全 文 ：中国民族民间医药
Chinese journal of ethnomedicine and ethnopharmacy
萹蓄及其炮制品总黄酮含量及抗氧化性测定
海 平 1 苏雅乐 2
1．内蒙古民族大学化学学院， 内蒙古 通辽 028043； 2．内蒙古民族大学农学院， 内蒙古 通辽 028043
【摘 要】： 通过微型化学实验法 （恒压分液漏斗） 提取萹蓄及其牛、 羊奶炮制品中总黄酮含量。 对所提取的黄酮类进
行验证， 用分光光度法测定含量， 并对其抗氧化性 （对羟基自由基清除作用、 对超氧阴离子清除作用） 进行研究。 结果表
明： 总黄酮含量羊奶炮制品＞牛奶炮制品＞萹蓄生药； 抗氧化性萹蓄生药＞牛奶炮制品＞羊奶炮制品。 回收率在 90．4％～100．4％
之间， RSD 在 0．55～1．51 之间。
【关键词】： 萹蓄 炮制 总黄酮 抗氧化性
【中图分类号】 R927．2 【文献标识码】 B 【文章编号】 1007－8517 （2008） 12－0003－04
Measuring of the total flavonoid content and anti－oxidation in polygonum aviculare and its
processing products
Abstract： we extracted the total flavonoid content in polygonum aviculare and its milk and goat milk processing products
through microche mistry experimental method (constant pressure funnels) ,and tested the flavonoid extracted and measured its con-
tent by spectrophotometer,at the same time, we studied its anti －oxidation． The result are as the following: The content of total
flavonoids in goat milk processing product ＞milk processing product ＞raw medicine of polygonum aviculare;Anti －oxidation of raw
medicine of polygonum aviculare ＞milk processing product ＞goat milk processing product．The recovery rate is among in 90．4％－
102．24％,and RSD is within in 0．55％～1．51％．
Key wards: polygonum aviculare; processing; The total flavonoids; Anti－oxidation
萹蓄又称畜辩、 粉节草、 扁竹蓼等， 蓼科植
物。 其干燥的地上部分可以入药， 味苦， 微寒。
具有利尿通淋， 杀虫， 止痒的功能。 用于膀胱热
淋， 小便短赤， 淋沥涩痛， 皮肤湿疹， 阴痒带下
等症 [1]。 研究表明， 其全草含萹蓄苷、 槲皮苷、
槲皮素、 以及多种有机酸、 糖类、 微量大黄素、
维生素粘质等主要成分 [2]。 蒙药历来非常重视对
药材的炮制， 有其独特的加工炮制方法， 根据疾
病的性质对药材进行炮制， 对一种药材有多种炮
制方法。 黄酮类化合物是一类在自然界广泛存在
的多酚类天然产物， 具有抵御紫外线、 抗菌免疫、
抗氧化、 抗艾滋病毒、 抗肿瘤等多方面生理和药
物活性 [3]。 从这个意义上讲， 对具有生理活性的
黄酮类化合物研究是非常有价值的。 本实验采用
微型化学实验法 （恒压分液漏斗）[4，5]提取萹蓄及其
牛奶、 羊奶炮制品中总黄酮， 用分光光度法测定
其含量， 并进行抗氧化性研究。 为研制出疗效高、
毒性小、 成本低、 易生产推广的绿色蒙药产品，
绿色新医疗技术提供科学依据。
1 仪器、 试剂、 材料
1．1 仪器： 721 可见分光光度计 （上海第三仪器
