全 文 ：分光光度法测定萹蓄中总黄酮的含量
冯海燕，胡瑞省，任 蕾，赵 威
（石家庄学院 化工学院，河北 石家庄 050035）
摘 要：考察了不同显色剂对分光光度法测定萹蓄总黄酮的影响.实验以三氯化铝作为显色剂，
在 418 nm 波长处，测得萹蓄中总黄酮含量为 12.012 mg/g，回收率为 102.1%. 该方法简便、快捷、准
确、重现性好，可用于萹蓄中总黄酮含量的测定.
关键词：萹蓄；总黄酮；分光光度法
中图分类号:O657.32 文献标识码：A 文章编号：1673-1972（2011）06-0020-03
萹蓄为蓼科蓼属植物萹蓄（polygonum aviculare L.）的干燥地上部分，为常用中药，全国大部分地区均产.
萹蓄苦，微寒，归膀胱经，具有利尿通淋，杀虫止痒之功效，主治膀胱热淋，小便短赤，皮肤湿疹，阴痒带下等
症[1]. 研究表明黄酮类化合物为萹蓄的主要活性成分 [2]，其含量高低直接与药用价值相关. 目前对萹蓄中总
黄酮的测定主要采用硝酸铝比色法[3～5]，该法专属性不强[6]，且实验中发现萹蓄提取液经该法显色后出现红色
絮状沉淀，不利于吸光度的测定. 笔者建立了萹蓄总黄酮含量的三氯化铝比色测定法，旨在为该中药的开发
利用及黄酮的质量控制提供一种简单、快速、准确的测定方法.
1 仪器和试剂
1.1 仪器
UV/VIS-916紫外分光光度计（澳大利亚 GBC 科学器材有限公司）；KQ-250DE 数控超声波清洗器（昆山
市超声仪器有限公司）；SHZ-D（Ⅲ）循环水式真空泵（巩义市予华仪器有限责任公司）；RE-2000 旋转蒸发仪
（上海亚荣生化仪器厂）.
1.2 试剂
芦丁（中国药品生物制品检定所）；甲醇、乙醇、硝酸铝、亚硝酸钠、氢氧化钠、三氯化铝均为国产分析纯；
萹蓄购于河北祁新中药颗粒饮片有限公司.
2 方法和结果
2.1 对照品溶液的制备
准确称取在 120℃干燥至恒重的芦丁 8.8 mg 于小烧杯中，加无水甲醇 15 mL，溶解，将溶液移至 100 mL
容量瓶中并以无水甲醇定容，摇匀备用.
2.2 供试品溶液的制备
采用正交试验法优化了萹蓄总黄酮的超声波提取工艺，按最佳提取条件进行提取. 精密称取萹蓄干粉
约 5 g，加入 90%乙醇 125 mL，在温度 45℃，超声功率 200 W 的条件下超声萃取 25 min. 萃取液减压过滤，用
90%乙醇定容于 250 mL容量瓶中，备用.
2.3 显色试剂的选择
实验考察了硝酸铝显色和氯化铝显色两种显色体系对吸光度测定的影响.
硝酸铝显色法 [3～5]：精密吸取芦丁对照品溶液 1.0 mL 和萹蓄提取液 2 mL，分别置于 25 mL 容量瓶中，各
收稿日期：2011-09-06
基金项目：河北省科技支撑计划（10212144）；石家庄市科学技术研究与发展指导计划（09120851）；石家庄学院 2009 年博士科研启动基金
作者简介：冯海燕（1974-），女，河北保定人，副教授，博士，主要从事中药成分的色谱研究.

300 350 400 450 500 550 600 650 700 750
0.0
0.1
0.2
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0.4
0.5
0.6
nm
A
???
A
λ（nm）
第 13 卷 第 6 期 石家庄学院学报 Vol.13，No.6
2011 年 11 月 Journal of Shijiazhuang University Nov.2011
DOI:10.13573/j.cnki.sjzxyxb.2011.06.008
加水至 6 mL，加 5%亚硝酸钠溶液 1.0 mL，混匀，放置 6 min，加 10%的硝酸铝溶液 1.0 mL，混匀，放置 6 min，
加 1 mol/L的氢氧化钠 10 mL，再加水至刻度，摇匀，15 min 后以试剂空白作参比，在 350～700 nm 范围内扫描
测定吸收光谱.
氯化铝显色法：分别取芦丁对照品溶液 1.0 mL、萹蓄提取液 2 mL 于 2 个 25 mL 容量瓶中，加 0.1 mol/L
的三氯化铝溶液 5 mL，再加水至刻度，摇匀，放置 15 min. 以试剂空白作参比，在 350～700 nm 范围内进行扫
描分析.
比较上述两种显色方法，用 Al（NO3）3-NaNO2-NaOH 显色后，溶液中明显有红色絮状沉淀生成，该实验
现象在文献[7，8]中也有报导. 这可能是萹蓄中的原花色素类物质在碱性介质中与铝离子形成的络合物沉淀 [8]，
该沉淀的存在直接影响到测定结果的准确性和稳定性，此法不宜采用；而用 A1C13显色后，溶液澄清无悬浮
物，吸光度测定值稳定性好，故实验以 0.1 mol/L A1C13溶液作为显色体系.
2.4 测定波长的选择
图 1 和图 2 分别为为芦丁对照品溶液和样品提取液经 0.1 mol/L A1C13溶液显色后的吸收光谱. 芦丁对
照品的最大吸收波长为 421 nm，样品提取液的最大吸收波长为 418 nm，实验选择 A1C13显色后在 418 nm 波
长处测定吸光度.
2.5 标准曲线的绘制
精密吸取芦丁对照品溶液 1.0，2.0，3.0、4.0，5.0，
6.0 mL 分别置于 25 mL 容量瓶中 ， 各加 0.1 mol/L
A1C13溶液 5 mL，再加水至刻度，摇匀，放置 15 min，
以相应试剂作参比，于 418 nm 处测定吸光度. 以吸光
度 A 为纵坐标，芦丁浓度 c 为横坐标，绘制标准曲线
（见图 3），求得回归方程 A=0.443 0c-0.067 8，r=0.999 2.
结果表明在 3.52～21.12 μg/mL 的范围内，芦丁含量与
吸光度呈良好线性关系.
2.6 方法学考察
2.6.1 精密度试验
对同一份供试液， 按标准曲线制备方法显色，在
418 nm 处连续测定 5 次， 以吸光度值计算 RSD 为
0.50%，说明仪器精密度满足含量测定要求.
2.6.2 稳定性试验
对同一份供试液，按标准曲线制备方法显色，分别于 0，10，20，30，40，50和 60 min进行测定，RSD为 0.25%，
表明供试液显色后 1 h内稳定性良好.

