全 文 ：·论著·
萹蓄中杨梅苷和槲皮苷的含量测定
林 洁1，李志浩1，陈银华2(1．湖北医药学院附属东风医院，湖北十堰 442001;2．湖北省十堰市药品检验所，湖北十堰
442000)
作者简介:林 洁(1962． 02 ～) ，女，大学专科，副主任药师，主要从事医院药学工作，E-mail:lizhihaojack@ 126． com。
［摘要］目的:采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)分析萹蓄中杨梅苷和槲皮苷的含量。方法:Agilent LC-C18(250 mm×4． 6 mm，
5 μm)色谱柱，以乙腈-0． 1 %磷酸溶液(18 ︰ 82)作为流动相，流速为 1． 0 mL /min，柱温 30 ℃，检测波长 256 nm。结果:杨梅苷
和槲皮苷分别在 1． 22 ～ 24． 30 μg /mL 和 0． 77 ～ 15． 40 μg /mL 范围内有良好的线性关系，平均加样回收率分别为 98． 9%、
99. 6%，RSD分别为 1． 11%和 1． 09%。结论:该方法准确，简便，重复性好，可用于萹蓄中杨梅苷和槲皮苷的定量分析。
［关键词］萹蓄;杨梅苷;槲皮苷;高效液相色谱法
［中图分类号］R284;R927． 2 ［文献标识码］A ［文章编号］1672-108X(2013)05-0046-03
Determination of Myricetrin and Quercitroside in Polygonum Aviculare L．
Lin Jie1，Li Zhihao1，Chen Yinhua2(1． Dongfeng Hospital Affiliated to Hubei Medical University，Hubei Shiyan 442001，China;
2． Shiyan Institute for Drug Control，Hubei Shiyan 442000，China)
［Abstract］Objective:To establish the RP-HPLC method for the determination of myricetrin and quercitroside in Polygonum aviculare
L． ． Methods:The Agilent LC-C18(250 mm×4． 6 mm，5 μm)column was used，and the mobile phase consisted of acetonitrile:0． 1%
H3PO4(18 ∶ 82)． The flow rate was 1． 0 mL /min． The column temperature was 30 ℃ ． The detecting wavelength was at 256 nm．
Results:The calibration curves of myricetrin and quercitroside were linear within a range of 1． 22 ～ 24． 30 μg /mL and 0． 77 ～ 15． 40
μg /mL． The average recoveries of myricetrin and quercitroside of this method were 98． 9% and 99． 6%，and the RSD were 1． 11% and
1． 09%，respectively． Conclusions:The method is simple，repeatable and accurate． It can be applied in quantitative determination of
myricetrin and quercitroside in Polygonum aviculare L． ．
［Key words］Polygonum aviculare L．;Myricetrin;Quercitroside;RP-HPLC
萹蓄为蓼科植物萹蓄 Polygonum aviculare L． 的干燥
地上部分，又名路边草、牛筋草、蚂蚁草等。在我国各地
均产，具有利尿通淋、杀虫、止痒之功效。中医主要用于
热淋涩痛，小便短赤，虫积腹痛，皮肤湿疹，阴痒带下等
症［1，2］。现代药理研究表明萹蓄的黄酮类化合物具有抗
