全 文 ：中国药房 2009年第 20卷第 18期 Ch ina Pharmacy 2009 V ol.20 No.18 · 1399·
Δ国家自然科学基金资助项目(30873383)
*副教授 , 博士研究生。研究方向:中药活性成分。电话:0717-
6392452。E-mail:y xyyd@ctgu.edu.cn
#通讯作者:教授 , 博士研究生导师。研究方向:中药化学及中药
新药研发。电话:027-88920834
·中药分析与鉴定·
竹节参化学成分及指纹图谱初步研究 Δ
袁 丁 1 , 2 * ,周志勇 2 ,何毓敏 2 ,黄鹤飞 2 , 刘焱文 1 # ,张长城 2(1.湖北中医学院中药资源和中药化学重点实验
室 ,武汉市 430061;2.三峡大学医学院 ,宜昌市 443002)
中图分类号 R284.1;R284.2 文献标识码 A 文章编号 1001-0408(2009)18-1399-03
摘 要 目的:研究竹节参中皂苷类化学成分 ,并对其指纹图谱进行初步研究 。方法:利用大孔吸附树脂柱 、硅胶柱 、制备型高效液
相色谱(HPLC)法进行化合物的分离纯化 , 根据其理化性质和光谱数据进行结构鉴定;并研究湖北恩施产竹节参药材的 HPLC指
纹图谱 。结果:从竹节参中分离得到 3种皂苷类化合物 ,鉴定了其中 2种 ,分别为人参皂苷 Rd和人参皂苷 Re 。2个已鉴定化合物在
湖北恩施产竹节参药材中含量较低 。结论:本试验可为科学评价及有效控制竹节参药材的质量奠定基础 。
关键词 竹节参;化学成分;指纹图谱
Chemical Composition of Panax japonicus and Its HPLC Fingerprint Chromatogram
YUAN Ding , LIU Yan -wen(Hubei Key Labo rato ry of Na tural Resources and Chemist ry of Chinese
Medicinal M aterials , Hubei College of Tradi tional Chinese M edicine , Wuhan 430061 , China)
YUAN Ding , ZHOU Zhi-yong , HE Yu-min , HUANG He-fei , ZHANG Chang_cheng(Colleg e o f Medical
S cience o f T hree Go rges Universi ty , Yichang 443002 , China)
ABSTRACT OBJECTIVE:T o study the chemical com position o f the saponin ex tract o f Panax japonicus and study its fin-
gerprint chromatog ram.METHODS :The iso la tion and purifica tion o f this ex tract w ere achieved by means o f macroporous
adsorptive resins co lumn chromat og raphy , silica gels column chromatog raphy , preparative high perfo rm ance liquid chro-
matography.The st ructures of the compounds w ere identified based on their physico -chemical proper ty and spect ral da ta.
The HPLC fingerprint chromatog ram of Panax japonicus f rom Enshi in Hubei province w as studied.RESULTS:Three
compounds w ere isolated f rom the ex t ract , of w hich , tw o w ere identified to be g insenoside Rd(Ⅰ)and g insenoside Re (Ⅱ),
and the contents o f t he tw o com pounds w ere low.CONCLUSION :The exper iments lay a founda tion fo r scientific evaluation
and e ffective control o f the quality of Panax japonicus.
KEY WORDS Pana x japonicus;Chemical composition;Fingerprint
浸膏量过高 ,滴丸成型性差 ,易聚集黏结;若将提取液制成干粉
加入 ,则耗能费时 。故试验中以稠浸膏的形式加入 。试验表明 ,
稠浸膏与基质混合均匀 ,且制成的滴丸外观光滑。
试验过程中发现 , 滴丸的成型受多种因素的影响 , 难于有
某一个指标来衡量工艺的优劣 。因此 , 笔者选取滴丸的丸重变
异系数 、溶散时限 、滴丸成型率 3项指标综合评定 。
笔者采用小型滴丸机进行试验 , 既简便易行 , 又能为大生
产提供较完备的工艺流程和操作方法 。此剂型的改良 , 符合中
药现代化研究战略思想 ,能够带来较好的社会和经济效益 。
参考文献
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中草药 , 2001 , 32(1):28.
