全 文 ：药学学报 1 8 (9 ) :7 0 0 ~7 0 4, 1 9 8 3
篇 蓄 中 篇 蓄 试 的 含 量 测 定
价 礼 集 刘 爱 茹
(中国医学科学院药物研究所 , 北京 )
提要 本文介绍了篇蓄草用 80 % 乙醇提取后 , 以薄层色谱法分离出篇蓄贰 , 用库伦滴定法或
紫外分光法进行定量 。 本法操作简单 , 需样量少 , 重现性好 。 测定生药的变异系数约为 2% 。
关键词 库伦滴定法 ; 分光光度法 ; 篇蓄贰 ; 篇蓄
篇蓄为萝科馨属一年生或多年生草本植物 , 有利尿和抑菌作用 ; 一 临床用于治疗泌尿系感
染 、 细菌性痢疾 、 肾炎等疾病 。 中药肾炎丸 、 篇蓄丸皆以篇蓄为主治疗急性或慢性肾炎的药
剂 。
篇蓄的化学成分有篇蓄贰 ( va ic lu ar in) 、 糖 、 少量揉质和微量大黄素 ( ” 。 篇蓄贰为栅皮
素 一 3 一阿拉伯糖贰 , 根据黄酮类结构的特征我们研究了篇蓄贰的库伦滴定法和分光光度测 定
法 。
在研究过程中 , 对生药的提取 、 杂质的分离等条件进行了探索 , 并发现篇蓄中除含有篇
蓄试外尚有其他三个黄酮成分 , 关于这些成分的性质和含量有待进一步探索 。
实 验 部 分
仪器与药品
库伦仪
日本岛律 ;
M e tr o h m 库伦计 E 21 1型 (瑞士 ) 或晶体管库伦计 ; 紫外分光光度计 U V 一 3 0 0 ,
篇蓄贰
析纯 , 北京化工厂 ;
献 ( 2 , 。
m p 20 5~ 8℃ ,薄层检查未发现有杂质点 , 本所植物室提供 ; 澳化钾 分
终点指示 装 置 见 文 i
度吸收
(一 ) 测定方法
1
. 紫外分光光度法 由于黄酮化 合 物
具有 2 一苯基色酮基本结构 , 默基 与 两个芳
香环形成两个较强的共扼系统 , 对紫外光相
应有两个区域的特征吸收 , 因此可作为含量
钡」定的基础 。
吸收曲线 取篇蓄贰纯品以乙醇溶解后
并稀释成适当浓度 , 在紫外分光光度计上作
吸收曲线 , 结果如图 l 。
其吸收峰在 2 2 1 , 2 5 7 和 3 6 5 n m 。 在进行
定量时 , 由于在 2 2 1 n m 和 2 5 7 n m 波 长 测
定千扰因素较多 , 故选择在 3 6 5 n m 波长 进
行定量 。 图 1 篇蓄成紫外吸收光谱
本文于 1 9 8 2 年 5 月 2 1 日收到 。
DOI : 10. 16438 /j . 0513 -4870. 1983. 09. 011
药 学 学 报 7 1 0
标准曲线 精密称取篇蓄贰纯品约 5 m g 于 5 2m l容量瓶中 , 加 95 % 乙醇溶解并稀释至
刻度 , 取 0 . 1 , 0 . 2 , 0 . 3 , 0 . 4 m l 于 s m l 容量瓶中 , 加乙醇至刻度 , 摇匀 , 在 3 6 5 n m 测量
吸收度 , 以浓度~ 吸收度作图成一直线关系 。
2
. 库伦滴定法 根据前报 ` 3) 实验结果 , 黄酮化合物在 5 , 7 一位都带有经基者 , A 环上的
氢容 易为 2 分子澳取代 , 因此篇蓄贰也应可以用库伦法测定 。
( 1 ) 滴定方法 在 H 型 电解池的阳极区放置 8~ 10 m l l M K B r一 Z N H C I一 E t O H ( 1 5 : 1 5 :
10 ) 电解液 , 阴极区加同一电解液使两边液面相等 , 选择适当电流 , 进行空 白电解后在阳极
区加人一定量样品溶液 , 进行电解 , 以死停法确定终点 , 终点时死停终点的检流计指针移动
位置与空白电解相一致时停止电解 , 并记录电解时间与电流强度 , 然后计算 n 值或样品 含
量 。
( 2 ) n 值的测定 按上法取一定量篇蓄贰纯品溶液置于电解池阳极区 , 并发生澳进行滴
定 , 五次测定结果算得 n 值为 3 . 95 士 。 . 03 。
(二 ) 生药提取
1
. 提取方式 称取生药粉末 3 份 , 每份 2 . 0 9 分别置于适当容器中 :
( 1) 加 邪% 乙醇 50 m l , 密塞 , 振摇 10 分钟后室温放置过夜 `
( 2 ) 加 9 5% 乙醇 5 0 m l , 在沸水浴中加热回流 2 小时 。
( 3) 置于改良式提取器中 , 加 95 % 乙醇回流提取 3 小时 。 上述三种提取液经浓缩后取
相同量的浓缩液点于薄层上 , 通过薄层分离后进行测定 , 结果如表 1 。
结果说明冷浸方法提取不完全 , 另两法提取结果比较接近 。
2
. 溶剂选择 黄酮成分多用热水 、 稀醇等溶剂提取 ( 4) , 为此试用了不同浓度的乙醇溶
液以回流法提取 2 小时 , 测得结果如表 2 。
表 1 不同提取方式的测定结果 表 2 不同浓度乙醉的测定结果
提 取 方 式 } 篇 蓄 成 . 含 录 (% ) 乙 醇 浓 度 篇蓄贰含皿 (% )
0
.
