全 文 ：湖北中医杂志 2016 年 4 月第 38 卷第 4 期
Hubei Journal of TCM APＲ． 2016． Vol． 38，No． 4
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“以痛为输”和“阿是穴”是传统针灸的重要概念术语，
阿是穴源出《备急千金要方》［4］:“有阿是之法，言人有
病痛即令捏其上，若果当其处，不问孔穴，即得便快成
(或)痛处，即云阿是。灸刺皆验，故曰阿是穴也。”从这
个定义来看，阿是穴的内涵如下:(1)阿是穴与“病痛”
相依附而存在，因此是一种病理现象，不具有运行气
血、濡养筋骨等生理作用，这一点与经穴迥异。(2)阿
是穴的主要检出方法是切(触)诊，包括“按”和“捏”。
(3)阿是穴的判定标准有二:“快”和“痛”。“快”［5］又
可分为“按其处，应在中而痛解”(按压时疼痛，但按压
后疼痛缓解或消失)和“按之快然”(按压时患者不感觉
疼痛反而感觉舒服)两种情形。(4)对阿是穴的干预方
法包括灸疗和针刺。
本研究采用了随机、对照的研究方法，对各研究中
心的操作人员进行规范统一的培训，设计专门的表格，
以患者腰痛的评分以及腰椎活动度为评价指标，对电
针阿是穴配合傍针刺法和口服药物进行疗效对照研
究。通过统计分析分别检验两组第 1 疗程后和第 2 疗
程后的差异性可以发现，电针阿是穴配合傍针刺法治
疗急性腰扭伤与口服莫比相比，两组均能有效降低患
者的疼痛程度及改善腰椎活动度，都能有效提高急性
腰扭伤患者的整体疗效，但电针阿是穴配合傍针刺法
起效更快，具有较好的近期和远期疗效。且阿是穴配
合傍针刺法穴简效优，安全性高，患者痛苦小，从而提
高了依从性，具有操作过程容易达到规范化控制以及
容易在临床中推广应用等优势。
参考文献:
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104．
(收稿日期:2015 －12 －22)
·药学研究·
正交试验法优选金森女贞花总黄酮提取工艺
程鹏1，向艳华2，何先元1，2* ，谭开英2，陈飞2，黄英如1，2
(1．重庆医科大学实验管理中心，重庆 400046;2．重庆医科大学中医药学院，重庆 400046)
基金项目:国家自然科学基金项目(项目编号:81373668);重庆市卫生局科技项目(项目编号:2012 － 2 － 144)。
* 通讯作者:何先元 (1963 －)，男，重庆医科大学教授，研究方向:中药资源开发利用及中药材 GAP研究，E － mail:
hxy9418@ 126． com。
关键词:金森女贞;总黄酮;提取工艺;正交试验
中图分类号:Ｒ284． 2 文献标识码:A 文章编号 1000 － 0704(2016)04 － 0069 － 04
黄酮类化合物广泛存在于植物界，是许多中草药
的有效成分，药理研究表明黄酮类化合物具有多种生
物活性，因此黄酮类化合物的作用引起了人们的重视，
对这类化合物的研究已成为热门研究课题。黄酮类化
合物具有治疗糖尿病的作用，主要通过抗氧化、抗炎等
机制而起到保护胰岛 β 细胞的作用和刺激胰岛素释
放、增加胰岛素敏感性、抑制 α －糖苷酶、增加外周糖的
利用等机制而起到降低血糖的作用，这些药理机制的
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发现为黄酮类化合物在医药、食品等领域的应用提供
了理论依据，从而加快了黄酮类化合物的开发利
用［1 － 2］。目前，植物中总黄酮的提取方法有水提取法、
有机溶剂提取法、超声波提取法、超滤法、超临界提取
法、微波提取法等。如今，对其提取工艺不断趋于成熟
化研究，近年来对总黄酮提取工艺的研究向着提高提
取速率，操作简便、提取率高、准确、快速、环境友好等
方面发展。
木犀科金森女贞 Ligustrum japonicum thunb．属大型
常绿灌木［3 － 4］，别名:日本女贞、哈娃蒂女贞。金森女
贞长势强健，萌发力强;对病虫害，火灾，煤烟，风雪等
有较强的抗性;是非常好的自然式园艺绿篱植物，原产
日本，我国各地有栽培，花期 3 － 5 月份。目前，金森女
贞主要作为园林观赏植物应用，金森女贞花中的总黄
酮含量和和提取工艺还未见报道［5 － 7］。本研究以花中
的总黄酮含量为考察指标，采用正交试验表 L9(34)进
行实验，对提取过程中的乙醇浓度、提取时间、提取次
数及料液比 4 个影响因素进行研究，以期优选出金森
女贞花中黄酮的最优提取工艺，为进一步综合开发利
用金森女贞提供理论依据。
1 仪器与材料
1． 1 仪器与试剂
UV －1200 型紫外分光光度计(上海美谱达仪器有
限公司提供);HH － 4 数显恒温水浴锅(江苏省金坛市
荣华仪器制造有限公司提供);SH2 － D(III)循环式真