(收稿日期:2008-06-26 修回日期:2009-03-29)
竹节参又名竹节三七 、竹节人参 、白三七等 ,系五加科人参
属植物竹节参 Pana x japonicus C.A.Mey.的干燥呈竹鞭状
根茎 , 为我国西南地区土家族 、苗族民族聚居区民间常用中草
药 ,被 1977年后各版《中国药典》所收载 。其味甘 、微苦 ,性温 ,
归肝 、脾 、肺经 ,具有滋补强壮 、散瘀止痛 、止血祛痰功能 , 常用
于病后虚弱 、劳嗽咳血 、跌扑损伤等证的治疗 。现代药理研究证
明 , 竹节参具有抗炎 、抗病毒 、镇静 、镇痛 、保护缺血心肌 、清除
氧自由基等作用 [1 ] 。笔者从竹节参正丁醇部位分离得到 3种化
合物 , 鉴定了其中 2种 , 并对湖北恩施产竹节参药材指纹图谱
进行了初步研究 , 旨在为科学评价及有效控制竹节参药材的质
· 1400· China Pharm acy 2009 Vol.20 No.18 中国药房 2009年第 20卷第 18期
量奠定基础 。
1 仪器与试药
1
H-NM R/13C-NM R:Varian INOVA -600型核磁共
振谱仪(TM S内标 ,美国 Variant 公司);2690型高效液相色谱
(HPLC)仪及柱温箱 、Millennium 32色谱工作站 、996型二极管
阵列检测器(美国 Waters公司);806型制备型 HPLC仪 ,包括
305 、 306泵 , Dynamax model UV -1检测器 (Gilson 公司);
KQ -250B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。硅胶
(青岛海洋化工厂);柱色谱所用试剂为分析纯 , HPLC 所用试
剂为色谱纯 ,水为重蒸馏水;竹节参药材于 2007年 9月采于湖
北恩施州 , 经三峡大学张长城教授鉴定为五加科人参属植物竹
节参 Panax japonicus C.A.Mey.的干燥根茎 , 凭证样本存
放于三峡大学医学院实验中心(编号:ZJS -07-903)。
2 方法与结果
2.1 提取分离
取竹节参 5 kg ,碾碎 , 60%乙醇提取 3次 ,每次 2 h ,合并提
取液 ,减压浓缩 ,所得浸膏悬浮于水 ,依次用石油醚 、醋酸乙酯 、
正丁醇萃取 ,浓缩 ,得正丁醇浸膏 750 g 。取 240 g 浸膏溶于水 ,
过 D101大孔树脂 ,依次用水及 30%、60%、90%乙醇冲洗 。取
60%洗脱部位 195 g ,经硅胶柱层析分离 ,采用三氯甲烷-甲醇
梯度洗脱 , 得 Fr1 、Fr2 、Fr3 、Fr4和 Fr5五部分;Fr1部分再经
反复硅胶柱层析及制备型 HPLC , 得化合物 1(24.6 mg)、化合
物 2(12.4 mg)、化合物 3(16.1 mg)。
2.2 结构鉴定
2.2.1 化合物 1:白色粉末 , 熔点(mp)为 204 ～ 206 ℃, 薄层
检测(氯仿-甲醇-水(65∶35∶10)的下层溶液为展开剂)的
R f值与人参皂苷 Rd标准品相同;与人参皂苷 Re 标准品混合
后的 HPLC检测 (流动相为乙腈-水 , 20%～ 60%梯度洗脱)
图谱见图 1。
1H-NM R(300 MHz):δH5.55(1H , br.s , H-24), 5.34
(1H , d , J=7.5 Hz ,H-1″), 5.17(1H , d , J=7.7 H z , H-1),
4.90(1H , d , J=7.5 Hz ,H -1),δH 1.61(3H , s ,H -27), 1.59
(6H , s ,H -21 ,H-26), 1.27(3H , s ,H -28), 1.10(3H , s ,H -
29), 0.95(6H , s ,H-18 ,H-30),0.81(3H ,s ,H -19)。
13
C-NM R(600 M Hz)d(ppm):双键碳信号:126.4(C -
24), 130.9(C-25);羟基碳信号:89.0(C-3), 70.2(C -12),
83.3(C-20), 54.6(C-17), 22.4(C-21), 36.2(C-22);其它
碳信号:39.2(C-1), 26.8(C-2), 39.7(C-4), 56.4(C-5),
36.9(C-10), 31.0(C-11), 49.6(C-13), 26.7(C-16), 16.6
(C-18), 16.4(C-19), 23.2(C-23), 25.8(C-26), 17.8
(C -30), 105.2(3 -g lc C -1￠), 83.6(C -2￠), 78.1
(C-5￠), 62.9(C-6￠), 106.1(C-1￠￠), 79.4(C-3￠￠),
78.0(C-5￠￠), 62.8(C-6￠￠), 98.3(20-g lc C -1￠),
