全 文 ：100W的功率提取效率最好 ,在该功率下微波就足以能穿透整个
萃取体系 , 整个萃取体系(样品内外部)能同等程度地接受微波
辐射。在给定的实验条件中 , 在 10 min效果最好。适量的水分
含量有利于目标物的提取 ,水分含量在 15%时 , 提取效率最好。
表 1　正交实验设计因素与水平
水平 粒度 l/μm 水分 (%) 时间 t/min 功率 P/W
1 124 ～ 160 10 5 100
2 160 ～ 250 15 10 350
3 250 ～ 420 25 15 700
表 2　正交设计及实验数据处理
水平 粒度 l/μm水分 (%)时间 t/min 功率 /W 产率(%)
1 1 1 1 1 0.014
2 1 2 2 2 0.012
3 1 3 3 3 0.013
4 2 1 2 3 0.015
5 2 2 3 1 0.018
6 2 3 1 2 0.017
7 3 1 3 2 0.014
8 3 2 1 3 0.015
9 3 3 2 1 0.016
T1 0.061 0.066 0.069 0.083T2 0.085 0.068 0.072 0.055T3 0.045 0.067 0.071 0.070k1 0.030 0.022 0.025 0.042k2 0.043 0.024 0.036 0.028k
3 0.023 0.023 0.035 0.035Deltak 0.020 0.001 0.011 0.014
　　槲皮素产率(%)=槲皮素的质量(mg)/绞股蓝质量(mg)×100%
综合表 2分析来看 , 在各影响参数中 , 按照对槲皮素提取产
率影响的主次(Deltak大小)来分 , 依次为样品的粒度 、功率 、时间
和水分。而最佳萃取条件应为:粒度 160 ～ 250 μm, 功率为 100
W, 萃取时间为 10 min, 水分含量为 15%。
3.2　MAE、索氏提取法与室温浸渍法的比较 按照 “ 3.1”项优选
的最优条件 , 进行优化实验 , 得到 MAE、索氏提取法和室温浸渍
法 3种方法提取绞股蓝中槲皮素的产率分别为:0.018%,
0.013%和 0.011%, 结果与文献 [ 7]的报道接近。从实验结果看
出:在设定的实验条件下 , 微波辅助提取绞股蓝中槲皮素的提取
产率最高 ,提取绞股蓝中槲皮素的提取率分别比索氏提取法和室
温浸渍法相提高约 46.2%和 63.6%,而且提取时间仅是索氏提
取回流的 1/24倍 , 是室温浸渍法的 1/144倍。因此 , MAE具有
快速高效的特点 ,大大节省了能源。
4　结论
本实验优化了微波辅助萃取绞股蓝中槲皮素的提取条件 , 即
粒度 160 ～ 250μm,水分含量为 15%, 功率为 100W,萃取时间为
10 min。比较研究了 MAE与索氏提取法和室温浸渍法提取绞股
蓝中槲皮素的提取产率 , MAE适合于绞股蓝中槲皮素的提取。
该方法不仅提取率高 ,而且提取时间大大缩短 , 节省了能源 ,是一
种适合于绞股蓝中槲皮素的提取技术。
参考文献:
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大学学报 , 2003, 34(1):21.
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素的含量 [ J] .中成药 , 2007, 29(8):1193.
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报 , 1999, 18(2):82.
收稿日期:2008-08-27;　修订日期:2008-11-27
基金项目:河南省重大公益性科研计划项目(No.08110091800);
河南省高校新世纪优秀人才支持计划(No.2006HANCET-08)
作者简介:郑晓珂(1961-),女(汉族),河南开封人 ,现任河南中医学院教
授 ,博士学位 ,主要从事中药活性成分及其作用机理研究工作.
＊通讯作者简介:冯卫生(1960-), 男(汉族),河南林州人 , 现任河南中医
学院教授 ,博士学位 ,主要从事中草药活性成分研究工作.