空泵(巩义市予华仪器有限责任公司提供);ＲE － 52A
型旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂提供);粉碎机(浙
江省温岭市大鹏机械有限公司提供);芦丁对照品(纯
度 98%，北京德威钠生物技术有限公司提供，批号:
130507);无水乙醇、盐酸、亚硝酸钠、三氯化铝、硝酸
铝、氢氧化钠等试剂均为分析纯(重庆川东化工有限公
司提供);实验用水为蒸馏水。
1． 2 实验材料
原料:金森女贞花，2014 年 5 月 7 日采集于重庆医
科大学校园花坛(经重庆医科大学中医药学院生药学
费曜副教授鉴定)，实验材料采回后在实验室 50°干燥，
将干燥的金森女贞花用粉碎机粉碎，过 3 号筛，备用。
2 结果与分析
2． 1 定性实验
盐酸 －镁粉反应:取 2mL乙醇待测液于试管中，加
少量镁粉，再加 3 － 4 滴浓盐酸，摇匀试管，观察试管内
颜色变化，呈紫红色。
三氯化铁实验:取 2mL乙醇待测液于试管中，加入
2%三氯化铁溶液 3 － 4 滴，摇匀后观察颜色变化，溶液
变为暗绿色。
NaOH实验:取 2mL 乙醇待测液于试管中，加入
10%NaOH溶液 3 － 4 滴，摇匀后观察颜色变化，溶液变
为橙黄色，并有少量沉淀生成。通过上述 3 个定性实
验证明黄荆叶中含有黄酮类物质。
2． 2 芦丁标准液的制备
精密称取在 105℃ 烘干至恒重的芦丁对照品
25mg，置 50mL量瓶中，加 70%乙醇适量。置 80℃水浴
中加热使其溶解，并稀释至刻度，摇匀．即得每 l mL 含
无水芦丁 0． 5mg的芦丁标准品溶液。
2． 3 供试品溶液的制备
精密称取金森女贞花粉末 1g，置具塞锥形瓶中，精
密加入 70%乙醇 40mL，60℃水浴回流提取 2 次，每次
1． 5h ，滤过，滤液合并，水浴蒸干，残渣加适量 70%乙
醇溶解转移至 50 mL量瓶中，加 70%乙醇定容至刻度，
即得金森女贞花溶液。
2． 4 测定波长的选择
取芦丁标准溶液，金森女贞花溶液，70%乙醇各取
1 mL，先分别加入 5% NaNO2溶液 0． 5mL，摇匀，放置 6
min后，分别加入浓度 10% Al(NO3)3溶液 0． 5 mL，摇
匀，再放置 6 min后，再分别加入 4% NaOH 溶液 5 mL，
摇匀，放置 15 min后，采用 70%乙醇为空白对照，将显
色后的溶液用 1 cm比色皿在波长 400 － 700nm区间扫
描，测得最大吸收波长 509． 9nm，因此确定 510 nm为金
森女贞花总黄酮测定波长。
2． 5 标准曲线的绘制
精密移取芦丁准溶液 0、1、2、4、6、8、10mL，分别加
入 70%乙醇至 20mL，在选定的最大吸收波长处测定吸
光度，进行线性回归分析得标准回归方程，以芦丁浓度
(C)为横坐标，平均吸光度(A)为纵坐标绘制芦丁标准
曲线。获得标准曲线回归方程为 A = 1． 7718C －
0． 0185，A 为吸光度，C 为浓度(mg /mL)，线性相关系
数 r = 0． 9964，线性范围 0． 00 － 1． 60mg /mL。线性关系
良好，可作为金森女贞总黄酮得率的测定方法。
2． 6 精密度实验
准确称取芦丁标准液 1mL，显色后连续 6 次测定
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溶液的吸光度，计算其得率，考察其精密度，结果显示，
ＲSD =1． 032%(n = 6)，表明仪器精密度良好。
2． 7 稳定性实验
将上述 2． 8 中处理后溶液其中一份分别于 0、15、
30、45、60min 测定吸光度，考察其稳定性，结果显示，
ＲSD =1． 163%(n = 5)，表明芦丁与铝离子形成的红色
络合物在 60 min内稳定。
2． 8 单因素试验结果
选取乙醇浓度、提取时间、固液比和提取温度 4 个
可能影响提取效果的因素做单因素试验。在考察某一
因素对金森女贞花总黄酮得率的影响时，其他因素及
水平保持一致。
2． 8． 1 乙醇浓度的影响:精密称取金森女贞花粉末 4
份，每份 1g，分别置具塞锥形瓶中，4 组加入的乙醇浓
度分别为 50%、60%、70%、80%，各组加入的乙醇均为
40mL，60℃水浴回流提取 2 次，每次 1． 5h，滤过，滤液
合并，水浴蒸干，残渣加适量 70% 乙醇溶解转移至
50mL量瓶中，加 70%乙醇定容至刻度，即得到不同乙
醇浓度处理后的待测金森女贞花溶液。分别取上述待
测溶液 1mL，进行显色测其吸光度。结果如图 1 － a 所
示，随着乙醇溶度的增加，金森女贞的总黄酮提取率升
高，到达 60%时，达到最高，但随着溶度的继续增加，提
取率反而降低，故 60%乙醇为最佳提取溶度。
