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赤松毛虫质型多角体病毒复制和提取技术的研究



全 文 :3
.成本核算 :飞机超低容量喷洒杀灭菊
脂防治松毛虫 , 每亩成本费为。 . 35 元 , 与喷洒
杀虫净每 亩成本费。 . 56 元相比 , 降低 0 . 21 元
(见表 4 ) 。 中
表 4 防 治 成 本 核 算
喷方药剂 喷 洒
面 积
用药量
名称 (亩 ) (公斤 )
飞机超
低容量
6
.
5 0
, 1 6
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三 、 小结
1
. 飞机超低容量喷洒 20 %杀灭菊醋乳剂
对越冬代松毛虫幼虫有很好的杀伤作用 。 每亩
喷洒量 2 50 克 , 含药量 4 一 7 . 5克时 , 7 天内杀
虫率达 9 1 . 2一 96 . 2% 。 此药杀虫速率 虽较 缓
慢 , 但持效期长 , 效果稳定 。 通过这次试验 ,
为今后大面积使用拟除虫菊醋类农药防治松毛
虫 , 提供 了一定的经验 。
2
. 飞机超低容量喷洒 20 %杀灭菊醋乳剂
防治松毛虫 , 用药量少 , 使用时可直接加水稀
释 , 具有运输方便 , 装药简单 , 节省劳力等优
点 , 从而降低了防治成本 , 每亩防治投资比喷
洒杀虫净降低 26 . 6% 。
3
. 据在林间长期观察 , 松毛虫主要天敌
红头小茧蜂 , 两色瘦姬蜂 4 月 6 日前后开始羽
化。 因此 , 3 月下旬一 4 月初喷洒拟除虫菊醋
类农药 , 既消灭了害虫 , 又不会杀伤天敌 , 是
防治的有利时机 。 .
赤松毛虫质型多角体病毒复制
和 提 取 技 术 的 研 究
江苏省林业并学研究 所 范民生 江复善 席 客
由千病毒只能在寄主活细胞内增殖 , 因而
解决大量复制的技术问题 , 是 “ 以病毒治虫 ”
的首要环节 。 我们 自19 7 9年起开始研究赤松毛
虫质型多角体病毒复制的有关技术 , 现将初步
结果报道于下 。
一 、 病毒友制
1
. 在有松毛虫发生的松林 , 采集距结茧
1 一 2个龄期的老幼虫 , 室内饲养在 3 x 3 x
5 4厘米铁纱笼内 , 每笼30 。一 5 0 头 , 也可饲养
于塑料薄膜围成的高 50 厘米的空间 , 大小视幼
虫数量而定。 一平方米可养 虫 2 , 0 0 头 , 四周
培砂压紧 , 上部敞开 。 在饲料松枝上用 0 . 5亿 /
毫升多角体悬 液 均 匀 喷湿 , 松枝插人砂钵保
湿 。 隔 2一 3 天更换新鲜松枝 , 清除粪便 。 5
一 7天幼虫开始死亡 , 以后每天收集病死虫 ,
贮于 3一 5 ’ c 冰箱集中提取多角体 。 采用这种制
种方法 , 一般幼虫发病率可达 90 %以上 , 20 天
左右即可完成整个接种工作 。 据 19 8 2年统计 :
固定 l 名工人 , 包括采虫 、 接种 、 收集死虫等
工作 , 共 43 个劳动日 , 收集病死虫 16 , 9 95 头 ,
提取多角体 76 , 4 1 3亿 , 平均每劳动日可复制多
角体 1 , 7 7 7亿。
2
. 选择一块较低矮松林 , 移植一定数量 ,
松毛虫幼虫 , 喷洒病毒 , 待得病致死时 , 每天
收集病死虫。 19 7 9年第一代 马 尾 松 毛虫幼虫
期 ,在林间喷洒病毒 1 . 4亩 , 收集病死虫 17 , 9 35
一 2 8 一
头 , 提取多角体 89 , 6 7 5亿 , 共用 20 个劳动日 ,
平均每劳动 日可复制多角体 4 , 4 83 . 7亿。
, 3
. 利用松毛虫群集树皮裂 隙 越冬 的习
性 , 于越冬期采集大量幼虫 , 饲养至 5 一 6 龄
时 , 接种病毒 , 复制多角体。 养虫方法 :
( 1 ) 冬季加温养虫。 饲养室四壁和屋顶
蒙一层塑料薄膜保温 , 保持充足光线 。 从 12 月
中旬开始养虫 , 加温从 10 ` c 始 , 隔 日递增 I O c ,
增至 25 ’ c时即保持恒温 , 湿度保持 70 一 80 % 。
据两批饲养观察 ,接种前成活率分别为 74 . 7% 、
76
.
