全 文 ：文章编号:1008-9926(2006)06-0439-02　　中图分类号:R917　　　文献标识码:A
高效液相色谱法测定青海小叶黑柴胡茎叶中芦丁的含量
黄鹤慧①② ,蔡光明 ,金光洙② ,刘鄂湖 ,周　伟 ,熊晗晖
(①中国人民解放军第 302医院　中药研究所　北京　100039;②延边大学医学院　吉林　延吉　133000)
摘　要:目的　采用高效液相色谱测定青海小叶黑柴胡茎叶提取物中芦丁的含量。方法　色谱柱为 K romasil C18柱 (250mm ×
4. 6mm , 5μm),以乙腈-水(18∶82)为流动相 , 流速 1. 0m l /m in,检测波长 260nm。结果　芦丁的线性范围 0. 200 ～ 2. 00μg, r =
0. 999 9,平均回收率 99. 69%, RSD为 2. 06%。结论　该方法简便 、快速 、准确 , 适用于小叶黑柴胡茎叶的含量测定。
关键词:芦丁;小叶黑柴胡;HPLC
ContentDeterm ination of Rutin in the Aer ial Part of Bupleurum Sm ith ii Wo lff
Var. parvifolium byHPLP
HUANG H e-Hui①② , CA IG uang-M ing, JIN Guang-Zhu② , LIU E-Hu, ZHOU Wei, X IONG Han-Hui
(① Institute o fCh ineseM edic ine, No. 302 Hospita l o f PLA. Be ijing　100039　China)
(②Yanb ianM ed ica lUniversity, Yan ji　133000, Jilin　Ch ina)
ABSTRACT:Ami A h igh-pe rform ance liquid chroma tography me thod w as deve loped to determ ine the content o f
rutin in the aeria l part o fBup leurum sm ithiiW olffVar. parvifolium. MethodsA K romasil C18 co lumn(250mm ×4.
6mm , 5μm)was used. Themob ile phase consisted of aceton itrile and w ate r(18∶82);the flow ratew as 1. 0m l /m in;
the de tec tive w avelength w as 260nm. Results The linear range of ru tin w as 0. 200 ～ 2. 00μg, ( r =0. 999 9). The
average recovery w as 99. 69% (RSD =2. 06%). Conclusion The me thod w as simp le, quick , accura te and suit-
able fo r quality contro l o f the ae ria l part of Bup leurum sm ithiiW o lff Var. parvifolium.
KEYWORDS:Rutin;Bupleurum Sm ith iiWolff Var. parvifolium ;HPLC
　　小叶黑柴胡 (Bup leurum sm ith ii Wo lff Var .
parvifolium )为伞形科柴胡属植物 ,主要分布于我国
的甘肃 、青海 、宁夏 、西藏等地。以往对小叶黑柴胡
的研究多集中于根及根茎部分 ,而其干燥茎叶部分
经药理实验证明具有明显的解热 、抗炎 、镇痛等作
用 [ 1] ,化学成分经研究发现主要包括黄酮及其苷类
(如:槲皮素 、芦丁等)、木脂素类 、香豆素类 、少量皂
苷类等 [ 2] 。目前尚未见有小叶黑柴胡茎叶中芦丁
含量及其测定方法的报道 ,因此笔者采用高效液相
色谱法对小叶黑柴胡茎叶中芦丁含量测定进行了方
法学研究 ,为进一步开发利用小叶黑柴胡这一丰富
药材资源并有效地对其进行质量控制提供了依据。
1　仪器与试药
1100高效液相色谱仪 , DAD检测器 ,色谱工作
站 (惠普公司 ), KQ-500B型超声波清洗器 (昆山市
超声仪器有限公司 ), AB265-S型电子天平 (梅特勒-
托利多仪器有限公司 )。乙腈为色谱纯 ,水为纯化
水 ,小叶黑柴胡药材 [产地分别为西宁市湟中县 、大
通县 、湟源县 ,均为 9月份采收 ,批次 1、2、3。经 302
医院中药研究所所长肖小河教授鉴定为小叶黑柴胡
(Bupleurum sm ithi iWolff. Var parvifolium )] ,芦丁
对照品 (供含量测定用 , 中国药品生物制品检定
所)。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件　色谱柱 K romasil C18(250mm ×4. 6
mm , 5μm);流动相:乙腈-水 (18∶82);流速:1. 0m l /