菌和抑菌作用，对霉菌、大肠埃希菌、枯草杆菌和金黄色
葡萄球菌等具有抑制作用。杨梅苷为萹蓄中主要药效成
分之一，为萹蓄的质量控制指标。研究发现萹蓄中的另
一黄酮类成分———槲皮苷具有降血压、抗炎、抗菌(抗嗜
麦芽假单胞菌和 Entevomorpha cloacae 菌)、抗诱变以及
抗病毒等多种作用［3，4］。本研究以湖北武当山产的萹蓄
为研究对象，采用反相高效液相色谱法对萹蓄中杨梅苷
和槲皮苷的含量进行测定，为更全面评价该地区萹蓄的
药材质量提供依据，现报道如下。
1 材料与方法
1． 1 材料
Dionex-P680 液相色谱仪(Chemeleon 色谱工作站，
DAD二极管阵列检测器，德国戴安公司) ;梅特勒-托利多
电子天平(d=0． 01 mg) ;JAC-100 超声波清洗机(山东济
宁奥波超声电气有限公司)。杨梅苷、槲皮苷对照品(中
国药品生物制品检定所，批号为:111860-201104，111538-
200803) ，5 批萹蓄药材(均采自湖北武当山)经湖北省十
堰市药品检验所鉴定为蓼科植物萹蓄 Polygonum
aviculare L．的干燥全草，1 批按中国药典 2010 版一部方
法测定杨梅苷和槲皮苷的含量分别为 0． 38 mg /
g、0． 26 mg /g;乙腈(色谱纯，天津科密欧公司) ;水为双蒸
水;其他试剂均为分析纯。
1． 2 方法
1． 2． 1 对照品溶液的制备 取经五氧化二磷减压干燥
器中干燥至恒重的杨梅苷及槲皮苷对照品适量，精密称
定，加甲醇分别制成每毫升含 48． 6 μg 和 30． 8 μg 的溶
液，即得。分别精密吸取上述两种对照品溶液各 5 mL置
同一 10 mL 棕色容量瓶中，以甲醇定容，摇匀，即得混合
对照品溶液(杨梅苷 24． 3 μg /mL，槲皮苷 15． 4 μg /mL)。
1． 2． 2 供试品溶液的制备 取本品粗粉约 1． 0 g，精密
称定，置 50 mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 25 mL，称定
重量，静置 4 h，超声处理(250 W，50 kHz)30 min，放冷，
再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，药渣再
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DOI:10.13407/j.cnki.jpp.1672-108x.2013.05.002
用甲醇适量洗涤，合并滤液与洗液，回收溶剂至干，残渣
加甲醇溶解并转移至 5 mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，摇
匀，滤过，取续滤液，即得。
1． 2． 3 色 谱 条 件 色 谱 柱:Agilent LC-C18 (250
mm×4． 6 mm，5 μm) ;流动相:乙腈-0． 1 % 磷酸(18 ∶
82) ;检测波长:256 nm;灵敏度:0． 1 AUFS;流速:1． 0 mL /
min;柱温:30 ℃，进样量 10 μL。
1． 2． 4 线性关系考察 精密吸取混合对照品溶液 0． 5、
1． 0、2． 0、5． 0、10． 0 mL置 10 mL量瓶中，以甲醇定容至刻
度，摇匀，得到浓度分别为 1． 22、2． 43、4． 86、12． 20、24． 30
μg /mL的杨梅苷对照品溶液和浓度分别为 0． 77、1． 54、
3． 08、7． 70、15． 40 μg /mL 的槲皮苷对照品溶液。各精密
吸取 10 μL 注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面
积，以浓度(X)对峰面积(Y)进行线性回归，分别绘制标
准曲线。
1． 2． 5 精密度实验 取混合对照品溶液 10 μL，按上述
色谱条件，重复进样 6 次，其相对保留时间稳定，记录峰
面积，计算 RSD，考察仪器精密度。
1． 2． 6 稳定性实验 取同一供试品溶液，室温下放置，
于 0、1、2、4、8、12、24 h分别进样 10 μL，测定杨梅苷和槲
皮苷峰面积，计算其 RSD，考察供试品的稳定性。
1． 2． 7 重复性实验 称取同一批萹蓄药材，按照供试品
溶液制备项下方法，平行制备 6 份供试品溶液，依法测