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0.1
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A
???
A
λ（nm）
图 1 芦丁标准溶液的吸收光谱 图 2 萹蓄样品溶液的吸收光谱
图 3 标准曲线图

300 350 400 450 500 550 600 650 700 750
0.1
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0.5
0.6
0.7
nm
A
???
A
λ（ ）

0.3 0.6 0.9 1.2 1.5 1.8 2.1
0.0
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0.4
0.6
0.8
1.0
A
c（10-2 mg/mL）
A
第 6 期 冯海燕，胡瑞省，任 蕾，等：分光光度法测定萹蓄中总黄酮的含量 21
2.6.3 重现性试验
按 2.2 项平行制备 3 份供试液，按标准曲线制备方法显色及测定吸光度，RSD 为 1.02%，表明该方法重
现性较好.
2.6.4 加样回收率试验
向已知含量的 3份萹蓄样品中加入不同量的芦丁对照品，按样品测定方法操作，计算回收率. 平均回收
率为 102.1%，表明所建方法准确可靠.
2.7 样品测定
取制备好的 3份供试品溶液各 1 mL，按标准曲线制备方法显色，测定吸光度，并根据标准曲线计算总黄
酮含量.实验得出萹蓄中总黄酮的平均含量为 12.012 mg/g，与相关文献比较测定含量相符.
3 讨论和结论
1）采用硝酸铝显色法测定萹蓄总黄酮的文献中，无红色絮状沉淀生成的报导，可能与不同产地萹蓄中
原花色素类物质含量不同有关，具体原因有待进一步研究.
2）与参考文献相比，本实验中三氯化铝显色法未进行水浴加热，因为实际测定两者差异不大，不进行水
浴加热可减少测定步骤，减小误差.
3）笔者提出了测定萹蓄总黄酮含量的三氯化铝显色分光光度法. 对于所研究萹蓄，三氯化铝显色法的
测定准确度明显高于硝酸铝显色法，前者显色后无红色絮状沉淀，不会对吸光度的测定产生干扰，而且显色
时间缩短，无需水浴加热，操作简单方便，是分光光度法测定萹蓄总黄酮含量的合适显色体系，将其用于萹
蓄的质量控制，切实可行.
参考文献：
[1]江苏新医学院.中药大辞典[M].上海：上海科学技术出版社，1977：2 329．
[2]赵爱华，赵勤实，林中文，等．萹蓄的化学成分研究[J]．天然产物研究与开发，2002，14（5）：29-32．
[3]海平，苏雅乐．萹蓄及其炮制品总黄酮含量及抗氧化性测定[J]．中国民族民间医药，2008，(12)：3-6．
[4]黄文波，蔡元菊，饶光福．扁蓄总黄酮提取方法的比较研究[J]．现代生物医学进展，2008，8（6）：1 078-1 080．
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[7]张秀梅，曾祖平，王永红．柿叶总黄酮提取工艺的研究[J]．时珍国医国药，2008，19（1）：35-36．
[8]刘江雏，周荣琪．竹叶提取物总黄酮含量测定方法的改进[J]．食品科技，2005，（7）：76-79．
（ 责任编辑 李健飞）
Determination of Total Flavonoids in Polygonum Aviculare by
Spectrophotometry
FENG Hai-yan，HU Rui-sheng，REN Lei，ZHAO Wei
（School of Chemical Engineering，Shijiazhuang University，Shijiazhuang，Hebei 050035，China）
Abstract：Effect of different developers on the determination of total flavonoids in Polygonum aviculare was
explored. The flavonoids were developed with A1C13 and determined by UV-vis spectrophotometry at 418nm．
The results showed that the total flavonoids content in samples was 12.012mg/g. The average recovery of the
standard substance was 102.1%． The method is simple，rapid，accurate and has good reproducibility，which can be
used to determine the content of total flavonoids in Polygonum aviculare.
Key words：polygonum aviculare；total flavonoids；spectrophotometry
石家庄学院学报 2011 年 11 月22