全 文 ：8 • HUNAN AGRICULTURAL SCIENCES
朝鲜蓟（Cynara scolymus L.），别名洋蓟、菊蓟、
菜蓟、法国百合、荷花百合，为菊科菜蓟属多年生草本
植物。朝鲜蓟食用部分为花蕾，是一种高营养的保健蔬
菜，经常食用有保护肝肾、增强肝脏排毒、防止动脉硬
化、保护心血管等功效[1-3]。朝鲜蓟原产于北欧地中海
沿岸，生长于阳光充足、温暖且不太潮湿的海边地区。
中国于19世纪从法国引进，之后各地相继引种、栽培成
功，现已有相当规模[4]。栽培得到的朝鲜蓟，对花蕾部
分的研究开发较多，而对其废弃部分朝鲜蓟叶的研究开
发较少。
朝鲜蓟叶有着悠久的利用历史，作为地中海民间
医药，用于治疗消化不良障碍，促进胆汁分泌，抗氧
化、降低胆固醇等[5-8]。研究发现，朝鲜蓟叶中含有多
种二咖啡奎尼酸及其衍生物和多种黄酮类功能性化合
物，主要活性成分有洋蓟素（1,5-二咖啡酰奎尼酸）、
绿原酸（3-咖啡酰奎尼酸）和木犀草素葡萄糖甙、芹菜
素葡萄糖甙等[9-12]。目前，我国对朝鲜蓟叶的活性成分
含量测定的研究较少且不系统。试验以湖南农业大学中
药材GAP栽培基地中引进栽培的朝鲜蓟为材料，建立了
高效液相色谱同时分析朝鲜蓟叶中绿原酸和洋蓟素的方
法，可为朝鲜蓟资源的开发利用提供参考。
1 材料与方法
1.1 仪器与设备
LC-10ATVP高效液相色谱仪（日本岛津公司），
LC-solution色谱数据工作站； KQ5200D型数控超声波
清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；AE240 电子天
平（瑞士梅特勒-托利多司）；Diamond TⅡ型 纯水机
（ThermoFisher公司）
1.2 材料与试剂
朝鲜蓟叶，采自湖南农业大学中药材GAP栽培基
地。
乙腈（色谱纯）、甲醇（色谱纯）、磷酸（分析
纯）购自国药集团化学试剂有限公司提供；超纯水；绿
原酸、洋蓟素（1,5-二咖啡酰奎尼酸）对照品（纯度＞
98%），上海融禾医药科技发展有限公司。
1.3 色谱条件
色谱柱：ECOSIL C18柱（4.6 mm×200 mm，5
收稿日期：2014-03-03
基金项目：国家科技支撑计划项目（2011BAD10B00）
作者简介：曹佩琴（1989-），女，湖南衡山县人，硕士研究生，研究方向为
植物功能成分利用。
通讯作者：刘仲华
高效液相色谱法同时测定朝鲜蓟叶中绿原酸和洋蓟素含量
曹佩琴1，3，黄建安1，2，李银花1，2，牛 丽1，2，刘仲华1，2，3
（1. 国家植物功能成分利用工程技术研究中心，湖南 长沙 410128；2. 湖南省植物功能成分利用协同创
新中心，湖南 长沙 410128；3. 湖南农业大学植物资源工程系，湖南 长沙 410128）
摘 要：建立了同时测定朝鲜蓟叶中绿原酸（3-咖啡酰奎尼酸）和洋蓟素（1,5-二咖啡酰奎尼酸）的高效液相色谱方法。色谱条件为ECOSIL C18
（4.6 mm×200 mm，5 μm）色谱柱，0.2 %磷酸水溶液和乙腈为流动相，梯度洗脱，流速1 mL/min ，波长330 nm ，柱温29 ℃。绿原酸和洋蓟素的
色谱峰面积与进样浓度呈现良好的线性关系，平均加标回收率分别为100.20 %、99.02 %；平均RSD分别为1.31 %、1.65 %。该分析方法快速、准
确、重现性好，可用于朝鲜蓟资源开发产品的质量分析。
关键词：高相液相色谱；朝鲜蓟叶；绿原酸；洋蓟素
中图分类号：S644.9 文献标识码：A 文章编号：1006-060X（2014）07-0008-03
Simultaneous Determination of Chlorogenic Acid Content and Cynarin Content
in Artichoke Leaf by HPLC
CAO Pei-qin1,3, HUANG Jian-an1,2, LI Yin-hua1,2, NIU Li1,2, LIU Zhong-hua1,2,3
( 1. National Research Center of Engineering Technology for Utilization of Functional Ingredients from Botanicals, Changsha 410128,
PRC; 2. Hunan Co-Innovation Center for Utilization of Botanical Functional Ingredients, Changsha 410128, PRC; 3. Department of
Botanical Resources Engineering, HNAU, Changsha 410128, PRC )
