全 文 ：［13］ 孙 莲，杨文菊，王 岩. 桑枝多糖的提取与含量测定［J］.
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［14］ 孙 莲，阎 超，孟 磊，等. 桑叶多糖的提取与含量测定
［J］，中国卫生检验杂志，2004，14(3):344.
毛细管电泳法测定天山花楸中的黄酮类化合物
马晓丽1， 常军民2* ， 李毓斌2， 孟 磊1
(1.新疆医科大学分析测试中心;2.新疆医科大学药学院，新疆 乌鲁木齐 830054)
收稿日期:2010-03-26
基金项目:新疆维吾尔自治区高校科研计划(XJEDU2005I19)
作者简介:马晓丽(1980 －)，女，博士，讲师，研究方向:分析测试
* 通讯作者:常军民，男，教授，博士，研究方向:天然药物分析。Tel(0991)4365317;E-mail:cjmcjn2471@ yahoo. com. cn
关键词:天山花楸;芦丁;金丝桃苷;槲皮素;毛细管电泳法
摘要:目的:建立简单、快速能同时分析天山花楸中 3 种黄酮类化合物(芦丁、金丝桃苷和槲皮素)的高效毛细管电泳法
(HPCE)。方法:采用熔融石英毛细管(58. 5 cm × 75 μm)，有效长度为 48. 5 cm，uncoated;缓冲体系为 10 mmol / L 的
Na2B4O7-20 mmol / L的 NaH2PO4(pH8. 30);分离电压 20 kV(+)→(－);电泳时间 20 min;电泳温度 25 ℃;压力进样
0. 5psi × 20sec;柱上检测 UV 254 nm(二极管阵列检测器)。结果:3 种黄酮类化合物在 10 min内得到较好分离，芦丁、金
丝桃苷、槲皮素在线性范围内与峰面积线性关系良好，样品平均回收率为 99. 5%、100. 5%和 99. 7%。结论:本方法简
单、快速，消耗小，结果准确可靠，可用于天山花楸中黄酮类成分测定及质量控制。
中图分类号:R284. 1 文献标识码:B 文章编号:1001-1528(2011)03-0534-03
天山花楸 Sorbus tianschanica Ruper. 为蔷薇科 Rosacea
花楸属 Sorbus植物天山花楸 Sorbus tianschanica Ruper. 的干
燥嫩枝叶，主产于新疆的天山山脉，是维吾尔民间习用药材
之一，药理学研究证明其具有镇咳、祛痰、平喘、强心和保护
心肌缺血等作用［1-2］。黄酮类化合物在天山花楸中分布较
广，是其主要活性成分之一［3］。
天山花楸中黄酮类成分的检测方法大多采用 HPLC
法［4-9］而且多为单一成分检测。高效毛细管电泳法［10-12］是
近年发展起来的一种具有高效、灵敏和低耗的分析方法，已
广泛应用于中草药的活性成分测定。本实验首次采用高效
毛细管电泳法研究天山花楸干燥枝叶中的 3 种黄酮类成分
(芦丁、金丝桃苷和槲皮素)，旨在建立一种简单、快速能同
时分离测定天山花楸中芦丁、金丝桃苷和槲皮素含量的方
法，以期为天山花楸资源的开发和利用提供基础依据。
1 仪器与试药
Beckman P /ACETM MDQ 型高效毛细管电泳仪(Beck-
man公司，美国)，二极管阵列检测器，石英毛细管柱(58. 5
cm × 75 μm，有效长度 48. 5 cm，河北永年);FE20-pH 计
(METTLER TOLEDO 公司);XS205 电子天平(METTLER
TOLEDO)。
芦丁、金丝桃苷和槲皮素对照品均购于中国药品生物制
品检定所(批号分别为:100080-200306，111521-200303，
100081-200406)。天山花楸采自新疆呼图壁县林场，并经新
疆医科大学药学院生药教研室帕丽达.阿不力孜教授鉴定。
试剂均为分析纯，水为去离子水。
2 方法与结果
2. 1 电泳条件
石英毛细管柱(58. 5 cm × 75 μm，有效长度 48. 5 cm);
运行缓冲液:10 mmol / L的 Na2B4O7-20 mmol /L的 NaH2PO4
(pH8. 30);分离电压 20 kV(+)→(－);电泳时间 20 min;
电泳温度 25 ℃;压力进样 0. 5psi × 20s;柱上检测 UV 254 nm
(二极管阵列检测器)。清洗程序:第一次进样前分别以甲
醇、双蒸水、0. 1mol /L 盐酸、双蒸水、0. 1mol /L NaOH、双蒸
水、缓冲溶液冲洗毛细管 20psi × 3min;每次进样间用 0. 1
mol /L NaOH冲洗 20psi × 5 min，双蒸水冲洗 20psi × 5 min，最
后用缓冲溶液冲洗 20psi × 5 min。每变换一次电泳缓冲液，