反相高效液相色谱法测定
不同产地卷柏中阿曼托双黄酮的含量
郑晓珂 , 赵献敏 , 王彦志 , 魏　悦 , 郭永慧 , 冯卫生＊
(河南中医学院 ,河南 郑州　450008)
摘要:目的 建立测定不同产地卷柏中阿曼托双黄酮含量的高效液相色谱法。方法 色谱柱为 AgilentZORBOXSB-C18(250 mm×4.6 mm, 5μm);流动相为乙腈 -0.2%磷酸(40∶60),柱温 30 ℃;流速为 0.8 ml· min-1;检测波长 337 nm。
结果 阿曼托双黄酮含量为 1.197%, 平均回收率为 99.30%, RSD=0.98%(n= 9), 线性范围 0.1 ～ 0.6 μg· ml-1(r=
0.999 8)。结论 该法快捷 、灵敏 、准确 ,可作为评价卷柏药材质量的参考依据。
关键词:卷柏;　阿曼托双黄酮;　高效液相色谱法
中图分类号:R284.1　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2009)06-1408-02
　　卷柏为卷柏科植物卷柏 Selaginelatamariscina(Beauv.)Sp-
ing或垫状卷柏 Selaginelapulvinata(Hook.etGrev.)Maxim)的
干燥全草 ,具有活血通经功效 , 主要用于经闭痛经 、癥瘕痞块 、跌
扑损伤 、崩漏 、便血 、脱肛等 [ 1]病症。根据文献报道 [ 2～ 4] , 卷柏中
主要含有阿曼托双黄酮 、新柳杉双黄酮等化合物 , 具有抗脂质过
氧化和清除自由基的作用 [ 5] , 对溶血性磷脂酰胆碱(LPC)诱导的
血管内皮细胞损伤有保护作用 [ 6] , 其中阿曼托双黄酮的含量最
大。采用反相高效液相法对卷柏药材指纹图谱研究的报道已见 ,
但未见不同产地卷柏药材中阿曼托双黄酮含量测定的报道。 本
研究采用高效液相色谱法测定了全国 10批不同产地卷柏中阿曼
托双黄酮的含量。
1　仪器与试药
1.1　仪器 岛津 UV-2201型紫外分光光度计;ShimadzuLC-
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时珍国医国药 2009年第 20卷第 6期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2009VOL.20NO.6
10AT型高效液相色谱仪;SPD-10A型紫外检测器;AB204 -N
万分之一电子天平;AE240十万分之一电子天平;DZKW-4电子
恒温水浴锅(北京中兴伟业仪器有限公司), 旋转蒸发器 SB-
1000(上海爱朗仪器有限公司)。
1.2　试药 卷柏药材产地分别为安徽 、北京 、河南 、新疆 、山东 、
云南 、湖北 、河北 、江西 、甘肃 , 共收集 10批样品 , 经过河南中医院
药学院生药学科陈随清教授鉴定为卷柏科卷柏属卷柏 Sela-
ginelatamariscina(Beauv.)Sping的全草。阿曼托双黄酮为本实
验室自制 , 纯度达到 99%以上。乙腈为色谱纯 , 水为超纯水 , 其
它试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2.1　色谱条件及系统适应性实验 色谱柱为 AgilentZORBOX
SB-C18(250mm×4.6mm, 5 μm)。流动相为乙腈 -0.2%磷酸
(40∶60)。流速 0.8 ml· min-1;检测波长 337 nm;柱温 30 ℃;
进样量 10μl。
测定阿曼托双黄酮对照品溶液和卷柏药材供试品溶液 ,色谱
图见图 1。如图 1所示 ,阿曼托双黄酮与相邻杂质峰的分离度大
于 2,理论塔板数按阿曼托双黄酮峰计算大于 3 000。
2.2　对照品溶液的制备 精密称取干燥恒重的对照品 2.50 mg,
置 50ml容量瓶中 , 加 95%乙醇超声溶解 ,定容至刻度 , 摇匀 ,用
0.45 μm的微孔滤膜过滤 ,作为对照品溶液(50μg· ml-1)。
2.3　供试品溶液的制备 精密称取卷柏药材(过 3号筛)粉末约
4.00 g,置 100 ml圆底烧瓶中 , 精密加入 95%乙醇 40ml, 85℃回
流 2次 , 2 h/次 ,提取液回收溶剂 , 真空干燥。精密称取干燥恒重
的乙醇提取物约 3.00 mg, 置 100ml容量瓶中加 95%乙醇定容至
刻度 , 摇匀 ,用 0.45 μm的微孔滤膜过滤 ,作为供试品溶液 。
2.4　线性关系考察 精密吸取对照品溶液 0, 2, 4, 6, 8, 10, 12 μl
依次进样 , 按上述色谱条件测定 , 记录色谱图 , 以峰面积(Y)对浓
度(X)进行线性回归 , 得回归方程为:Y = 2 346 639 X +
6 411.314(r=0.999 8)。结果表明阿曼托双黄酮在(0.1 ～ 0.6)
μg· ml-1浓度范围内线性关系良好。
2.5　 精密度实验 精密吸取 50 μg· ml-1对照品溶液 , 重复进
样 6次 , 10 μl/次 , 测定峰面积值 ,计算相对标准差 , 结果 RSD=
0.92%,显示精密度良好。
1.阿曼托双黄酮　a-样品　b-对照品
图 1　HPLC图谱
2.6　重复性实验 精密称取同一样品(产地:河南)适量 ,照 “ 2.3”
方法分别制备供试品溶液 6份 ,照 “ 2.1”法进行测定 , 结果平均含
量为 1.19% , RSD=0.13%,表明本测定方法的重复性良好。
2.7　稳定性实验 取同一样品(产地:河南)适量 ,照 “ 2.3”方法
制备供试品溶液 ,室温下放置 0, 2, 4, 6, 8, 12, 24, 48h进样 10 μl,
依法测定阿曼托双黄酮的峰面积值 , 计算相对标准偏差 , RSD为
0.35%。结果表明 , 供试品溶液室温下 48 h内稳定。
2.8　加样回收率实验 照 “ 2.3”方法制备供试品(产地:河南)乙
醇提取物 ,精密称取已知含量的卷柏乙醇提取物样品 9份 , 每份约
3.00mg, 分为 3组, 每组中分别加入精密称定的阿曼托双黄酮 0.
