全 文 ：　　收稿日期:2009-11-13;修回日期:2009-12-26
基金项目:内蒙古自治区蒙药材现代化研究项目(MX2005ZB006)
作者简介:王焕芸(1966 -), 女 ,内蒙古医学院药学院副教授。
通迅作者:王玉华 ,教授 , 中药学博士 , E-mail:yuhuawang59@163.com内蒙古医学院 , 010059
蒙药材毛茛的质量标准研究
王焕芸 1 , 　刘　爽 2 , 　孟　敏 1 , 　李哓霞 1 , 　王玉华1
(1.内蒙古医学院 药学院 , 内蒙古 呼和浩特 010059;　2.内蒙古医学院第二附属医院 药剂科)
　　摘　要:目的:研究蒙药材毛茛的质量控制标准。方法:采用理化法及薄层色谱法(TLC)对毛茛进行定性鉴
别;采用高效液相色谱法(HPLC)测定毛茛中槲皮素的含量。结果:TLC鉴别斑点清晰 ,分离度良好;含量测定
中槲皮素的峰形好 、分离度符合要求;槲皮素在 0.3464 ～ 17.32μg/mL范围内呈良好线性关系(r=0.9999);平
均回收率为 100.2%, RSD为 1.4%。结论:该方法简便 、灵敏 、准确 、重复性好 , 可作为毛茛的质量控制标准。
关键词:毛茛;薄层色谱法;高效液相色谱法;槲皮素;质量标准
中图分类号:R962 　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1004-2113(2010)01-0039-04
QUALITYSTANDARDSOFRANUNCULUSJAPONICUSTHUNB
WANGHuan-yun, 　LIUShuang, 　MENGMin, 　etal.
(DepartmentofPharmacy, InnerMongoliaMedicalColege, Hohhot010059 China)
　　Abstract:Objective:ToestablishthequalitystandardsofRanunculusjaponicusThunb.Meth-
ods:TheidentificationofRanunculusjaponicusThunbwascarriedoutbyTLC.Thecontentofquercetin
wasdeterminedbyHPLC.Results:TheTLCspotswereclearwithhighresolution.Agoodlinearityof
quercetinwasintherangeof0.3464 ～ 17.32 mg/mL(r=0.9999).Theaveragerecoveryofquerce-
tinwas100.2%andRSDwas1.4%.Conclusion:Thismethodissimple, sensitive, accurateandwith
goodreproducibilityandcanbeusedforthequalitycontrolofRanunculusjaponicusThunb.
Keywords:RanunculusjaponicusThunb;TCL;HPLC;quercetin;qualitystandard
　　毛茛为毛茛科多年生草本植物日本毛茛 Ra-
nunculusjaponicusThunb或高原毛茛 R.brotherusi
FergnvarTanguticus(maxim)Tamura,收载于 《蒙古
学百科全书 ·医学卷 》2002版。以带根全草入药 ,
又名老虎脚迹 、五虎草等。生于田沟旁和林缘路边
的湿地上 ,除西藏外 , 在我国各省广布。味辛 、性
温 、有毒。具有利湿 、消肿 、退翳 、截疟 、杀虫的功
效 [ 1] 。中医临床用于主治疟疾 、黄疸 、偏头痛 、胃
痛 、风湿关节痛 ,鹤膝风 ,痈肿 ,恶疮 、疥癣 、牙痛 、火
眼等疾病。文献报道[ 2, 3] ,毛茛全植物中含有原白
头翁素 、白头翁素 、毛茛苷 、异毛茛苷 、猫爪草素 、牡
荆素 、肥皂草素 、新牡荆素 、棉花皮次苷 、槲皮素 、常
春藤皂苷 、齐墩果酸 、β -谷甾醇等。本研究对其
中的 β -谷甾醇进行 TLC鉴别。槲皮素为有效成
分之一 ,目前对槲皮素的研究也比较成熟 ,故选择
槲皮素为定量指标采用 HPLC法以控制该药材的
质量 。
·39·内蒙古医学院学报　2010年 2月　第 32卷　第 1期DOI :10.16343/j.cnki.issn.2095-512x.2010.01.002
1　仪器与试药
岛津 LC-10AVP液相色谱仪(配有柱温箱);
