全 文 ：提取 蓄总黄酮化学实验及测定
曲长明1 ,斯琴毕力格1 ,刘明亮2 ,李增春1
(1.内蒙古民族大学化学学院 ,内蒙古 通辽　028043;2.通辽市实验中学 ,内蒙古 通辽　028000)
〔摘　要〕通过对提取 蓄总黄酮的微型化学实验法(恒压分液漏斗)与常规实验法(超声波 、索氏提取器)比
较 ,实验证明微型化学实验法与常规实验法相比较 ,该方法具有使用试剂量小 、污染小 、省时间.适合选做天然
有机物的提取化学实验.对所提取的黄酮类物质进行验证 ,用分光光度法测定含量.微型化学实验法提取 蓄
总黄酮 ,测得品中总黄酮的平均含量为 1.96%,平均回收率为 101%.
〔关键词〕 蓄;总黄酮;化学实验;分光光度法
〔中图分类号〕O657.32　　〔文献标识码〕A　　〔文章编号〕1671-0185(2008)03-0265-04
Chemistry Experiments about Withdrawing and Determination
of Total Flavanone of Polygonum Aviculare L
QU Chang-ming , Siqinbilig , LIU Ming-liang , LI Zeng-chun
(1.College of Chemistry , I nner Mongolia University for Na tionalities , Tongliao 028043 , China;
2.Tongliao City Experimental M iddle School , Tong liao　028000 , China)
Abstract:Through ex tracting Total Flavanone of Polygonum aviculare L the micro scale chemical
experiments(constant pressure separating funnel)compared w ith the t raditional method(super-
sonic wave and apparatus), a new method based on the micro scale chemical experiments com-
pared with the t raditional method , the new method have the characteristics of less pollution , small
sample volume and save time.Micri chemical experiments are good ones that are acceptable .Us-
ing spect rophotome try to ex t ract and check the f lavanone of poly gonum aviculare L.Extracting
Total Flavanone of Poly gonum aviculare L the micro scale chemical experiments , measure sample
in average content of the total flavonoid is 1.96%, average recovery rate is 101%.
Key words:Polygonum aviculare L;Total f lavanone;Chemist ry Experiments;Spectrophotome
蓄(poly gonum aviculare L)又称畜辩 、粉节草 、扁竹蓼等 , 蓼科植物.其干燥的地上部分可以入药 , 味苦 , 微寒.具有利
尿通淋 ,杀虫 , 止痒的功效.用于膀胱热淋 , 小便短赤 ,淋沥涩痛 , 皮肤湿疹 ,阴痒带下等症〔1〕.研究表明其全草含 蓄苷 、槲
皮苷 、槲皮素等主要成分〔2〕 ,以及多种有机酸 、糖类及微量大黄素 、维生素 、粘质等化学成分.
黄酮类化合物是一类在植物界广泛存在的多酚类天然产物 , 具有抵御紫外线 、抗菌免疫 、抗氧化 、抗爱滋病毒(HIV)、
抗肿瘤等多方面生理和药理活性〔3〕.从这个意义上讲 ,对具有生理活性的黄酮类化合物进行研究是非常有价值的.
本文采用恒压分液漏斗 、索氏提取器和超声波清洗器进行提取 , 用分光光度法进行测量 , 对微型化学实验法与常规实
验法进行比较.
1　实验部分
1.1　仪器　KQ-250B 型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);721 可见分光光度计(上海第三仪器厂);ZF-
70D暗箱式紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂);SHZ-DШ型循环水真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司);RE52CS 旋
收稿日期:2008-01-11
基金项目:内蒙古自治区教育厅高校自然科学基金项目(NJ02070)
作者简介:曲长明(1977-),男 ,内蒙古阿荣旗人 ,在读硕士研究生 ,主要从事天然产物的研究.
第 23 卷　第 3 期 内蒙古民族大学学报(自然科学版) Vol.23　No.3
2008年 5 月 Journal of Inner Mongolia University for Nationalities May 2008
DOI :10.14045/j.cnki.15-1220.2008.03.006
转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂);恒压分液漏斗;索氏提取器;烧杯;25 m L圆底烧瓶;150 mL 圆底烧瓶;移液管;直型冷凝
管;25 mL 锥形瓶;玻璃漏斗.
1.2　试剂　乙醇 、亚硝酸钠 、硝酸铝 、氢氧化钠等试剂均为分析纯 、实验用水为二次蒸馏水 、芦丁(中国药品生物制品鉴定
所).
1.3　样品　 蓄购于通辽市瑞草堂药店.
2　实验方法
2.1　供试品溶液的制备　常规实验法
(1)超声波法提取总黄酮:取药品 蓄全草50 g 80℃烘干 ,粉碎.称取6 g 加入 80 mL 95%乙醇溶液 , 浸泡12 h ,超声波
提取 2.5 h ,抽滤 , 重复提取两次.合并滤液 ,减压蒸馏回收乙醇至滤液仅剩 5 ～ 7 m L为止 ,转移到 300 L容量瓶中 , 用 95%
乙醇稀释至刻度 ,得样品液.
