全 文 ：扁蓄体外抑菌作用及其绿原酸含量测定
　收稿日期:2010-07-20
　作者简介:张蓉(1982-),女 ,汉族 ,硕士 ,主要从事中药材理化性质的测试及中药抗菌研究。
　通讯作者:魏希颖 ,女 ,陕西师范大学生命科学学院副教授。主要从事中药新药的研发工作。
张　蓉1 , 魏希颖2
(1.西安广播电视大学 , 陕西 西安　710002;2.陕西师范大学 , 陕西 西安　710062 )
摘　要:采用 K-B 滤纸片法对扁蓄的不同提取部分进行了体外抑菌试验并用紫外分光光度法对扁蓄中绿原
酸含量进行了测定。结果表明不同提取成分对金黄色葡萄球菌 、大肠杆菌均有不同程度的抑制作用 ,而对黑
曲霉 、啤酒酵母 、产黄青霉无抑制作用。含量测定表明醇提法所得绿原酸为 0.3925%, 明显高于水提法所得
总绿原酸 0.3629%。
关键词:扁蓄;体外抑菌;绿原酸;含量测定
　　扁蓄(Polygonum av iculare L .var.avicu-
lare)为蓼科(Po lygonaceae)蓼属一年生草本植物
全草 ,又名多茎扁蓄 、异叶扁蓄 、扁竹 、竹叶草 、扁
竹蓼 、乌蓼 、牛鞭草等[ 1] 。扁蓄性寒 、味苦 ,全草入
药 ,具有清热利尿 、解毒驱虫 、消炎 、止泄等功
效[ 2 , 3] 。早在《本草纲目》中就有记载 ,用于“治霍
乱 ,黄疸 ,利小便 。”现民间广泛用其治疗泌尿系统
的感染 ,结石及肾炎等疾病[ 4] 。现代药理学研究
表明扁蓄全草提取物具有利尿 、降压 、抗菌等作
用。临床上主要用于细菌性痢疾 、急性肠炎及阴
囊鞘膜积液的治疗[ 5] 。
绿原酸是一种重要的生理活性物质 ,它是许
多药材和中成药的主要有效成分之一 ,具有抗菌 、
抗病毒 、升高白细胞 、保肝利胆 、抗肿瘤 、降血压 、
降血脂[ 6] 清除自由基[ 7] 等作用。扁蓄化学成分主
要有槲皮素 、咖啡酸 、没食子酸 、绿原酸 ,色氨酸
等[ 8] 。为了进一步开发利用该药材 ,笔者通过水
煮醇沉法和乙醇冷浸法进行提取 ,然后用不同试
剂进行萃取 ,得扁蓄的不同提取部分 ,对其抑菌作
用做了测试 ,并用紫外分光光度法对扁蓄中绿原
酸进行了初步的含量测定 。从而为扁蓄的临床应
用提供一定的科学依据。
1　试验材料与仪器
1.1　样品来源
扁蓄于采自西安市长安区田间地头 ,经陕西
师范大学生命科学学院植物分类教研室鉴定 。
1.2　菌种来源
金黄色葡萄球菌(S taphylo coccus aureus),
大肠杆菌(Escherichia coli),啤酒酵母(Saccha ro-
myces carlsbergensis)黑曲霉(A spergi llus ni-
ger),产黄青霉(Penicillium ch ry sogenum)均由陕
西师范大学生命科学学院微生物实验室提供 。
1.3　仪器与试剂
紫外可见分光光度计 , T U-1800型 ,北京普
析通用仪器有限责任公司;旋转蒸发仪 , RE -
52AA ,上海亚荣生化仪器厂生产;隔水式电热恒
温培养箱 ,PYX-DHS -50×65 ,上海跃进医疗
器械一厂制造;电热鼓风干燥箱 ,DL102型 ,天津
市实验仪器厂制造;手提式压力蒸汽消毒器 , YX
-280型 ,上海医疗器械工业公司江阴医疗设备
厂;镀铬游标卡尺 ,型号(0-125 mm)×0.02 ,西
安工具厂制造;M -H 琼脂(Mueller-Hinton琼
脂):北京奥博星盛生物技术责任有限公司生产
石油醚 ,乙酸乙酯 , AlCl3 ,醋酸-醋酸钠缓冲液 ,
甲醇 ,乙醇均为分析纯;
2　方法
2.1　样品的制备
2.1.1　水提部分药液的制备　取干燥全草 25 g
粉碎 ,水浴 80 ℃煮四次 ,每次1 h ,合并水煮液 ,过
滤 ,滤液浓缩至 100 m l。冷却后加 95%乙醇 30
ml静置过夜过滤并挥干乙醇 ,后用石油醚萃取 ,
石油醚层减压回收溶剂 ,加水定容至 25 ml灭菌
备用 。水层用乙酸乙酯萃取得乙酸乙酯层和水
层 ,乙酸乙酯层减压回收溶剂得浸膏 ,加水摇匀定
容至 25 m l灭菌备用。剩余水层浓缩至 25 ml灭
菌备用。