SPD-10AVP检测器;CLASS-VP工作站;槲皮素
对照品 [中国药品生物制品检定所 , 批号为
(100081-200406)] ;β -谷甾醇对照品 [中国药品
生物制品检定所 , 共鉴别用 , 批号为 (0851 -
9601)] ;毛茛药材采于大青山 、赤峰的克旗 、翁牛
特旗 、敖汗旗等;甲醇为色谱纯;水为双重蒸馏水;
其他试剂均为分析纯 。
2　方法与结果
2.1　定性鉴别
2.1.1　理化鉴别　取本品 1g,加 25mL甲醇 ,超声
30min,滤过 ,得样品溶液。
①荧光反应:取上述溶液滴于滤纸上 ,晾干 ,置
254nm、365nm紫外灯下观察 ,均呈微弱黄绿色荧
光 。在滤滴上再滴加 40%氢氧化钠 1滴 , 置
254nm、365nm紫外灯下观察 ,均呈黄绿色荧光。
②取上述滤液 2mL,加入少许镁粉 ,滴加 3 ～ 4
滴浓盐酸 ,溶液略显粉色。
2.2.2　薄层鉴别　取本品粉末 2g, 加 70%乙醇
30mL,冷浸 6h后 ,蒸干 ,残渣加甲醇 20mL以及
4%硫酸 20mL, 水浴回流 3h, 滤过 , 浓缩 , 定容至
5mL,作为供试品溶液 。精密称取 β -谷甾醇对照
品适量 ,用甲醇溶解 ,制成 1mg/mL的溶液作为对
照品溶液。吸取供试品溶液和对照品溶液各 5μL
点于同一块硅胶 G薄层板上 , 用石油醚 -乙酸乙
酯 -甲酸(8∶2∶0.01)展开 ,结果表明 ,供试品溶液
在与 β -谷甾醇对照品相应位置显相同的粉色斑
点 ,证明毛茛中含有 β -谷甾醇 。
2.2　含量测定
2.2.1　色谱条件　色谱柱:Diamonsil(钻石)C18
柱(5μm, 250mm×4.6mm)(迪马公司);流动相:
甲醇 -0.4%磷酸(52∶48);检测波长:360nm;流速
为 1.0mL/min。
2.2.2　对照品溶液的制备　取槲皮素对照品适
量 ,用甲醇制成 1mL含 34.64 g的对照品溶液 。
2.2.3　供试品溶液的制备　取本品约 2g,精密称
定 ,置具塞锥形瓶中 ,精密加 80%甲醇 50mL,密
塞 ,称定重量 ,加热回流 1h,放冷 ,再称定重量 ,用
80%甲醇补足减失的重量.摇匀 ,滤过 ,精密量取
续滤液 10mL,加盐酸 1mL,置 90℃水浴中加热回
流 60min,取出 ,立即冷却 ,转移至 25mL量瓶中 ,用
流动相稀释至刻度 , 摇匀 , 微孔滤膜(0.45μm)滤
过 ,即得。
2.2.4　专属性考察　在选定条件下 ,槲皮素峰与
样品中其它组分色谱峰可达基线分离 ,且与其它相
邻色谱峰分离度大于 1.5;按槲皮素峰计算 ,理论
板数在 3000以上。供试品溶液中 ,在与槲皮素对
照品色谱峰相应位置上有相应峰 ,而槲皮素阴性溶
液(即流动相)色谱中无此峰 ,说明阴性无干扰 ,对
照品 、供试品色谱图见图 1。
2.2.5　线性关系考察　精密吸取浓度为34.64μg/mL
的槲皮素对照品溶液 0.1、0.5、1.0、3.0、5.0mL分
别至 10mL量瓶中 ,用甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,分别
吸取 20 L进样 ,按上述条件测定 ,记录峰面积 。以
浓度(X)为横坐标 ,峰面积(Y)为纵坐标 ,绘制标准
·40· ActaAcadMedNeiMongol　Feb.2010　Vol.32　 No.1
曲线 ,并计算回归方程为Y=80989.8X+7421.21,
r=0.9999。结果表明 ,槲皮素在0.3464 ～ 17.32μg/mL
浓度范围内呈良好线形关系。
2.2.6　精密度试验　分别取同一对照品溶液和供
试品溶液分别重复进样 6次 ,记录峰面积 ,结果对
照品 RSD为 1.06%,供试品 RSD为 1.1%,表明该
法的精密度较好 ,符合含量测定要求 。
2.2.7　稳定性试验　取同一供试品溶液分别于
0、1、2、4、6、8、10、12h进样 ,记录峰面积 ,结果 RSD
为 1.4%。表明供试品溶液在 12h内稳定。
2.2.8　重复性试验　取同一批号样品 6份 ,按供
试品溶液制备方法操作 ,并测定 ,结果见表 1。表
明供试品测定结果的重复性好 ,符合含量测定要
求。
表 1　重复性试验结果
Tab.1　Theresultofrepetitioncharactertest
实验号 称样量 峰面积 含量 平均值 RSD
(g) (mg/g) (mg/g) (%)
1 2.0686 407671 0.3048
2 2.0510 402262 0.3034