均用缓冲液平衡至电流平稳(10 min)后才能进样测量。样
品及缓冲液均在 4 ℃储存，在使用前用 0. 45 μm微孔滤膜滤
过，且临用前超声脱气处理。
2. 2 对照品贮备液的制备
分别精确称取芦丁、金丝桃苷及槲皮素对照品各 10. 0
mg，置于 10 mL量瓶内，以甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制
成浓度分别为 1 mg /mL的对照品贮备液;放置 － 4 ℃冰箱中
保存，在使用前按要求稀释。
2. 3 供试品的制备
样品研磨均匀，过 20 目筛，精密称取 5. 0 g，置于 100 mL
具塞三角瓶中，加甲醇 50 ml超声提取(30 min × 3)，合并提
取液，4 000 r /min离心 15 min，取上清液将甲醇挥尽，用水溶
解，再用乙醚萃取，将水溶液浓缩至 10 mL，摇匀，制成供试
品溶液，放置 － 4 ℃冰箱中保存。
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第 33 卷 第 3 期
中 成 药
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Vol. 33 No. 3
2. 4 线性关系考察
分别精密吸取 0. 0625，0. 125，0. 185，0. 25，0. 375 mL 芦
丁对照品贮备液置于 5 个 10 mL量瓶中，并依次加入金丝桃
苷对照品贮备液 0. 125、0. 25、0. 375、0. 5、0. 67 mL 及槲皮素
对照品贮备液 0. 025、0. 05、0. 075、0. 1、0. 13 mL，后用甲醇稀
释至刻度，摇匀作为对照品混合液，经 0. 45 μm微孔滤膜滤
过，进样，记录色谱图，以峰面积为纵坐标，以相应进样浓度
为横坐标进行线性回归。结果表明混合标准品在线性范围
内与峰面积积分值呈良好的线性关系，结果见表 1，电泳图
见图 1。
图 1 芦丁、金丝桃苷、槲皮素混合标准品的 CZE图
1. 芦丁 25 μg /mL 2. 金丝桃苷 50 μg /mL 3. 槲皮素 10 μg /mL
表 1 芦丁、金丝桃苷、槲皮素线性关系考察结果
成分 r 标准曲线 线性范围(μg /mL)
芦丁 0. 997 8 Y = 2 075X － 2 775. 2 7. 06 ～ 37. 67
金丝桃苷 0. 998 7 Y = 3 374. 8X － 13 466 12. 5 ～ 66. 67
槲皮素 0. 998 7 Y = 5 859. 6X － 4 928 2. 03 ～ 13. 47
2. 5 进样精密度考察
考察所建立方法在相同操作条件下短时间内的精密度:
取对照品混合液(芦丁 25 μg /mL，金丝桃苷 50 μg /mL，槲皮
素 10 μg /mL)，连续 5 次重复进样分析每次进样 20 s，测得
芦丁、金丝桃苷、槲皮素对照品峰面积的 RSD分别为 0. 9%，
1. 2%，2. 7%。迁移时间的 RSD 分别为 0. 14%、0. 13%、
0. 14 %。结果表明，此分析方法精密度好。
2. 6 稳定性实验
取对照品混合液(芦丁 25 μg /mL，金丝桃苷 50 μg /mL，
槲皮素 10 μg /mL)，每隔 2 h连续 12 h考察样品的日内稳定
性，每次进样 20s。测得芦丁、金丝桃苷、槲皮素对照品峰面
积的 RSD分别为 1. 7%，1. 8%，2. 7%。迁移时间的 RSD分
别为 0. 80%、1. 04%、1. 36 %。结果表明芦丁、金丝桃苷及
槲皮素对照品溶液的日内稳定性好。
2. 7 方法重现性实验
取同一批次天山花楸样品各 6 份，按 2. 3 项下操作制备
样品溶液，经测定样品中芦丁、金丝桃苷及槲皮素峰面积的
RSD%分别为 1. 1%，0. 4%，2. 6%，迁移时间的 RSD%分别
为 0. 14%，0. 12%，0. 10%。结果表明，该方法对芦丁、金丝
桃苷和槲皮素的含量测定具有较好的重现性。
2. 8 加样回收率
取已知含量的样品，定量加入混合对照品，以 2. 3 项进
行处理，重复测定 6 次，测得吸收峰面积，计算回收率，结果
见表 2。
表 2 回收率测定结果(n =6)
被测物
实际量 /
(μg /mL)
加入量 /
(μg /mL)
测得量 /
(μg /mL)
平均回收
率 /%
RSD /%
芦丁 16. 12 25 40. 79 99. 5 2. 3
16. 12 25 41. 19
金丝桃苷 36. 43 50 85. 93 100. 5 2. 1