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2.1.2　醇提部分药液的制备　取干燥全草 25 g
粉碎 ,70%乙醇浸 4 d ,过滤回收乙醇药液浓缩至
100 ml。浓缩液用石油醚萃取得石油醚层和水
层 ,石油醚层减压回收溶剂 ,加水定容至 25 ml灭
菌备用。水层用乙酸乙酯萃取得乙酸乙酯层和水
层 ,合并乙酸乙酯层减压回收溶剂得浸膏 ,加水摇
匀定容至 25 m l灭菌备用。剩余水层浓缩至 25
ml灭菌备用 。
2.2　抑菌作用观察
2.2.1　菌悬液的制备　选取上述五种菌的斜面
菌种 ,用无菌水分别洗脱于无菌试管中 ,做好标记
后 ,用镜检计数法计数 ,并将其稀释至:金黄色葡
萄球菌 2.5×1011 -3.5×1011/ l ,大肠杆菌 2×
1010 -4 ×1010/ l[ 9] , 啤酒 酵母 2 ×1010 -
5×1010/ l ,黑曲霉﹑产黄青霉孢子为 5 ×109 -
1×1010/ l备用。
2.2.2　培养基制备　用于培养细菌﹑酵母菌﹑
霉菌的 M -H 琼脂培养基﹑麦氏培养基及查氏
(Czapek)培养基的制备均参照文献[ 10] 方法配制。
2.2.3　操作方法　用手持式打孔器将干净的滤
纸制成直径 6 mm 的小圆纸片 ,干热灭菌后 ,备
用。用无菌的 1 m l移液管吸取菌悬液 1滴置于
倒好培养基的培养皿中央 ,涂布均匀 。滤纸片浸
于药液后 ,用无菌的镊子夹取并置于已制备好的
含菌培养皿中 ,然后放入 37 ℃(真菌 28 ℃)恒温
培养箱培养 24h ,测量抑菌圈的直径 。共 8种药
液 ,每一种药液 4个培养皿 ,其中 1个作对照 。每
个培养皿上贴 3片滤纸 ,结果取平均值 。
2.3　绿原酸含量测定
2.3.1　对照品溶液的制备　精密称取绿原酸标
准品 6 mg ,置于 50 m l容量瓶中加甲醇至刻度 ,
摇匀备用 。
2.3.2　供试品溶液的制备 　水提:取干燥全草
10 g 粉碎 ,水浴 80 ℃煮 4次 ,每次 1 h ,合并水煮
液 ,过滤 ,滤液浓缩至 100 m l。冷却后加 95%乙
醇 30 ml静置过夜过滤并挥干溶剂得干品 ,加甲
醇定容至 100 m l备用。
醇提:取干燥全草 10 g 粉碎 , 70%乙醇浸 4
d ,过滤回收溶剂得干品 ,加甲醇定容至 100 m l
备用 。
2.3.3　最大波长的选择　精密吸取对照品溶液
1 m l放入 5 m l 容量瓶 , 甲醇定容至 5 ml。再
做一空白对照 ,在 300-400 nm 扫描结果如下
图 1。
图 1　绿原酸含量测定最大波长的选择
从图 1可以看出在 330 nm 处有最大吸收 ,故
选择 330 nm 为测定波长。
2.3.4　线性关系考察　精密吸取对照品溶液0.1
ml 、0.2 m l 、0.3 ml 、0.4 m l 、0.5 ml 、0.6 m l置于6
个 5 ml容量瓶中 ,分别加入甲醇定容至 5 m l ,同
法制空白对照 。在 330 nm 处测定吸收度 ,以浓
度为纵坐标 ,以吸收度为横坐标作回归曲线 。
表 1　绿原酸含量测定线性关系考察
浓度(mg/ ml) 吸收度 A
0.0024 0.184
0.0048 0.329
0.0072 0.424
0.0096 0.519
0.0120 0.641
0.1440 0.801
图 2　绿原酸含量测定线性关系考察
回归方程为 Y =49X +0.0714 (r=0.992)
得在 0.0024-0.144 mg/ml之间线性关系良好 。
2.3.5　精密度实验　精密吸取对照品溶液放入
5 m l容量瓶 ,找线性关系考察中溶液配制法配制
溶液 ,330 nm 处重复测量吸收度 5次 ,结果如下:
表 2　绿原酸含量测定精密度实验
实验次数 吸收度 A
1 0.773
2 0.741
3 0.741
4 0.756
5 0.736
得:相对标准偏差 2.02469%
2.3.6　稳定性实验　取标对照品溶液如精密度
实验中配制法配制溶液 , 330 nm 处每隔 10 min
测量一次 ,结果如下:
·65·张　蓉等:扁蓄体外抑菌作用及其绿原酸含量测定
表 3　绿原酸含量测定稳定性实验
时间(min) 吸收度 A
0 0.798
10 0.794