定，记录峰面积，计算杨梅苷及槲皮苷的平均含量及其
RSD，考察方法的重复性。
1． 2． 8 加样回收率实验 称取已知含量的同一批萹蓄
6 份，每份 0． 5 g，精密称定，分别精密加入混合对照品溶
液(杨梅苷、槲皮苷的含量分别为 24． 3、15． 4 μg /mL)
7. 0、8． 0、9． 0 mL，分别平行加样 2 份，置 50 mL具塞锥形
瓶中，精密加入甲醇 25 mL，称定重量，静置 4 h，超声处
理(250 W，50 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补
足减失的重量，摇匀，滤过，药渣再用甲醇适量洗涤，合并
滤液与洗液，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移
至 5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即
得加样回收供试品溶液。按色谱条件进行测定，计算加
样回收率。
2 结果
2． 1 色谱条件
经杨梅苷和槲皮苷的紫外吸收曲线图谱分析，杨梅
苷的最大吸收波长在 352 nm和 256 nm，而槲皮苷的最大
吸收波长为 256 nm，为同时测定该两种成分，故选择
256 nm作为检测波长。本实验曾经试过水-乙腈、水-甲
醇等不同的流动相系统，发现水-乙腈系统加入 0． 1 %磷
酸可获得较好峰形，确定流动相比例为乙腈 ∶ 0． 1 %磷
酸(18 ∶ 82)分离度较高。高效液相色谱图中，理论塔板
数按杨梅苷峰计算不小于 3 500，分离度大于 1． 5。其他
成分对杨梅苷和槲皮苷的含量测定无影响。见图 1。
A．对照品;B．供试品;1．杨梅苷;2．槲皮苷
图 1 HPLC色谱图
2． 2 线性关系考察
杨梅苷的回归方程:Y = 10． 1722X+0． 8556，r = 0． 9999;
槲皮苷的回归方程:Y = 9． 8575X－0． 1743，r = 0． 9998，表
明杨梅苷和槲皮苷分别在 1． 22 ～ 24． 30 μg /mL和 0． 77 ～
15． 40 μg /mL的浓度范围内线性关系良好。
2． 3 精密度和稳定性实验
杨梅苷和槲皮苷色谱峰面积的 RSD 分别为 0． 48%
和 1． 03%，表明仪器精密度良好。供试品在室温放置
24 h后考察杨梅苷和槲皮苷的含量变化，结果其含量的
RSD分别为 1． 12%和 1． 55%，表明供试品溶液在室温条
件下 24 h内稳定。
2． 4 重复性实验
萹蓄中杨梅苷的平均含量为 0． 38 mg /g，RSD 为
1. 82%，槲皮苷的平均含量为 0． 26 mg /g，RSD为 1． 93%，
表明方法重复性好。
2． 5 加样回收率实验
结果见表 1。杨梅苷和槲皮苷回收率分别为 98. 9%、
99． 6%，RSD分别为 1． 11%、1． 09%。
表 1 加样回收率实验结果
成分
取样量
(g)
原有含量
(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收
率(%)
RSD
(%)
杨梅苷
槲皮苷
0． 498 9 0． 189 6 0． 170 1 0． 356 0 97． 8
0． 499 7 0． 189 9 0． 170 1 0． 359 3 99． 6
0． 501 2 0． 190 5 0． 194 4 0． 385 5 100． 3
0． 498 9 0． 189 6 0． 194 4 0． 381 4 98． 7
0． 501 0 0． 190 4 0． 218 7 0． 403 6 97． 5
0． 499 2 0． 189 7 0． 218 7 0． 407 3 99． 5
0． 498 9 0． 129 7 0． 107 8 0． 237 2 99． 7
0． 499 7 0． 129 9 0． 107 8 0． 238 0 100． 3
0． 501 2 0． 130 3 0． 123 2 0． 254 2 100． 5
0． 498 9 0． 129 7 0． 123 2 0． 251 9 99． 2
0． 501 0 0． 130 3 0． 138 6 0． 265 6 97． 7
0． 499 2 0． 129 8 0． 138 6 0． 269 0 100． 4
98． 9 1． 11