75.2(C-2￠),71.7(C-4￠), 62.6(C-6￠)。
综上 ,参考文献 [2 ]鉴定化合物 1为人参皂苷 Rd。
2.2.2 化合物 2:白色针状结晶 , mp为 200 ～ 203 ℃, 薄层检
测(氯仿-甲醇-水(65∶35∶10)的下层溶液为展开剂)的 R f
值与人参皂苷 Re 标准品相同;与人参皂苷 Re标准品混合后
的 HPLC检测 (流动相为乙腈-水 , 20%～ 60%梯度洗脱)图
谱见图 2。
1H-NM R(300 MHz):δH 6.44(1H , J=7.2 H z ,H-1″),
5.57(1H , br.s ,H-24), 5.23(1H ,d , J=6.5 H z ,H-1′), 5.15
(1H , d , J=7.7 Hz ,H -1),δH 2.01(3H , s ,H-21), 1.75(3H ,
d , J=6.2 Hz ,H-6), 1.60(6H , s ,H-26 ,H-27), 1.58(3H ,
s , H -29), 1.35(3H , s , H-28), 1.18(3H , s , H -18), 0.97
(3H , s ,H-19), 0.95(3H ,s ,H-30)。
13C-NM R(600 MH z)d(ppm):双键碳信号:125.8(C-
24), 130.8(C-25);羟基碳信号:78.5(C-3), 74.0(C-6),
70.2(C-12), 83.3(C-20), 54.8(C-17), 22.3(C-21), 36.0
(C-22);其它碳信号:39.7(C-1), 27.5(C-2), 39.7(C-4),
61.0(C -5), 45.5(C-7), 41.2(C -8), 30.8(C -11), 49.1
(C -13), 51.4(C -14), 17.2(C-19), 23.1(C -23), 25.4
(C -26), 17.6(C -30), 101.3(6-glc C -1￠), 77.6(C -
3￠), 77.6(C -5￠), 62.9(C -6￠), 101.7(rha C-1￠),
73.9(C-4￠), 69.3(C-5￠), 18.3(C-6￠), 98.0(20-g lc
C-1￠),75.0(C-2￠),78.7(C-5￠), 63.3(C-6￠)。
综上 ,参照文献[2 ]鉴定化合物 2为人参皂苷 Re 。
2.3 指纹图谱初步研究
2.3.1 供试品溶液的制备:取竹节参药材粉末(过 80目筛)0.5
g , 精密称定 , 置于具塞圆底烧瓶中 ,加 60%甲醇 25mL , 超声提
取 0.5 h ,滤过 ,甲醇定容至 25 mL ,微孔滤膜滤过 ,即得。
2.3.2 色谱条件:色谱柱为 YM C -pack ODS -AQ(250
mm×4.6 mm , 5μm),流动相为乙腈(C相)-水(5mmol· L -1
磷酸二氢钾),梯度洗脱(0 ～ 60 min , C相 8%～ 80%),柱温为 30
℃, 检测波长为 203 nm , 流速为 1.0 mL ·min -1 , 进样量为 10
μL 。
2.3.3 测定方法:吸取供试品溶液 10μL , 按“2.3.2”项下色谱
条件进行分析 。色谱见图 3。
2.3.4 色谱峰标记:将上述所得单体成分按 “2.3.2”项下色谱
条件进行分析 ,色谱见图 4;将人参皂苷 Re标准品与供试品混合
进样 ,色谱见图 5。
3 讨论
指纹图谱试验中采用了甲醇-水、乙腈-水 、甲醇-水 (5
中国药房 2009年第 20卷第 18期 Ch ina Pharmacy 2009 V ol.20 No.18 · 1401·
Δ2007年湖南省自然科学基金计划项目(07JJ3017)
*实验师。研究方向:化学、 生物实验教学与科研。E-mail:
xnxy hy@126.com
#通讯作者:副教授 ,理学博士 , 博士后。研究方向:物理化学、精
细化学品、 药物分析、 纳米材料科学的教学与科研 。电话:0735-
2865916。E-mail:dbhy 2006@yahoo.com.cn
紫外分光光度法测定马鞭草中微量元素硒的含量 Δ
卞杰松 1 * ,邓 斌 1 #,黄红英 1 ,章爱华 2 ,刘志伟 3(1.湘南学院化学与生命科学系 ,郴州市 423000;2.吉首大
学化学化工学院 ,吉首市 416000;3.浙江海正药业股份有限公司 ,台州市 318000)
中图分类号 R284.1;R927.2 文献标识码 A 文章编号 1001-0408(2009)18-1401-03
摘 要 目的:测定马鞭草中微量元素硒的含量。方法:采用紫外分光光度法 ,以邻苯二胺盐作显色剂 ,检测波长为 335 nm 。结果:
硒的检测浓度在 0 ～ 0.10μg ·mL -1范围内与吸光度呈良好的线性关系 (r =0.999 3);平均回收率为 99.78%, RSD =0.29%