厂）； ZF－70D 暗箱式紫外分析仪 （上海顾村电光
仪器厂）； 恒压分液漏斗； 电子天平。
1．2 试剂： 95％乙醇； 亚硝酸钠； 硝酸铝； 芦丁
（中国药品生物制品鉴定所）。
1．3 材料： 萹蓄； 牛奶； 羊奶。
2 总黄酮的提取及含量测定
2．1 总黄酮的提取－微型化学实验法
取少许棉花沾取乙醇放置恒压分液漏斗底部，
然后在恒压分液漏斗内加入 1g 萹蓄， 再倒入 12ml
乙醇， 在圆底烧瓶内加入几粒沸石， 安装仪器。
旋开恒压分液漏斗活塞， 让漏斗内乙醇慢慢流下，
当乙醇液面与萹蓄面接近时， 关闭活塞， 通入冷
凝水， 然后用电热套加热， 当乙醇沸腾后， 调节
电热套的高度， 以使冷凝管内上升的乙醇气流不
超过冷凝管长度的三分之一， 缓慢滴下为好。 当
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看到烧瓶内乙醇量较少时， 旋开恒压分液漏斗活
塞放下乙醇， 当下降的乙醇液面与萹蓄液面接近
时， 关闭活塞， 大约每隔 2～3min 放一次乙醇， 如
此连续提取至乙醇提取液为无色为止， 大约需要 1
个小时。 将提取液过虑， 再转移到 50ml容量瓶中，
用 95％乙醇稀释至刻度， 得样品液。
2．2 测定方法
分别取适量样品液置于 10．00ml 比色管中， 加
水至 2．4ml， 加 5％亚硝酸钠溶液 0．4ml， 摇匀， 放
置 6min， 加 10％硝酸铝溶液 0．4ml， 摇匀， 放置
6min， 加 4．3％氢氧化钠溶液 4．0ml， 用水稀释至刻
度。 摇匀， 放置 15min， 以试剂空白作参比， 用
721 型分光光度计在可见光区内全波扫描 ， 在
506nm 处有最大吸收峰， 因此， 选择 506nm 为测
定波长。
2．3 标准溶液的制备
准确称取芦丁标准品 12．50mg 放置 50ml 容量
瓶中 ， 加水稀释至刻度 ， 得到芦丁标准溶液
(0．25mg ／ ml)。
2．4 标准曲线的绘制
分别准确移取芦丁标准溶液 （0．25mg ／ ml）
0．00、 0．50、 1．00、 1．50、 2．00ml 于 10．00ml 比色管
中， 按 2．2 测法测定， 得出线性回归方程为： A＝
0．035＋1．341C (mg ／ 10ml) ,R＝0．99997。
2．5 稳定性实验
准确吸取卢丁标准溶液 2．00ml， 按 2．2 测定方
法操作， 配制溶液， 以试剂空白作参比， 在 506nm
处测定吸光度， 按时间扫描的操作方法对时间进
行扫描， 结果表明在 5min～4h内吸光度稳定。
2．6 样品中总黄酮的含量测定
准确吸取样品液 0．80ml， 5 份， 置 10．00ml 比
色管中， 按 2．2 测定方法在 506nm 处测定吸光度，
以试剂空白作参比 ， 根据回归方程 ： A＝0．035＋
1．341C 计算生药、 牛奶炮制品及羊奶炮制品中总
黄酮的含量， 测定结果见表 1。
2．7 回收率实验
表 1 萹蓄及其牛、 羊奶炮制品总黄酮含量 （％） n＝5
Table 1 Health－ Polygonum aviculare has the total flavonoid content (％) n ＝ 5
分别准确移取萹蓄生药、 牛、 羊奶炮制样品
液 0．40ml， 5 份， 分别加入卢丁标准溶液 0．25ml，
按 2．2 测定方法操作测定吸光度， 测定结果见表
2。
2．8 定性实验－总黄酮的鉴别
颜色反应： ①浓氨水反应： 取各样品溶液点
在滤纸上， 将滤纸在氨水上放熏 0．5min 立即在紫
外灯下观察， 呈极明显的灰褐色斑点， 示有黄铜
类化合物。 ②三氯化铝反应： 取各样品溶液点在
滤纸上， 滴加 1％三氯化铝乙醇溶液， 吹干。 在可
见光下呈灰黄色， 在紫外光下呈黄褐色荧光斑点。
③盐酸－镁粉反应： 取乙醇提取液 1ml 于试管中加
镁粉， 再加入浓盐酸数滴 （1 次加入）， 在泡沫处
呈紫外红色， 示有黄铜醇、 二氢黄铜纯等黄铜类
化合物存在。
3 抗氧化性的研究
3．1 对羟基自由基的清除作用 [6， 7]
羟基自由基最活泼， 反应速率极快， 它是对
机体危害最大的自由基。 利用 Fenton 反应产生羟