Abstract：A HPLC method was developed to determine chlorogenic acid and cynarin in artichoke (Cynara scolymus L.) leaf
simultaneously. The chromatogram conditions were as follows: using ECOSIL C18 (4.6 mm×200 mm, 5 μm）column and taking 0.2%
phosphoric acid water solution and acetonitrile solution as the mobile phase to conduct gradient elution, and the fl ow rate, the wavelength
and the was column temperature were 1 mL/min, 330 nm and 29℃, respectively. The chromatogram peak area of the chlorogenic acid and
cynarin showed a good linearity with the concentration of injected sample; the average recovery rate of the chlorogenic acid and the cynarin
was 100.20 % and 99.02 %, respectively, and the average RSD of them was 1.31 % and 1.65 %, respectively. The results demonstrated that
the method is quick, accurate and repeatable, thus can be used in quality analysis for developed products of artichoke resources.
Key words: high performance liquid chromatography (HPLC); artichoke leaf; chlorogenic acid; cynarin
生理生化｜遗传育种｜耕作栽培
DOI:10.16498/j.cnki.hnnykx.2014.07.021
湖南农业科学· 9
μm）；柱温：29℃；进液量：20 μl；流动相：0.2 %
磷酸水溶液（A）和乙腈（B），梯度洗脱条件：0~5
min，B泵从5 %线性升至20 %，5~20 min， B泵从20 %
线性升至30 %，20~23 min，B泵从30 %线性升至50 %，
保持5 min后在2 min内降至5 %；流速：1 mL/min；波
长：330 nm。
1.4 对照品溶液的配置
分别精密称取绿原酸和洋蓟素对照品适量，置于
25 mL的棕色容量瓶中，加入50 %甲醇溶解稀释至刻
度，摇匀，得到各对照品储备液，0.45 μm滤膜过滤，
－20℃保存待用。
1.5 供试品溶液的制备
精密称取0.332 g朝鲜蓟叶粉末，置于100 mL锥形
瓶中，按料液比1∶15加入蒸馏水，于50℃水浴提取1
h，过滤，滤渣置于100 mL锥形瓶中，重复浸提一次，
合并2次滤液，定容到100 mL容量瓶中，0.45 μm滤膜过
滤，－20℃保存待用。
2 结果与分析
2.1 流动相的选择
选用水-乙腈溶液、磷酸水溶液-乙腈溶液两种流动
相分离朝鲜蓟叶中绿原酸和洋蓟素，从色谱图来看，水
-乙腈能够将朝鲜蓟叶提取物各组分初步分离开，但洋
蓟素并未达到基线分离，加入磷酸后能够明显地改善色
谱峰的峰型，减少拖尾的现象，各组分能够达到基线分
离，其色谱图如图 1 所示。
果表明质量浓度（X，mg/L）与峰面积（Y，μv.s）呈
良好的线性关系。
2.3 精密度试验
取1.4供试品溶液，在1.3色谱条件下进样20 μL，重
复进样5次，测定峰面积。绿原酸、洋蓟素峰面积的相
对标准偏差（RSD）分别为1.58 %、1.38 %。
2.4 重复性试验
精密称取朝鲜蓟叶粉末5份，按1.4节所述方法制备
供试品溶液，在1.3色谱条件下，分别进样20 μL，测得
绿原酸的平均含量为34.24 mg/L，RSD为1.77 %；洋蓟
素的平均含量为0.89 mg/L，RSD为0.84 %。
2.5 稳定性试验
取同一供试品溶液，在室温避光下放置，分别
在0、2、4、6、8、10 h按1.3色谱条件，进样20 μL，
测定峰面积。绿原酸、洋蓟素峰面积的相对标准偏差
（RSD）分别为1.36%、1.72%。
2.6 加标回收率
试验采用标准加入法检测方法准确度。取已知含
量的样品3份，加入对照品，按 1.5 节方法处理样品，
在1.3所述色谱条件下进行测定。测定结果如表2所示，