(n =9)。结论:本方法简便 、灵敏 、准确 ,可用于马鞭草中微量元素硒的含量测定 。
关键词 马鞭草;硒;含量;紫外分光光度法
Determination of Trace Element Selenium in Verbena off icinalis by Ultraviolet Spectrophotometry
BIAN Jie-song ,DENG Bin ,HUANG Hong -ying(Dept.of Chemist ry and Life Science , Xiang nan Universi ty ,
Chenzhou 423000 ,China)
ZHANG Ai-hua(College of Chemi st ry and Chemical Engineering , Jishou University , Jishou 416000 , China)
LI U Zhi-wei(Zhejiang Hi sun Pharmaceutical Co.L td., Taizhou 318000 , China)
ABSTRACT OBJECTIVE:T o determine the content o f selenium in Verbena of f ici nalis.METHODS:The content o f se le-
nium in Verbena of f icinalis was dete rmined by UV spectrophotomet ry with o -pheny lenediamine as developer under a detec-
tion w aveleng th o f 335 nm.RESULTS:The linear range of selenium was 0 ～ 0.10 μg ·mL -1(r =0.999 3)with an average
recovery o f 99.78%(R SD =0.29%, n =9).CONCLUSION :T he method w as proved to be simple , sensitive and accura te ,
and applicable for the dete rmination of trace elem ent se lenium in Verbena of f ici nalis.
KEY WORDS Verbena of ficinalis;Se lenium ;Content;Ultraviole t spec tropho tometry
mmol ·L -1磷酸二氢钾)、乙腈-水(5mmol ·L -1磷酸二氢钾)
等多种流动相系统 [3] ,结果表明 ,以乙腈-水(5mmol·L -1磷酸
二氢钾)为流动相对色谱峰的分离效果最好;再根据所得图谱不
断优化 ,最终确定了梯度洗脱条件 。试验记录了 120min时段内
的色谱图 ,发现 60 min后无主要色谱峰出现 ,故确定采集时间
为 60 m in 。
通过单体成分与药材总提取物的 HPLC图谱比较可知 , 竹
节参中人参皂苷 Rd 、人参皂苷 Re的含量较低 ,与文献记载 [4 ]竹
节参主要皂苷类成分以齐墩果酸型皂苷为主一致 。竹节参药材
提取物的 HPLC图谱中吸收峰较低 , 主要原因可能是皂苷类
成分紫外末端吸收 、缓冲盐浓度低及样品中多种成分相互影响
等共同作用的结果 ,有待进一步改进 。
从药材总提取物图谱可以看出 , 在 25 ～ 35 min之间有 4
个较高的色谱峰 ,推断应为竹节参中主要化学成分 。因此 ,有针
对性地分离主要化学成分 , 从而建立竹节参的 HPLC指纹图
谱质量评价体系是后期工作的重点 。
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(收稿日期:2009-02-02 修回日期:2009-05-06)
马鞭草为马鞭草科多年生草本植物马鞭草 Verbena of-
f icinalis L.的全草或根 ,又叫铁马鞭 、自马鞭 、疟马鞭 ,皆以穗
类鞭鞘而得名 , 常生于河岸 、草地 、荒地 、路边 、田边及草坡等
处 ,全国各地均有分布 [1 ,2 ]。其药用部分为全草或带根全草 。作
为一种传统的中草药 , 它具有清热解毒 、截疟杀虫 、治痢 、利水
消肿 、通经散瘀等功效 ,广泛用于治疗伤风感冒 、水肿 、痢疾 、黄
疸等病症 [3 ] 。马鞭草内含多种无机元素 , 尤其含丰富的微量元
素硒 。硒是人体必需的微量元素 , 对健康有着极其重要的作
用 。本试验采用紫外分光光度法 [4 ,5 ] ,用邻苯二胺作显色剂 ,检
测波长 335 nm , 测定马鞭草中微量元素硒的含量 , 方法简便 、
灵敏 、准确 ,可用于马鞭草中微量元素硒的含量测定 。
1 仪器与试药