36. 43 50 86. 53
槲皮素 6. 88 10 16. 53 97. 7 2. 6
6. 88 10 16. 77
2. 9 样品测定
取不同时间采集的天山花楸样品，每种样品按照供试品
制备方法值得天山花楸供试品液 3 份，使用前精密吸取贮备
液 1 mL，置于 10 mL量瓶中，加入甲醇稀释至刻度，摇匀，过
0. 45 μm 微孔滤膜滤过，进样分析。采用外标法测定样品，
计算含量，结果见表 3，电泳图见图 2。
表 3 供试品测定结果
编号
采集
时间
芦丁 /
(mg /g)
平均值
/%
RSD
/%
金丝桃苷 /
(mg /g)
平均值
/%
RSD
/%
槲皮素
/(mg /g)
平均
值 /%
RSD
/%
1 2006 0. 101 1 0. 102 2 1. 1 0. 723 1 0. 722 4 0. 45 0. 109 6 0. 110 3 1. 40
0. 102 3 0. 725 3 0. 109 3
0. 103 4 0. 718 9 0. 112 1
2 2007 0. 962 0 0. 97 1. 0 2. 629 5 2. 632 1 0. 20 0. 102 3 0. 103 3 1. 76
0. 981 3 2. 638 1 0. 105 4
0. 966 8 2. 628 7 0. 102 2
3 2008 0. 322 0 0. 324 1 0. 58 0. 725 1 0. 726 8 0. 26 0. 137 1 0. 138 1 0. 93
0. 325 6 0. 726 4 0. 137 8
0. 324 8 0. 728 9 0. 139 6
3 讨论
电泳缓冲液对分离的影响:实验结果表明，在相同实验
条件下，使用 Na2HPO4-NaH2PO4 时，3 种黄酮类成分分离不
好，峰拖尾严重;在 Na2B4O7-NaH2PO4 时，由于黄酮类化合物
在碱性条件下可与硼酸根离子络合从而增加溶解度减少吸
附引起的拖尾，3 种化合物达到基线分离，峰形对称。缓冲液
的酸度和浓度对分离具有明显的影响。3 种黄酮类成分的分
离度随硼砂缓冲液 pH值增加而提高，但当 pH 值过高时，电
流增加过高，基线噪音增加，各峰的保留时间都增加，且出现
拖尾现象，在硼砂浓度为 10 mmol /L，缓冲液 pH8. 3 时，得到
较理想的 CZE分离效果，3 种成分的分离度 R > 1. 5。本实验
还考察 25，20，15，10，5 kV等不同 CZE电压条件对样品分
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离的影响。结果表明，当分离电压低于 15 kV 时，电流减小，
谱峰展宽;电压为 20 kV，电流稳定，分离效果良好;同时柱温
考察结果表明，25 ℃柱温较为理想，大于或小于此温度，各
组分对照品的 CZE峰不能达到完全基线分离。
A 供试品 2 电泳图
B 供试品 3 电泳图
图 2
1. 芦丁 2. 金丝桃苷 3. 槲皮素
通过 CZE分离条件的优化，本实验选择缓冲体系为 10
mmol /L的 Na2B4O7-20 mmol /L 的 NaH2PO4(pH8. 30)，电压
20 kV，柱温 25 ℃的 CZE 分离体系，能得到较理想的分离效
果。
4 结论
本实验在优化的电泳条件下对天山花楸中的黄酮类成
分(芦丁、金丝桃苷及槲皮素)进行了含量测定。结果表明，
不同采集年份的天山花楸中黄酮类成分的含量存在一定的
差异，2007 年采集的天山花楸中金丝桃苷含量最高。采用毛
细管电泳法测定天山花楸中黄酮类成分具有简便、快速、准
确、低耗等特点，适合于天山花楸中黄酮类组分的含量测定。
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藏药川西千里光中黄酮类成分的分离和结构鉴定
杨爱梅， 李笑颜， 李玉兰， 杨中铎， 杨明俊
(兰州理工大学生命科学与工程学院，甘肃 兰州 730050)
收稿日期:2010-04-01
基金项目:甘肃省自然科学基金项目;兰州理工大学优秀青年教师资助计划(Q200808);国家自然基金资助项目(20802031)
作者简介:杨爱梅(1976 －)，女，博士，副教授，主要从事天然药物化学研究。Tel:(0931)2976703。
关键词:千里光属;川西千里光;黄酮苷;分离
摘要:目的:对藏药川西千里光 Senecio solidagineus Hand. -Mazz.全草化学成分进行分离鉴定。方法:利用现代色谱方法
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