10, 0.20, 0.30 mg,按 “ 2.3”项下供试品溶液的制备方法配制回收
率供试品溶液, 按 “2.1”项下色谱条件测定 , 计算加样回收率。结
果见表 1。结果表明, 阿曼托双黄酮回收率实验良好。
表 1　阿曼托双黄酮回收率实验
序号 样品称样量m/mg
样品中总
黄酮量 m/mg
加入对照品
的量 m/mg
测得总黄酮
量 m/mg
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
1 3.00 0.409 5 0.508 8 99.30
2 3.10 0.423 2 0.10 0.521 0 97.85 98.63 0.74
3 2.90 0.395 9 0.494 6 98.75
4 3.00 0.409 5 0.607 5 99.00
5 3.10 0.423 2 0.20 0.624 2 100.53 99.18 1.27
6 2.90 0.395 9 0.591 9 98.03
7 2.90 0.395 9 0.693 9 99.35
8 3.00 0.409 5 0.30 0.710 0 100.17 99.28 0.93
9 3.00 0.409 5 0.704 5 98.33
　　n= 9
2.9 　样品含量测定 分别精密称取 10批不同产地卷柏药材粉
末各 4.0 g,按 “ 2.3”项方法制备供试品溶液 , 照 “ 2.1”方法测定 ,
平均含量为 0.780%。结果见表 2。
3　讨论
3.1 　提取方法的选择 在制备样品溶液时 , 比较水煮 、超声 、回
流等不同提取方法 , 发现回流提取方法得到的阿曼托双黄酮的含
量较高 , 故采用回流提取的方法对样品进行处理。
3.2　测定波长的选择 取阿曼托双黄酮对照品加流动相在
190 ～ 800 nm波长范围内测定吸收光谱 , 结果对照品阿曼托
双黄酮溶液在 270 nm和 337 nm处均有较大吸收 , 由于 270
nm靠近溶剂末端吸收 , 容易对样品测定造成干扰 , 故选 337
nm为测定波长 。
表 2　样品含量测定结果
序号 产地 含量(%) 平均含量(%) RSD(%)
1 安徽 0.225
2 北京 0.674
3 河南 1.021
4 新疆 0.794
5 山东 1.197 0.780 1.02
6 云南 0.422
7 湖北 0.914
8 河北 0.574
9 江西 0.880
10 甘肃 1.10
　　n=6
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2009VOL.20NO.6 时珍国医国药 2009年第 20卷第 6期
3.3　流动相的选择 在测定阿曼托双黄酮含量时 , 参考文献 [ 7]的
方法 , 虽然对照品出峰时间短 ,但样品峰的分离不好 ,个别样品在
阿曼托双黄酮保留时间处有吸收干扰 ,为了避免此现象出现 , 根
据阿曼托双黄酮为弱酸性化合物的性质 , 在选择流动相时用
0.2%磷酸作为无机相 ,通过比较甲醇和乙腈的出峰效果 , 最终选
择乙腈作为有机相 , 使峰的分离度大大提高。
在加样回收率考察中 , 选择高 、中 、低 3个剂量组 , 结果平均
回收率均达到 98%以上 , RSD均小于 1.5, 说明此方法可用于卷
柏的质量控制。
测定了 10批不同产地卷柏药材中阿曼托双黄酮的含量 , 结
果平均含量为 0.780%,最低为安徽产只有 0.225%, 最高为山东
产含量为 1.197%,不同产地卷柏药材中阿曼托双黄酮的含量有
差异 , 说明卷柏中阿曼托双黄酮的含量受地质环境 、气候的影响 ,
这为环境因素与药材有效成分含量之间的相关性研究奠定了良
好的基础。
参考文献:
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收稿日期:2008-09-18;　修订日期:2008-12-30
基金项目:海南省自然科学基金(No.20702);
海南省教育厅高等学校科学研究资助性项目(No.Hjkj2008-05)
作者简介:范春蕾(1979-),女(汉族),四川南充人 ,现任海南大学公共实
验中心讲师 ,硕士学位 ,主要从事环境分析及药物分析研究工作.