99． 6 1． 09
2． 6 样品含量测定
按上述色谱条件分别对 5 批萹蓄进行含量测定，结
果见表 2。
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表 2 样品测定结果(n=3)
编号 杨梅苷(mg /g) 槲皮苷(mg /g)
1 0． 31 0． 23
2 0． 30 0． 20
3 0． 35 0． 23
4 0． 32 0． 21
5 0． 33 0． 22
3 讨论
杨梅苷、槲皮苷为萹蓄所含有的黄酮类成分，曾有文
献报道采用 HPLC 法测定萹蓄中杨梅苷的含量，但未见
槲皮苷的含量测定报道。
杨梅苷为 3’，4’，5’，5，7-五羟基黄酮-3-O-α-L-鼠李
糖苷，具有很强的抗氧化能力，此外还具有收缩血管、降
血糖、保肝、利胆、抗炎、抗突变、抗肿瘤等多种作用［5］。
由于其具有多个羟基，极易被氧化［6］。有研究［7］表明，杨
梅苷在 pH值为6 ～7时较为稳定，在 pH值1 ～5或8 ～10时
稳定性下降，在 pH值为 11 时则完全破坏;当环境温度为
100 ℃时，其含量可减少 50 %。因此在萹蓄中提取杨梅
苷或分析杨梅苷时，应尽量避免高温及强酸、强碱的破
坏，并且由于杨梅苷含有邻二酚羟基的结构，提取和分析
时也应避免和金属离子(如 Al3+、Pb2+、Fe3+)接触，以免形
成螯合物。本研究所采用的流动相经测定 pH 值
在 5． 2 ～ 6． 0 范围内，对杨梅苷的测定无影响。
本研究测定的药材均产自湖北武当山地区，其他产
地萹蓄的含量测定有待于进一步研究。由于武当山地区
生态环境保护较好，因此湖北产萹蓄的杨梅苷和槲皮苷
含量较高。吴呈祥等［8］报道的中药萹蓄质量标准研究
中，杨梅苷的平均含量为 0． 73 mg /g，槲皮苷平均含量为
0． 21 mg /g，均较其他地区所产萹蓄含量高。本研究结果
也表明武当山地区较适合萹蓄的生长，可酌情大面积种
植该药材。
本文建立的高效液相色谱法同时测定萹蓄中杨梅苷
和槲皮苷的含量，方法准确，简便，重复性好，可用于萹蓄
中杨梅苷和槲皮苷的定量分析，同时为进一步对萹蓄的
药效物质基础研究提供了技术方法，也为其他含有该两
种成分的中药材及中成药分析提供参考。
参考文献:
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研究与开发，2007，28(2) :185-188．
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［8］吴呈祥，陈 君，张 蕾，等． 中药萹蓄的质量标准研究［J］．
药学与临床研究，2009，17(5) :365．
(编辑:王乐乐)
(收稿日期:2012-12-07 修回日期:2013-01-04)
·论著·
维地西林涂剂中维生素 B2 的含量测定
李伏燕1，彭芬芬2，吴立兵1(1． 湖北医药学院附属太和医院，湖北十堰 442000;2． 湖北中医药大学药学院，湖北武汉
430065)
作者简介:李伏燕(1977 ～) ，女，大学本科，主管技师，主要从事临床检验及药事管理工作。
通讯作者:吴立兵(1975 ～) ，男，大学本科，副主任技师，主要从事临床检验及药事管理工作，E-mail:cmqman@ yahoo． com． cn。
［摘要］目的:建立维地西林涂剂中维生素 B2 的质量控制方法，保障临床用药安全有效。方法:采用高效液相色谱法，C18 柱
(150 mm×4． 6 mm，5 μm)，流动相为醋酸-醋酸钠缓冲液(pH 4． 5)-甲醇(65 ∶ 35)，检测波长 270 nm，柱温 30 ℃，流速 1 mL/min。
结果:维生素 B2 在 1. 0 ～ 25. 0 μg /mL范围内线性关系良好，回归方程 Y=0． 065X+0． 0086(r =0． 9995)，平均回收率为 99． 85%，
RSD=0． 75%(n=6)。结论:本文建立的方法简便，重现性好，适用于维地西林涂剂中维生素 B2 的质量控制。
［关键词］维地西林涂剂;维生素 B2;含量测定
［中图分类号］R927． 2 ［文献标识码］A ［文章编号］1672-108X(2013)05-0048-04
·84· 儿科药学杂志 2013 年第 19 卷第 5 期 Journal of Pediatric Pharmacy 2013，Vol. 19，No. 5