0 4 0 0
。
0 39
0
。
1 0 0
0
.
1 0 4
0 95
1 0 3
9 5%
8 0%
5 0%
0
,
10 0 0
.
0 9 5
0
.
12 0 0
.
1 3 0
0
,
1 2 0 0
.
1 2 5
表 2 说明 50 % Et o H 和 80 % Et o H 的结果相近 , 乙醇浓度大于 80 % 者结果偏低 , 但乙
醇浓度低于 80 % 时提取得杂质较多 , 使进行薄层分离增加困难 , 故采用 80 % tE O H 提取为
宜 、
3
. 回流时间 以 80 % E tO H 为溶剂 , 在沸水浴中加热回流不同时间后测定结果 , 如表
3
。
结果表明 , 回流半小时结果偏低 , 回流 、 1 或 2 小时结果基本一致 。
4
。 连续提取 称取一定量生药置于改良式提取器中 , 用 80 % tE 0 H 连续回 流 至 提 尽
(约 4~ 5小时 , 作 T L C 检查证明黄酮已提尽 ) , 然后浓缩为一定体积 , 取一定量经薄层分离
后进行测定 , 结果如表 4 。
结果说明生药用 80 % tE 0 H 在沸水浴中提取效果与连续回流提取效果一致 。
(三 ) 薄层色谱
由于篇蓄提取物中含有大量杂质 , 因此必需去除杂质干扰进行测定 , 在硅胶 G 及聚酞胺
702 药 学 学 报
表 3不同回流时间的测定结果 表 4 生药连续提取的测定结果
回 流 时 l’d e
( h )
篇 蓄 贰 含 量 ( % )取样量 ( m g)测得篇蓄贰 ( m幼 篇蓄戒含量 ( % )
2 0
20
0
.
0 40
0
.
0 3 9
0
。
2 00
0
.
1 30
0
。
2 1 9
0
.
0 1 3
0
.
2 1 9
1 90 7
。
20 0
0
.
0 4 0 O
。
2 00
0
.
2 0 0 3
.
2 0 1
薄层上用不同的溶剂系统进行试验 , 结果表明在硅胶 G 薄层上以氯仿一 甲醇 一 甲 酸 ( 8 : :2
。 . 1) 为展开剂和聚酚胺薄层上以 36 % 乙酸一乙醇 ( 9 : 1 ) 为展开剂皆得到满意的分离效 果 ,
层析后的薄层挥去溶剂后 , 用 5% A I1C 3一 tE 0 H 溶液喷雾 , 烘烤片刻 , 置紫外灯下观察 ,
黄酮化合物显黄绿色荧光斑点 , 结果如图 2 , 3 。
价自:?.只ó。之00孚u弓心。
八éùb
乃jt ,八éà。=COa
图 2 聚酞胺薄层
a
. 提取液 b 篇蓄成
图 3 硅胶 G 薄层
a
. 提取液 b . 篇蓄武
进行定量时用聚酞胺薄层法 , 则不用喷显色剂可直接在紫外灯下进行观察 , 篇蓄贰显示
暗黑色点 。
(四 ) 回收试验
称取篇蓄贰纯品配成一定浓度的甲醇溶液 , 和生药提取液一起分别用微量注射器吸取一
定量点于聚酚胺薄层上 , 点成条状 , 经分离后取出 , 挥去溶剂 , 在紫外灯下划出篇蓄试位
置 , 用刀片将篇蓄贰色带上的聚酞胺仔细刮人具塞磨口试管中 , 加一定量乙醇 , 振摇后 置
7 0
O
C水浴热浸后 , 离心 , 取上清液测定 , 结果如表 5 。
表 乒 薄 层 分 离 回 收 率
一半翌江竺一户月一尘牛二共毕井
-一共兰一件兰斗里一井逻一{止牛`回 “ 率 `% ’ 卜兰上岑一匕鉴土二匕i : : 平 均 , 9 .72
药 学 学 报
(五 ) 生药的分析
准确称取生药粉末 9 2于具塞蘑口三角瓶中 , 准确加人 80 % tE 0 H 50 m l , 称重 , 连接
冷凝器置沸水浴中加热回流 1 小时 , 取下三角瓶擦干 , 放冷后称重并补充失去的溶剂 , 密塞
放置待澄清后吸取上清液 2 5 . 0 m l , 浓缩近干 , 用少量乙醇溶解并定量转移人 5 m l 容 量 瓶