各组分的回收率在98.02%~100.94% 之间，绿原酸的平
均回收率为100.20%、平均RSD为1.31%；洋蓟素的平
均回收率为99.02%、平均RSD为1.65%。
名 称 初始值（mg）
加入量
（mg）
检出量
（mg）
回收率
（%）
平均RSD
（%）
绿原酸
3.357 3.192 6.579 100.94
3.626 3.216 6.872 100.93 1.31
3.290 3.451 6.695 98.67
洋蓟素
0.087 0.101 0.186 98.02
0.094 0.107 0.199 98.13 1.65
0.085 0.11 0.196 100.91
表2 绿原酸与洋蓟素的回收率测定
Table 2 Recovery rates of chlorogenic acid and cynarin
成 分 线性回归方程 相关系数r 线性范围（μg）
绿原酸 Y=1 016.8X+6 625.64 0.999 9 0.532~2.66
洋蓟素 Y=1 124.88X－106.504 0.999 4 0.096~1.68
表1 高效液相色谱法检测绿原酸与洋蓟素的线性范围
Table 1 Linear ranges of chlorogenic acid and cynarin
detected by HPLC
图1 朝鲜蓟叶高效液相色谱图
Fig.1 HPLC chromatogram of artichoke leaf
2.2 方法的线性范围
精密称取各对照品适量，用50%甲醇溶解后并定
容，作为标准储备液，将储备液进行稀释配成不同浓度
的标准品溶液，在1.3所述条件下进行测定，以质量浓
度（mg/L）为横坐标，峰面积为纵坐标作线性回归，
其线性回归方程、相关系数、线性范围见表1。测定结
2.7 样品的含量测定
按1.5所述的方法处理样品，采用1.3节所述色谱条
件进行分离，经测定朝鲜蓟叶绿原酸和洋蓟素的含量分
别为1.01%和0.026%，其色谱图如图1所示。
3 结 论
绿原酸和洋蓟素属于咖啡酰奎尼酸类化合物，分
子结构中有酯键不饱和双键及多个酚羟基。试验建立了
朝鲜蓟叶中绿原酸（3-咖啡酰奎尼酸）和洋蓟素（1,5-
二咖啡酰奎尼酸）高相液相色谱测定方法，色谱条件为
ECOSIL C18（4.6 mm×200 mm，5 um）色谱柱，0.2%磷
酸水溶液和乙腈为流动相，梯度洗脱，流速1 mL/min，
波长330 nm，柱温29 ℃。该方法分离效果佳，且整个
分析可在30 min内完成，具有普遍适用性，可用于朝鲜
生理生化｜遗传育种｜耕作栽培
10 • HUNAN AGRICULTURAL SCIENCES
蓟资源开发产品的质量分析。
参考文献：
[1] Ceccarelli N，Curadi M，Picciarelli P，et al. Globe artichoke
as a functional food[J]. Mediterranean Journal of Nutrition and
Metabolism，2010，3（3）：197-201.
[2] Lutz M，Henríquez C，Escobar M. Chemical composition and
antioxidant properties of mature and baby artichokes （Cynara
scolymus L.），raw and cooked[J]. Journal of Food Composition
and Analysis，2011，24（1）：49-54.
[3] 宋曙辉，赵 霖 . 朝鲜蓟的研究进展[J]. 长江蔬菜，2008，
（12）：4.
[4] 姜淑敏. 朝鲜蓟的开发利用及其栽培技术[J]. 中国蔬菜，1987
（3）：14.
[5] 王天轶，王志云. 洋蓟叶提取物的生物活性研究[J]. 中草药，
2006，37（8）：附5.
[6] Küçükgergin C，Aydın A F，Özdemirler-Erata G，et al. Effect of
artichoke leaf extract on hepatic and cardiac oxidative stress in rats
fed on high cholesterol diet[J]. Biological trace element research，
2010，135（1-3）：264-274.
[7] Pandino G，Lombardo S，Mauromicale G. Globe artichoke leaves
and floral stems as a source of bioactive compounds[J]. Industrial
Crops and Products，2013，44：44-49.