5 %

19 8 2年共用 15 0个 劳 动 日 , 收集病死
虫 5 3 , 0 5 3头 , 提 取 多角体 2 7 4 , 5 9 2 . 8亿 , 平均
每劳动 日复制多角体 1 , 8 3 0 . 6亿 。
( 2 ) 越冬幼虫开始活动取食时在室温下
养虫。 1 9 7 9年共 30 个劳动 日 ,收得病死虫8 , 7 18
条 , 提取多角体 61 , 4 8 6亿 , 平均每劳动日复制
多角体 2 , 0 49 . 5亿 。
二 、 多角体的提取
赤松毛虫质型多角体病毒提纯较困难 , 我
协 们采用以下两种提取方法 :
1
. 供接种用的多角体 , 要求纯度高 , 无
杂菌。 采用人工挑取病死虫中肠 , 经组织捣碎
机处理后 , 双层纱布过滤 , 滤液以 3 , 5 0 转 /分
的速度 , 离心巧分钟 , 取沉淀液 , 每毫升多角
体 含 量 50 一 80 亿。 多角体液呈乳白色 、 无臭
味 、 无杂菌 , 略有少量杂质 。 一般熟练工人每
夭可取中肠 1 , 30 0条左右。 据 1 , 40 0条老熟幼虫
提取量测定 , 平均每条含多角体 5 . 8亿 。
2
. 供生产防治用的多角体 , 是将病死虫
直接用组织 捣 碎 机 捣碎 , 加适量无菌水稀释
后 , 用 32 目铁纱过滤 , 除去粗渣 。 滤液经双层
纱布 、 18 0目铜筛过滤 , 最后滤液经 L x J一亚型
沉淀机以 2 , 5 0 一 3 , 0 0 转 /分的速度 , 离心 15
分钟 , 取沉淀物 , 即为多角体粗提物 。 粗提物
呈褐色 , 略有异味 , 含有杂质。 一个劳动 日可
处理病死虫 4 一 5 斤 。 用这种方法提取多角体
工效高 , 也 比较简便。
三 、 多角体贮存
为了搞清多角体贮存最适方法和条件 , 千
1 98 。一 19 81 年进行了多角体的贮存试验 。 试验
温度分 室 温 、 3 0 ’ e 、 2 2 ` e 、 3一 S O e 、 一 5 ’ e 等
五种 , 多角体分纯多角体悬液和多角体悬液加
5 0%甘油。 试验前用血球计数板测定每毫升 多
角体含量 (供试材料 为 70 . 3亿 /毫升 ) 。 贮存
期自19 8 0年 3 月 6 日至 19 8 1年 3 月 6 日止 , 征
月测定多角体损失率 (见表 1 ) 。 贮存 1 年后
室内进行生物测定 , 按贮存前多角体含量 , 加
水稀释为 1 x 1 0’ 多角体 /毫升浓度喷洒 , 喷洒
农 1 不 同 贮 存 方 法 多 角 体 损 失 率 测 定 结 果
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一 2 9 一
多角体不周保存方法生物洲定结果
病毒致死虫数
(头 )
19 81年 3 月
病毒致死率
(% )
8 4
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0
62
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0
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贮 存 温
(
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G ) 贮 存 方 法 供 试 虫 数(头 ) 试 虫 龄 期
多角体悬液加50 % 甘油 3
5一 8
多 角 体 悬 液 3
5一6
多角体悬液加拍 %甘油
5一6
多 角 体 悬 液
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多角体悬液加50 %甘油
5一 6
多 角 体 悬 液
5一 6
多角体悬液加 5 0 % 甘油
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多 角 体 悬 液
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量均为 30 毫升 。 供试虫为 3龄 、 5一 6龄马尾
松毛虫幼虫 , 每组试虫 50 头 。 喂饲病毒污叶 48
小时 , 后换新鲜松叶饲养 , 病虫逐条镜检 , 含
有大量多角体者以病毒致死计 (见表 2 ) 。
多角体贮存一年观察结果 , 多角体贮存与
温度有密切关系 , 在所试温 度 范 围 内 , 低温
保存较好 , 在相同温度下 , 多角体悬液加 50 %
甘油比多角体悬液好 。 贮存一年以内只要将多
角悬液贮存 在 3一 5 ’ c 温 度下即可 ; 如长期贮
存 , 以多角体悬液加 50 %甘油保存在 3一 5℃或
一 S O C温度下最好 。
应用质型多角体病毒控制害虫
日本农林水产省林亚试验场 片桐一正
一 、 引 言
自从第一次在电子显微镜下证明了质型多
角体病毒以来 , 已在 20 0种 昆 虫上发现这种病
毒 , 其中85 %是鳞翅 目昆虫 , 9 %是双翅目昆
虫 , 4 %是膜翅目昆虫 , 其余是鞘翅目昆虫 。
在上述的 20 种中 , 只有不到 10 %被 建 议做为
杀虫剂应用 , 而仅有少数的在实际中应用 。 松
带蛾 ( T h a u m e t o P o e a P i t y o e a m P a ) 的质型多角
体病毒是第一个 。 造成赤松毛虫 ( D e dn r 。 h m su
, P“ “ t“ ib ils ) 萎缩病的一种质型多角体病毒 ,是
一 3 0 一