(2)用索氏提取器提取总黄酮:称取 6 g 蓄用纸桶包好放进索氏提取器中 , 再加入 100 m L95%乙醇溶液 ,回流 3 h ,过
滤提取液 ,将滤液转移到 300 mL 容量瓶中 ,用 95%乙醇稀释至刻度 ,得样品液.
微型实验法
用恒压分液漏斗提取总黄酮:取少许棉花沾取乙醇放置恒压分液漏斗底部 , 然后在恒压分液漏斗内加入 1 g 蓄再倒
入 12 L乙醇在圆底烧瓶内加入几粒沸石 ,安装仪器.旋开恒压分液漏斗活塞 ,让漏斗内乙醇慢慢流下 , 当乙醇液面与 蓄
面接近时 ,关闭活塞 , 通入冷凝水 ,然后用电热套加热 , 当乙醇沸腾后 ,调节电热套的高度 ,以使冷凝管内上升的乙醇气流不
超过冷凝管长度的三分之一 ,缓慢滴下为好.
当看到烧瓶内乙醇量较少时 ,旋开恒压分液漏斗活塞放下乙醇 , 当下降的乙醇液面与 蓄面接近时关闭活塞 , 大约每
隔 2-3 min 放一次乙醇 , 如此连续提 , 乙醇提取液为无色时停止提取 , 大约需要 1 个小时.将提取液过滤 , 再转移到 50 mL
容量瓶中 ,用 95%乙醇稀释至刻度 ,得样品液.
2.1.1　测定方法　准确移取适量的样品液于 10 m L的比色管中 , 加水至 2.4 m L ,加 5%亚硝酸钠溶液 0.4 mL , 摇匀 ,放置
6 min ,加 10%硝酸铝溶液 0.4 mL , 摇匀 , 放置 6 min ,加 4.3%氢氧化钠溶液 4.0 m L , 用水稀释至刻度.摇匀 ,放置 15 min
以试剂做空白参比 ,用 721 型分光光度计在可见光区内全波扫描 , 在 506 nm 处有最大吸收峰 , 因此 ,选择 506 nm 为测定波
长.
2.1.2　标准溶液的制备　芦丁标准溶液(0.25 mg/mL)的配制:准确量取芦丁标准品 12.50 mg放置 50 m L容量瓶中 , 加
水稀释至刻度.
2.1.3　标准曲线的绘制　分别准确移取芦丁标准溶液(0.25 mg/mL), 0.00 0.40 0.80 1.20 1.60 2.00 2.40 m L于 10.00
m L比色管中 , 按 2.1.3 测定方法测定 ,得出线性回归方程为:A=-0.01587+1.0434C(mg/ 10 mL), R=0.999782.
2.2　样品中总黄酮的测定　准确吸取超声波提取液样品 0.60 m L , 6 份 , 置 10 mL比色管中 ,按 2.1.2 测定方法在 506 nm
处测定吸光度 ,以试样作为空白参比 , 根据回归方程:A=-0.01587+1.0434C计算样品中总黄酮的含量 ,测量结果见表 1.
表 1　样品测试结果(常量-超声波)
Table 1　 The sample test result(supersonic wave)
序号 吸光度(A) 总黄酮含量(%) 平均含量(%)
1 0.220 1.88
2 0.222 1.89
3 0.223 1.91 1.88
4 0.218 1.87
5 0.217 1.86
6 0.220 1.88
2.3　回收率的测定　分别准确移取样品超声波提取液 0.20 mL , 6 份 , 分别加入芦丁标准溶液 0.25 m L , 按 2.1.2 测定方
法操作测定吸光度 ,测量结果见表 2.
2.4　样品中总黄酮的测定　准确吸取样品索氏提取液液 0.60 m L , 6 份 , 置 10 mL比色管中 ,按 2.1.2 测定方法在 506 nm
处测定吸光度 ,以试样作为空白参比 , 根据回归方程:A=-0.01587+1.0434C计算样品中总黄酮的含量 ,测量结果见表 3.
266 内　蒙　古　民　族　大　学　学　报 2008年
表 2　回收率实验结果(常量-超声波)
Table 2　The recovery rate experiment result(supersonic wave)
试号 样品总黄酮含量(mg)
加入芦丁量
(mg)
回收芦丁量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
1 0.226 0.05 0.275 98
2 0.228 0.05 0.278 100
3 0.229 0.05 0.276 94 100.6
4 0.224 0.05 0.277 106
5 0.223 0.05 0.274 102
6 0.226 0.05 0.278 104
表 3　样品测试结果(常量-索氏提取器)
Table 3　The sample test result(apparatus)
序号 吸光度(A) 总黄酮含量(%) 平均含量(%)
1 0.213 1.83
2 0.211 1.81
3 0.210 1.80 1.81
4 0.212 1.82
5 0.211 1.81
6 0.209 1.79
2.5　回收率的测定　分别准确移取样品索氏提取液 0.20 mL , 6 份 ,分别加入芦丁标准溶液 0.25 mL , 按 2.1.2 测定方法
操作测定吸光度 ,测量结果见表 4.