氢化物原子荧光法测定汞在土壤 -槟榔间的迁移
范春蕾 1 , 张敬迎2 , 景修宽 2
(1.海南大学公共实验中心 ,海南 海口　570228;　2.海南大学理工学院 , 海南 海口　570228)
摘要:目的 研究四大南药之一的槟榔不同器官重金属汞的含量。方法 采用氢化物 -原子荧光分光光度法测定土壤及
槟榔不同器官汞的含量。结果 重金属在槟榔不同器官内分布为根 0.089 2 mg/kg, 花 0.113 mg/kg, 叶 0.078 3 mg/kg和
果实 0.040 2 mg/kg, 土壤中汞迁移到槟榔根 、花 、叶 、果实的迁移率分别为 15.3%, 19.4%, 13.4%, 6.93%。结论 槟榔
不同器官汞的含量花 >根 >叶 >果实 , 海南地理环境有利于槟榔的规范化种植。
关键词:重金属;　汞;　迁移;　槟榔;　土壤
中图分类号:R288;S567　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2009)06-1410-02
TransferofMercuryinSoil-betelnutSystemwithAtomicFluorescenceSpectrophotome-
ter
FANChun-lei1 ,ZHANGJing-ying2 , JINGXiu-kuan2
(1.PublicLabCenterofHainanUniversity, Haikou, Huainan570228, China;2.ScienceandEngineringCol-
legeofHainanUniversity, Haikou570228, China)
Abstract:ObjectiveToascertaintheHgcontentofdifferentorgansofbetelnut.MethodsTheHgcontentofdifferentorgans
andsoilwasdeterminedbyatomicfluorimetry.ResultsThemercurycontentofdifferentorgansofbetelnutwasroots(0.0892mg/
kg), blossom(0.113 mg/kg), leave(0.0783 mg/kg)andfruits(0.0402 mg/kg)respectively;percentageoftransferofmercury
fromsoiltoroots, blossom, leaveandfruitswas15.3%, 19.4%, 13.4% and6.93%respectively.ConclusionTheHgcontentof
diferentorgansofbetelnutwereblossom >roots>leave>fruitsanditisgoodenvironmentsettinginHainanprovinceforGAP
plantingofbetelnut.
Keywords:Heavymetal;　Mercury;　Transfer;　Betelnut;　Soil
　　近年来 , 有研究者报道了土壤 -植物系统中汞的迁移 [ 1～ 2] 。
目前 , 对具有区域特色的海南产南药中的重金属的研究主要集中
于海南本地产与市售中药材中重金属含量的比较上 [ 3 ～ 4] 。虽然
朱维晃 [ 5]等对海南多个土壤样品中的几种重金属的含量以及蔬
菜中的重金属含量分别进行了测定 ,但是未系统地对土壤重金属
含量和南药中该元素的含量作相关分析 , 也没有涉及对土壤与
南药不同器官的重金属含量作相关分析。
众多文献 [ 6 ～ 7]报道重金属在土壤中主要累积在耕层 ,纵向向
下迁移微弱 ,因此 , 本实验主要研究了土壤(0 ～ 20cm)中汞在槟
榔不同器官的迁移情况。现报道如下。
1　仪器与试剂
1.1　仪器 AFS-820型双道氢化物原子荧光光度计(北京万拓
仪器公司);汞编码空心阴极灯(北京真空电子技术研究所);分
装式高压密封消化罐:内杯为 PTFE材料(内容量 70 ml, 沈阳森
华理化仪器研究所);电热恒温鼓风干燥箱(上海一恒仪器有限
公司)。
1.2　试剂 试验所用试剂浓硝酸 、浓盐酸 、氢氟酸均为优级纯 ,
其余为分析纯;实验所用所有玻璃器皿 、塑料瓶等都用 1 +
1HNO3浸泡 24 h后 ,再用二次蒸馏水清洗;水为二次蒸馏水;国家标准物质杨树叶(GBW 07604)由地矿部物化探研究所提供;槟
榔采集于海南省万宁市;土壤样品自然风干后(植物样品则将
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时珍国医国药 2009年第 20卷第 6期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2009VOL.20NO.6