3 2.0212 396151 0.3032 0.3034 0.23
4 1.9501 381585 0.3027
5 1.9602 384445 0.3033
6 2.0298 397893 0.3032
2.2.9　加样回收率试验　取已知含量供试品约 1g
6份 ,精密称定 ,精密加入一定量的槲皮素对照品溶
液 ,置于具塞锥形瓶中 ,按 2.2.3项下供试品溶液
的制备方法制备及 2.2.1项下色谱条件测定 ,计算
回收率 ,结果见表 。表明该法的加样回收率好 ,符
合含量测定要求。
表 2　加样回收率试验结果
Tab.2　Theresultofrecoveryratetest
实验号 称样量 样品中含 加入量 测得量 回收率 平均值 RSD
(g) 量(μg) (μg) (μg) (%) (%) (%)
1 0.9961 256.4 220 224.7 102.1
2 0.9921 255.4 220 224 101.8
3 0.9998 257.3 220 220.6 100.3 100.2 1.4
4 1.0001 257.4 220 218.8 99.45
5 1.0021 257.9 220 218.1 99.14
6 0.9988 257.1 220 217.1 98.68
2.2.10　样品含量测定　取 10批样品 ,每批两份 ,
按 2.2.3项下制备供试品溶液 ,取供试品溶液及对
照品溶液分别进样 20 L,记录峰面积 ,按外标法测
定槲皮素含量。 10批样品结果见表 3。
3　讨论
在含量测定中 ,曾试用了甲醇 -水 -冰醋酸 -
三乙胺 (87∶13∶0.04∶0.02), 乙腈 -水 -磷酸
(45∶55∶0.1), 甲醇 -水 (55∶45), 甲醇 -乙腈
(15∶85),甲醇 -0.1%磷酸(50∶50),甲醇 -0.4%
磷酸(55∶45)(52∶48)(50∶50)等流动相 [ 4 ～ 9] ,经
反复试验摸索 ,将流动相定为甲醇 -0.4%磷酸
(52∶48),保留时间在 19 ～ 20min,出峰时间适当 ,
色谱峰峰形比较理想 ,槲皮素与其相邻色谱峰的分
离度大于 1.5。
供试品的制备 提取方法分别考察了浸泡 、回
·41·内蒙古医学院学报　2010年 2月　第 32卷　第 1期
流和超声处理 ,最终选定罗布麻叶中槲皮素的提取
方法:回流提取 1h,加酸水解回流 1h,可将药材中
的槲皮素提取完全 ,且杂质少 ,杂质峰对槲皮素峰
的干扰小 ,故选择此方法处理样品。
文献报道 [ 4 ～ 9] 槲皮素的检测波长有 360nm、
254nm、368nm, 在 200nm至 400nm之间进行光谱
扫描 , 360nm处毛茛药材中其它化学成分对槲皮素
峰干扰小 ,且吸收值大 ,故选择 360nm作为本药材
的检测波长 。
表 3　样品含量试定结果
Tab.3　Theresultofsampletest
批号 称样量 峰面积 含量 平均含量 RSD
(g) (mg/g) (mg/g) (%)
1 1.9999 314084 0.2454 0.2456 0.09
2.0032 315037 0.2457
2 1.9056 315692 0.2588 0.2574 0.77
2.0098 329301 0.2560
3 1.9978 262496 0.2053 0.2042 0.08
1.9678 255670 0.2030
4 1.9988 350834 0.2755 0.2755 0.00
1.9897 349255 0.2755
5 1.9568 326749 0.2621 0.2601 1.09
1.9501 320638 0.2581
6 1.9566 380557 0.3053 0.3048 0.21
1.9687 381871 0.3044
7 1.9932 365556 0.2879 0.2868 0.52
1.9266 350808 0.2585
8 2.0142 330578 0.2576 0.2562 0.74
1.9942 323848 0.2549
9 2.0002 285853 0.2244 0.2226 1.18
1.9998 281176 0.2207
10 1.9566 264419 0.2121 0.2129 0.53
1.9856 270252 0.2137
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(责任编辑:程立新)
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