表 4　回收率实验结果(常量-索氏提取器)
Table 4　The recovery rate experiment result(apparatus)
试号 样品总黄酮含量(mg)
加入芦丁量
(mg)
回收芦丁量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
1 0.219 0.05 0.267 96
2 0.217 0.05 0.268 98
3 0.216 0.05 0.269 106 99.7
4 0.218 0.05 0.265 94
5 0.217 0.05 0.267 100
6 0.215 0.05 0.268 104
2.6　样品中总黄酮的测定　准确吸取样品微型化学拉解法提取液 0.60 mL , 6 份 , 置 10 mL 比色管中 ,按 2.1.2 测定方法
在 506 nm 处测定吸光度 ,以试样作为空白参比 ,根据回归方程:A=-0.01587+1.0434C 计算样品中总黄酮的含量 , 测量
结果见表 5.
表 5　样品测试结果(微量-恒压分液漏斗)
Table 5　The sample test result(constant pressure separating funnel)
序号 吸光度(A) 总黄酮含量(%) 平均含量(%)
1 0.230 1.96
2 0.232 1.97
3 0.233 1.99 1.96
4 0.230 1.96
5 0.228 1.95
6 0.227 1.94
267第 3期 曲长明等:提取 蓄总黄酮化学实验及测定
2.7　回收率的测定　分别准确移取样品微型化学拉解法拉取液 0.20 mL , 6 份 , 分别加入芦丁标准溶液 0.25 mL , 按 2.1.2
测定方法操作测定吸光度 ,测量结果见表 6.
表 6　回收率实验结果(微量-恒压分液漏斗)
Table 6　The recovery rate experiment result(constant pressure separating funnel)
试号 样品总黄酮含量(mg)
加入芦丁量
(mg)
回收芦丁量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
1 0.236 0.05 0.289 107
2 0.238 0.05 0.288 100
3 0.239 0.05 0.286 94 101
4 0.236 0.05 0.285 98
5 0.234 0.05 0.287 106
6 0.233 0.05 0.284 102
2.8　定性实验-总黄酮的鉴别
颜色反应　①浓氨水反应:取各样品溶液点在滤纸上 ,将滤纸在氨水上方熏 0.5 min立即在紫外灯下观察 ,呈极明显的
灰褐色斑点 ,示有黄酮类化合物.
②三氯化铝反应:取各样品溶液点在滤纸上 ,滴加 1%三氯化铝乙醇溶液 ,吹干.在可见光下呈灰黄色 , 在紫外光下呈黄
褐色荧光斑点.
③盐酸-镁粉反应:取乙醇提取液 1mL 于试管中加镁粉 ,再加入浓盐酸数滴(1 次加入), 在泡沫处呈紫红色 , 示有黄酮
醇 、二氢黄酮纯等黄酮类化合物存在.
3　两种方法的测量结果与实验用品的用量比较
表 7　两种方法的测量结果与实验用品的用量比较
Table 7　The two method measurements and the comparison of experimental iterm dosis
方法 总黄酮平均含量(%)
平均回收率
(%)
样品量
(g)
乙醇用量
(ml)
反应时间
(h)
常规实验法(超声波) 1.88 100.6 6 80 2.5
常规实验法(索氏提取器) 1.81 99.7 6 100 3
微型实验法(恒压分液漏斗) 1.96 101 1 12 1
4　结果与讨论
4.1　利用恒压分液漏斗代替索氏提取器是比较好的改进 , 恒压分液漏斗不只应用于微量提取 , 也可应用于常量提取 , 装置
中仪器不易损坏 ,出现损坏亦可更换 , 而索氏提取器的虹吸管易折 、易碎 ,一但虹吸管损坏 , 就会使整套装置报废.
4.2　利用改进后的装置 , 蓄由原来的 6 g 降低到 1g乙醇由 80-100 mL , 降为 12 mL , 节省了原料 , 减少了试剂用量.
4.3　微型化学实验法提取总黄酮同超声波法提取总黄酮相比在试剂的用量上由 80 mL 减少到 12 mL , 反应时间由 2.5 h
减到 1 h.
4.4　在用恒压分液漏斗提取时不能走开 , 要时刻观察烧瓶内液体的体量的变化 , 防止蒸干.
4.5　从常规实验法与微型实验法的比较 , 可以清楚地看到在实验试剂的用量 、实验所需时间 、实验用水量 、实验用电量 、实
验效果 、实验数据等方面存在差异.
参　考　文　献
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〔责任编辑　郑　瑛〕
268 内　蒙　古　民　族　大　学　学　报 2008年