基自由基： H2O2＋Fe2＋＝·OH＋OHˉ＋Fe3＋， 通过 Fe2＋与
邻二氮菲生成红色配合物， 加入提取液后， 减弱
了·OH 对 Fe2＋ ／邻二氮菲的氧化作用， 引起吸广度
的变化来检测自由基的清除情况。
取 3 支 10ml 比色管 ， 分别加入 7．5mmol ／ L
邻二氮菲溶液 0．2ml， 加入 7．5mmol ／ L 硫酸亚铁铵
溶 液 0．2ml， 加 入 pH ＝7．47Tris －HCl 缓 冲 溶 液
1．0ml， 在 2、 3 号 比 色 管 中 加 入 7．5mmol ／ L
H2O21．0ml， 在 3 号比色管中加入 1．0ml 黄酮提取
液， 用二次水定容至刻度， 在 37℃水浴中反应 1h，
冷水冷却， 以水为参比， 在紫外分光仪上测其最
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大吸收波长在 508nm。 以萹蓄生药、 牛、 羊奶炮制
品液重复上述操作， 在 508nm 处测定吸光度， 计
算清除率 （P）。
P＝ （A1－A2） ／ （A3－A2） ×100％
式中 A1、 A2、 A3 分别为不加 H2O2、 加入 H2O2
及加入提取液的羟基自由基体系的吸光度值。 测
定结果见表 3。
3．2 对超氧阴离子自由基清除作用 [8， 9]
超氧阴离子自由基是生命代谢过程中产生的
一种重要的自由基， 具有很强的氧化能力， 因此
把对其的清除能力作为抗氧化物质活性的一个重
要指标。
表 2 萹蓄及其牛、 羊奶炮制品总黄酮的回收率实验 （％） n＝5
Table2 Polygonum aviculare of Health has the recovery of total flavonoids （％） n ＝ 5
表 3 萹蓄及其牛、 羊奶炮制品总黄酮对羟基自由基的清除率 （％） n＝5
Table 3 Has a health－ Polygonum aviculare of flavonoids on the hydroxyl radicalclearancerate (％) n ＝ 5
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取 3 支 10ml 比色管， 分别加入 pH＝8．3Tris－
HCl 缓冲溶液 4．4mL， 在 25℃水浴中恒温 20min，
在 1、 2 号比色管中加入适量黄酮的提取液， 在 2、
3号比色管中加入 0．2mmol ／ L 邻苯三酚溶液 0．5mL，
将 3 支比色管混匀， 在 25℃水浴中恒温 4min， 取
出后在各管中加入 8mol ／ LHCl 3 滴， 混匀。 以水
为参比， 在紫外分光仪上测得在 530nm 处有最大
吸收。 以萹蓄生药、 牛、 羊奶炮制品提取液重复
上述操作， 在 530nm 处测定吸光度， 计算清除率
（P）。
表 4 萹蓄及其牛、 羊奶炮制品总黄酮对超氧阴离子的清除率 （％） n＝5
Table 4 Has a health－ Polygonum aviculare of flavonoids on superoxide the clearance rate (％) n ＝ 5
P＝ [A1－ (A2－A3)] ／ A1×100％
式中 A1、 A2、 A3 分别为不加入提取液体系、
加入提取液不加邻苯三酚溶液体系、 加入提取液
和邻苯三酚溶液体系的吸光度值。 测定结果见表
4。
4 结论与讨论
4．1 结论
总黄酮含量羊奶炮制品＞牛奶炮制品＞萹蓄生
药； 抗氧化性萹蓄生药＞牛奶炮制品＞羊奶炮制品。
回收率在 102．4％～90．4％之间 ， RSD 在 0．55～1．51
之间。
4．2 讨论
实验结果显示， 牛、 羊奶炮制可明显提高萹
蓄总黄酮含量， 但对羟基自由基的清除率和对超
氧阴离子自由基清除作用明显减少。 因此， 对萹
蓄及其牛、 羊奶总黄酮含量的分析及其抗氧化性
的研究对了解蒙药萹蓄的合理开发奠定了基础。
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（收稿日期： 2008．11．8）
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