中 , 稀释至刻度 。 取此液 10 川 点于聚酞胺薄层上 , 点成条状 , 用 36 % 乙酸一 95 % 乙 醇
( 9 : 1 ) 展开后挥去溶剂 , 在紫外灯下观察色带并画出篇蓄贰位置 , 以作定量 :
( 1) 紫外分光光度法 用刀片刮下薄层上含篇蓄武的聚酚胺于 5 m l具塞刻度试管 中 ,加
乙醇 5 m l , 摇匀 , 塞紧并于 70 ℃水浴放置 20 分钟 (振摇 2 次 ) , 取出 , 冷却后再离心 10 分
用滴管小心吸取上清液 ; 以薄层上空白聚酸胺同样处理作对照 , 在 3 6 5 n m 测 量 吸 收
从标准曲线计算含量 。
锹鹿
( 2) 库伦滴定法 将薄层上含篇蓄贰的聚酸胺刮下倾入经空白电解后的电解池阳极区 ,
进行电解并同时记录时间 , 由下式计算含量 :
含量% = 1
.
t
·
1
.
1 2 5 x 1 0一 3
W
X 1 0 0
i = 电解电流 (m A )
W = 点于薄层上样品量 (m g)
表 6 分光法与库伦法测定结果
t 二 电解时间 ( s)
篇 蓄 试 含 量 (% )狈」定 次 数
量 ,
(六 )
0
.
1 9 7
0
.
2 0 1
0
.
1 9 4
0
。
1 9 5
0
。
2 0 6
0
。
2 0 7
0
.
2 0 9
0
.
2 00
0
.
2 01
0
.
19 8
0
。
19 7
0
.
2 03
0
。
2 0 6
0
.
19 1
0
.
2 0 2
应用上述方法测定篇蓄生药中篇蓄试的含
其结果如表 6 。
讨论
1
. 用 95 % 乙醇提取生药 , 提取物中含杂j工20口J任一ó舟O厅l吕O曰
变异系数
0
.
2 0 1
0
.
0 0 49
2
.
4%
0
.
1 99
0
.
0 0 4 3
2
.
2%
质较少 。 但提取篇蓄贰不完全 , 而用 50 % tE O H
提取则杂质多 , 故采用 80 % 乙醇比较满意 。
·
2
. 生药提取物在硅胶 G 薄层上分离虽好 ,
但不易洗脱 ; 在聚酚胺薄层上不但易于洗脱而
且不需喷显色剂 , 可直接在紫外灯下观察斑点
位置 。
3
. 篇蓄提取物经薄层分 离 后 可 以 观 察
4 个黄酮成分斑点 , 其中之一为篇蓄贰 , 其它
成分有待进一步研究 。
4
. 用紫外分光法和库伦法测定 篇 蓄贰含
量结果一致 , 因此两法皆可应用 。
参 考 文 献
1
. 《全国中草药汇编》 编写组 : 全国中草药汇编 (上册 ) , 第 83 4 页 , 人民卫生出版社 , 北京 , 1 9 7 5
2
. 徐礼巢等 : 大豆贰元的库伦滴定 . 药学学报 14 : 3 5 , 1 9 7 9
3
. 徐礼桑等 : 黄酮类化合物库伦滴定法 . 同上 16 : 1 3 2 , 1 9 81
4
. 中国医学科学院药物研究所 : 中草药有效成分的研究 (第一分册 ) , 第 2 2 页 , 人民卫生出版社 , 北京 , 1 9 72
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D E T E R M I N A T I O N O F
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K e y w o r d s C o u l o m e t r y : S P e e t r o P h o t o m e t r y ; A v i e u l a r i n ; OP l y g
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