死亡，
导致其成活率降低，经壮苗培养则能显著提高其移
栽成活率(图 2，D)。
4 讨论
4. 1 在植物离体培养过程中导致愈伤组织褐化的
因素很多，包括植物种类、外植体的选择、培养基、激
素类型与浓度、培养条件等。竹节参的愈伤组织诱
导过程中，光照条件下所诱导的愈伤组织均出现不
同程度的褐化，而暗培养则没有出现褐化现象，说明
光照是影响竹节参愈伤组织褐化的重要因素之一。
这一结果与熊丽报道的暗培养能抑制愈伤组织褐
化〔6〕以及许传俊研究蝴蝶兰黑暗条件下的组织培
养时，外植体褐变程度较轻结果一致〔7〕。
4. 2 离体培养过程中激素的类型和浓度对外植物
愈伤组织的诱导和植株再生起到至关重要的作
用〔6，8〕。有研究报道指出，竹节参愈伤组织诱导过
程中，单独使用 2，4-D 所诱导出的愈伤组织质地紧
密，褐化程度较高〔2〕。在实验中发现，2，4-D 配合
NAA和 KT使用也能诱导出愈伤组织。黑暗条件下
竹节参愈伤组织的生长速度较光照条件下慢。丛生
芽培养一段时间后，少量新叶出现轻微的白化和玻
璃化现象，是环境条件影响还是激素选用和配比导
致这种现象产生有待深入研究。实验发现，黑暗条
件下愈伤组织在 1. 5 mg /L NAA + 1. 0 mg /L 2，4-D
+0. 1 mg /L KT 的培养基上能形成白色体细胞胚，
其在附加有 1. 5 mg /L GA3 的 MS 培养基上能正常
萌发出芽，这为竹节参丛生芽的诱导提供另一途径。
4. 3 适当的选择消毒剂和消毒方法是获得无菌外
植体的关键，本实验中采用氯化汞、次氯酸钠和酒精
作为消毒剂，通过控制适当的消毒时间获得无菌外
植体。值得注意的是外植体经消毒剂处理后，第一
次洗涤时要迅速，以及时除去表面残留的消毒剂，避
免其对外植体的进一步毒害，随后几次则应适当逐
渐延长时间以除去或稀释外植体内部残留的消毒
剂。
4. 4 植物组织培养一般先将种子进行消毒后在培
养基上萌发获得无菌苗，再以无菌苗的不同组织、器
官作为外植体或直接取自然生长的植株的不同组
织、器官消毒后作为组织培养的外植体。胚诱导出
的愈伤组织获得再生植株的频率较高〔9〕，因而常以
胚作为外植体进行再生实验。但竹节参的胚较为幼
嫩，剥离难度高，对高毒性和高渗透性的消毒剂异常
敏感，直接对胚进行消毒不易掌握处理时间，因而很
难获得无菌的胚作为外植体。消毒剂对胚具有很强
的杀伤力，会使愈伤组织的形成推迟和降低外植体
的再生能力，并且消毒剂在外植体中残留也会影响
后续的植株再生〔10〕，获得的再生植株易产生形态畸
变。本实验先对种子进行消毒后，再剥取胚作为外
植体，较易掌握处理时间和避免了消毒剂与胚接触
时间过长而影响后续再生实验。
参 考 文 献
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233-239.
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