[8] Bundy R，Walker A F，Middleton R W，et al. Artichoke leaf
extract（Cynara scolymus L.） reduces plasma cholesterol in
otherwise healthy hypercholesterolemic adults：A randomized，
double blind placebo controlled trial[J]. Phytomedicine，2008，15
（9）：668-675.
[9] Wittemer S M，Ploch M，Windeck T，et al. Bioavailability
and pharmacokinetics of caffeoylquinic acids and flavonoids
after oral administration of Artichoke leaf extracts in humans[J].
Phytomedicine，2005，12（1）：28-38.
[10] Fritsche J，Beindorff C M，Dachtler M，et al. Isolation，
characterization and determination of minor artichoke（Cynara
scolymus L.）leaf extract compounds[J]. European Food Research
and Technology，2002，215（2）：149-157.
[11] Schütz K，Kammerer D，Carle R，et al. Identification and
quantifi cation of caffeoylquinic acids and fl avonoids from artichoke
（Cynara scolymus L.）heads，juice，and pomace by HPLC-DAD-
ESI/MSn[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry，2004，52
（13）： 4090-4096.
[12] Häusler M，Ganzera M，Abel G，et al. Determination of
caffeoylquinic acids and fl avonoids in Cynara scolymus L. by high
performance liquid chromatography[J]. Chromatographia，2002，
56（7-8）：407-411.
（责任编辑：高国赋）
（上接第7页）
[4] Tohnishi M，Nakao H，Furuyaf T，et al. Flubendiamde，a novel
insecticide highly active against lepidopterous insect pests[J]. Journal
of Pestic Science，2005，30（4）：354-360.
[5] Cordova D，Benner E A，Sacher M D，et al. Anthranilic
diamides：a newclass of insecticides with a novel mode of action，
ryanodine receptor activation[J]. Pesticide Biochemistry and
Physiology，2006，84（3）：196-214.
[6] Sattelle D，Cordova D，Cheek T. Insect ryanodine receptors：
molecular targets for novel pest control chemicals[J]. Invertebrate
Neuroscience，2008，8（3）：107-119.
[7] 唐振华，陶黎明. 新型二酰胺类杀虫剂对鱼尼丁受体作用的分子
机理[J]. 昆虫学报，2008，51（6）：646-651.
[8] HirookaI T，Nishimatsu T，Kodama H，et al. The biological profi le
of flubendiamide，a new benzenedicar boxamide insecticide[J].
Pfl anzeschutz-Nachrichten Bayer，2007，60（2）：183-202.
[9] Hannig G T，Ziegler M，Marcon P G. Feeding cessation effects
of chlorantraniliprole，a new anthranilic diamide insecticide，in
comparison with sever insecticides in distinct chemical classes and
mode-of-action groups[J]. Pest Management Science，2009，65
（9）：969-974.
[10] Lahm G P，Stevenson T M，Selby T P，et al. RynaxypyrTM：A
new insecticidal anthranilic diamide that acts as a potent and selective
ryanodine receptor activator[J]. Bioorganic & Medicinal Chemistry
Letters，2007，17（22）：6274-6279.
[11] 赵善欢，陈文奎. 介绍杀虫剂进入昆虫体内的途径、转移机制及
作用方式的新理论[J]. 华南农业大学学报，1986，（3）：5-11.
[12] 孙丽娜，杨代斌，芮昌辉，等. 氯虫苯甲酰胺对小菜蛾鱼尼丁受
体基因mRNA表达量的影响[J]. 农药学学报，2012，14（2）：
136-142.
[13] Livak K J，Schmittgen T D. Analysis of relative gene expression
data using real-time quantitative PCR and 2−ΔΔCt method[J].
Methods，2001，25（4）：402-408.
[14] Lavine M D，Strand M R. Insect hemocytes and their role in
immunity[J]. Insect Biochemistry and Molecular Biology，2002，
329（10）：1295-1309.
[15] Cuttell L，Vaughan A，Silva E，et al. Undertaker，a Drosophila
junctophilin，links drapermediated phagocytosis and calcium
homeostasis[J]. Cell，2008，135（3）：524-534.
（责任编辑：成 平）
生理生化｜遗传育种｜耕作栽培