2． 8． 2 提取时间的影响:精密称取金森女贞花粉末 4
份，每份 1g，分别置具塞锥形瓶中，4 组各加入 70%乙
醇 40mL，60℃水浴回流提取 1 次，4 组提取时间分别为
0． 5、1、2、3h，滤过，滤液合并，水浴蒸干，残渣加适量
70%乙醇溶解转移至 50mL 量瓶中，加 70%乙醇定容
至刻度，即得到不同提取时间处理后的待测金森女贞
花溶液。分别取上述待测溶液 1mL，进行显色测其吸
光度。结果如图 1 － b 所示，1 小时左右可以提出大部
分黄酮，再增加提取时间，黄酮提取率变化不大。
2． 8． 3 料液比的影响:精密称取金森女贞花粉末 4
份，每份 1g，分别置具塞锥形瓶中，4 组分别加入 70%
乙醇 20、30、40、60mL，60℃水浴回流提取 2 次，每次为
1． 5h，滤过，滤液合并，水浴蒸干，残渣加适量 70%乙醇
溶解转移至 50 mL量瓶中，加 70%乙醇定容至刻度，即
得到不同料液比处理后的待测金森女贞花溶液。分别
取上述待测溶液 1mL，进行显色测其吸光度。结果如
图 1 － c所示，黄酮提取率随着料液比的增加而增加，
料液比为 1:30 时，提取率最高。
2． 8． 4 提取温度的影响:精密称取金森女贞花粉末 4
份，每份 1g，分别置具塞锥形瓶中，4 组各加入 70%乙
醇 40mL，各组分别在 50、60、70、80℃水浴回流中提取 2
次，每次为 1． 5h，滤过，滤液合并，水浴蒸干，残渣加适
量 70%乙醇溶解转移至 50 mL 量瓶中，加 70%乙醇定
容至刻度，即得到不同提取温度处理后的待测金森女
贞花溶液溶液。分别取上述待测溶液 1mL，进行显色
测其吸光度。结果如图 1 － d 所示，伴随着温度升高，
黄酮提取率升高，到达 80℃时，提取率达到最高，但增
长率放缓。
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图 1 不同因素对金森女贞花中总黄酮提取的影响
2． 9 正交试验结果
在单因素试验的基础上，确定乙醇浓度，料液比和超
声时间 4个因素进行正交试验(表 1)，以总黄酮得率为考
察指标，确定提取金森女贞花总黄酮的最佳工艺条件。
表 1 金森女贞花中总黄酮提取的因素水平
水平A乙醇浓度(%)B提取时间 C料液比 D温度(℃)
1 60 0． 5 1:15 60
2 70 1 1:20 70
3 80 1． 5 1:30 80
正交试验以提取金森女贞总黄酮含量为指标的结
果见表 2，通过对测定结果进行直观分析可知，4 种因
素影响作用大小依次为:A ＞ D ＞ B ＞ C。金森女贞花中
总黄酮最佳的提取工艺条件为 A2 B3 C2 D3。即 70%乙
醇，料液比为 1:20，80℃回流提取 1． 5h。
表 2 金森女贞花中总黄酮提取的正交试验结果
试验号
因素
A B C D
得率(mg /g)
1 1 1 1 1 66． 60
2 1 2 2 2 74． 45
3 1 3 3 3 77． 55
4 2 1 2 3 77． 50
5 2 2 3 1 75． 25
6 2 3 1 2 73． 70
7 3 1 3 2 63． 55
8 3 2 1 3 68． 50
9 3 3 2 1 67． 30
K1 72． 867 69． 217 69． 617 69． 717
K2 75． 483 72． 750 73． 083 70． 567
K3 66． 467 72． 850 72． 117 74． 533
Ｒ 9． 016 3． 633 3． 466 4． 816
2． 10 验证实验
称取金森女贞花粉末 3 份，每份 1g，按正交实验所
得的最佳提取工艺条件 A2B3C2D3，进行验证实验，测定
金森女贞花中总黄酮的含量，测得黄酮得率 77． 73mg /
g，ＲSD =1． 471%(n = 3)。
3 讨论
本研究采用乙醇为提取剂，考察提取时间、料液比
和温度等因素对金森女贞花中黄酮类物质提取的影
响，通过正交试验 L9(3
4)确定了提取的最佳工艺条件
为:70%乙醇，20 倍量，80℃水浴中，每次 1． 5h，回流提
取 2 次，所得黄酮含量最高。该工艺具有稳定性好，操
作简便，生产成本较低的优点。
黄酮类化合物种类众多，性质差异较大，在植物体
内因存在部位不同，结合状态也不同，黄酮类化合物具
有多种生物活性，如何充分利用这类化合物为人类疾
病预防和治疗研究已成为热门研究的方向。金森女贞
作为一种常见的园林绿化植物，其花中所含总黄酮的
提取研究还未见报道，本研究对资源丰富金森女贞花
中总黄酮提取工艺的研究，为进一步综合开发利用金
森女贞提供了较好参考价值。
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