20 0.796
30 0.796
40 0.795
50 0.801
60 0.804
70 0.806
得:相对标准偏差 0.312549%
2.3.7　绿原酸含量测定　精密吸取供试品溶液
0.1 ml放入 5 m l容量瓶 ,甲醇定容至 5 ml ,同法
制不加供试品溶液的空白对照 ,在 330 nm 处测
定吸收度 ,结果如下:
表 4　绿原酸含量测定结果(n=3)
样品 吸收度 A 含量(mg/ ml)百分含量(%)
水提液 0.427 3.629 0.3629
醇提液 0.456 3.925 0.3925
3　结果
3.1　抑菌结果
表 5　水提液及不同试剂萃取部分抑菌效果
菌种 抑菌圈直径(mm)原液 石油醚层 乙酸乙酯层 水层
金黄色葡萄球菌 8.347 8.149 7.640 7.190
大肠杆菌 8.933 8.286 7.824 8.888
啤酒酵母 0 0 0 0
黑曲霉 0 0 0 0
产黄青霉 0 0 0 0
表 6　醇提液及不同试剂萃取部分抑菌效果
菌种 抑菌圈直径(mm)原液 石油醚层 乙酸乙酯层 水层
金黄色葡萄球菌 10.335 7.800 8.580 8.600
大肠杆菌 8.393 8.200 8.933 7.260
啤酒酵母 0 0 0 0
黑曲霉 0 0 0 0
产黄青霉 0 0 0 0
由表 6可知 ,药液对金黄色葡萄球菌及大肠
杆菌均有抑菌效果 ,对啤酒酵母 、黑曲霉 、产黄青
霉无抑菌效果。醇提液抑菌效果好于水提液效
果 ,原液的抑菌效果较好 。
3.2　含量测定结果
表 7　扁蓄提取液含量测定结果
样品 绿原酸含量(%)
水提液 0.3629
醇提液 0.3925
由表 7可知 ,醇提绿原酸含量明显高于水提
液。
4　讨论
(1)由本次实验可知 ,扁蓄提取液对所试验的
大肠杆菌 、金黄色葡萄球菌均有明显的抑制作用。
在相同培养条件下 ,根据抑菌圈的大小可以判断
试验菌被抑制的程度为:原液的抑菌效果较好 ,醇
提液抑菌效果好于水提液效果 。这一结果将为扁
蓄临床应用于抗菌消炎提供一定的科学依据 。
(2)由含量测定结果可知醇提法所得提取液
绿原酸的含量上明显高于水提法 ,所以在制定提
取工艺时建议采用醇提方法。
(3)本实验将为扁蓄的临床及综合开发利用
提供一定的科学依据 。
参 考 文 献:
[ 1] 　云南省药材公司编.云南中药资源目录[ M] .北京:
科学出版社 , 1993.97.
[ 2] 　中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志 第
二十五卷 第一分册[ M] .北京:科学出版社 , 1998.
9-10.
[ 3] 　第二军医大学药学系生药教研室.中国药用植物图
鉴[ M] .上海:上海教育出版社 , 1960.829.
[ 4] 　江苏新医学院编.中药大词典[ M] .上海:上海科学
技术出版社 , 1977.2 329-2 331.
[ 5] 　国家中医药管理局中华本草编委会.《中华本草》
(精华本 ,上册)[ M] .第一版.上海:上海科学技术
出版社 , 1998.
[ 6] 　罗铭清.中草药有效成分理化与药理特性[ M] .长
沙:湖南科学技术出版社 , 1982 , 225-226.
[ 7] 　Ohrishi M , et al.Inhibito ry effects of chlo rog enic
acids on lino leic acid pero xida tion and haemo ly sis
[ J] .phy tochemistry , 1994 , 36(3):576-583.
[ 8] 　于兆海 , 孙结.扁蓄的化学成分研究[ J] .中草药 ,
2002 , 33(6):498-499.
[ 9] 　王青牡 , 孙晓鹃.几种防腐抑菌中药的抗菌作用研
究[ J] .江西中医学院学报 , 2001 , 13(1):31-32.
[ 10] 　沈萍 ,范秀容 , 李广武.微生物学实验[ M] .北京:高
等教育出版社 , 1999 , 214-222.
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