m in;检测波长:260nm;柱温为室温 。
2. 2　溶液的制备　(1)对照品溶液的制备　精密称
取干燥至恒重的芦丁对照品适量 ,置量瓶中 ,加甲醇
溶解制 0. 100mg m l-1的溶液 ,即得 。 (2)供试品溶液
439 　解放军药学学报　第 22卷第 6期　　高效液相色谱法测定青海小叶黑柴胡茎叶中芦丁的含量　　　黄鹤慧　　
① 作者简介:黄鹤慧(1982-),女 ,吉林吉林人 ,硕士。研究方向:药物分析。 Tel:(010)66933324;E-m ail:huanghehu i2006@ yah oo. com. cn
　　通讯作者:蔡光明(1953-),男 ,湖南浏阳人 ,研究员 ,硕士生导师。研究方向:药物分析。 Tel:(010)66933323;E-m ail:cgm1004@ vip. si-
na. com
的制备　精密称取药材粗粉 1g,置具塞锥形瓶中 ,精
密加入甲醇溶液 25m l,称定重量 ,超声处理 30m in,放
冷 ,再称定重量 ,用甲醇补足至原重 ,摇匀 ,微孔滤膜
(0. 45μm)滤过 ,取续滤液作为供试品溶液。
2. 3　标准曲线的制备　精密吸取芦丁对照品溶液
(0. 100mg m l- 1)2、5、 10、 15、20μl,注入液相色谱
仪 ,按拟定色谱条件测定其峰面积。以芦丁进样量
(X)为横坐标 ,峰面积 (Y)为纵坐标 ,进行线性回
归 ,得回归方程为
Y=1 527. 5X+17. 644, r =0. 999 9
结果表明 ,芦丁对照品在 0. 200 ～ 2. 00μg范围
内线性关系良好 。
2. 4　精密度试验　取芦丁对照品溶液(0. 100mg
m l
-1)连续进样 5次 ,每次 10μl,测定 ,结果芦丁峰面
积的 RSD为 0. 87%,表明精密度良好。
2. 5　稳定性试验　取供试品溶液 ,在相同色谱条件
下 ,分别在 0、2、4、6、8、12h进样 10μl,测定芦丁峰
面积 ,结果芦丁峰面积 RSD为 0. 96%。表明供试品
溶液在 12h内稳定。
2. 6　重复性试验　取同一样品 5份 ,制备供试品溶
液 ,进样测定 ,结果芦丁峰面积 RSD 为 1. 03%。表
明该方法的重复性较好。
2. 7　加样回收率试验　精密称取已知含量的样品
约 1g,加入浓度约 0. 260mg m l- 1的芦丁对照品溶液
5m l,按上述供试品溶液的制备方法操作 ,测定含量 ,
计算回收率 ,得平均回收率为 99. 69% , RSD 为
2. 06%,结果见表 1。
表 1　回收率试验结果 ( n =5)
Tab1　Results o f determ ina tion of the average recoveries( n =5)
已知量
(m g)
加入量
(m g)
测得量
(mg)
回收率
(%)
x
(%)
R SD
(%)
1. 361 1. 321 2. 652 97. 73
1. 252 1. 302 2. 534 98. 46
1. 270 1. 292 2. 582 101. 55 99. 69 2. 06
1. 313 1. 310 2. 603 98. 47
1. 284 1. 330 2. 644 102. 26
2. 8　样品的含量测定　取对照品溶液与供试品溶
液 ,各 10μl,进样 , 测定 3批小叶黑柴胡样品中芦丁
含量 ,结果见表 2。对照品及供试品色谱图分别见
图 1。
3　讨论
3. 1　我们比较了超声提取 、热回流提取等提取方法
对芦丁的提取效率 ,结果表明 ,超声处理测得芦丁的
含量同热回流法所得含量相当 。故本文采用甲醇超
声 30m in作为提取方法 ,样品处理简单 ,超声后直接
滤过进样 ,无需其它步骤 ,结果准确度高 ,回收率好。
3. 2　由于选用了二极管阵列检测器 ,笔者对芦丁对
照品色谱峰在 200 ～ 400nm范围内进行光谱扫描。
从光谱图可以看出 ,芦丁有 3个特征吸收峰:208、
260、361nm ,本文选定 260nm作为检测波长 ,在该波
长下测定时 ,色谱峰对称 ,干扰少 。
3. 3　流动相分别选择了甲醇-水溶液 、甲醇-0. 4%
磷酸溶液 、乙腈-水溶液等不同比例进行洗脱 ,结果
当流动相以乙腈-水(18∶82)洗脱时 ,芦丁色谱峰与
前后未知峰能达到基线分离 ,峰形良好 ,分离效果较
佳。
表 2　3批小叶黑柴胡中芦丁含量测定结果( n =3)
Tab2　R esults of determ ination o f rutin in 3 batch( n =3)
批次 芦丁含量(m g g- 1)
1 1. 32
2 1. 27
3 0. 55
A对照品　B样品　 1芦丁
图 1　HPLC色谱图
F ig1　 HPLC Chrom a togram of Rutin standard
3. 4　芦丁是黄酮类成分中药效很好的活性成分 ,从
3批小叶黑柴胡茎叶的芦丁含量中可以看出 ,湟中
县和大通县的小叶黑柴胡药效可能会较好 ,为小叶
黑柴胡的资源调查和质量控制提供了基础研究。
参考文献:
[ 1] 　赵玉珍 ,陶上乘 ,王英华 ,等. 小叶黑柴胡药理作用的进一步研
究 [ J] . 中药材 , 1998, 21(6):307
[ 2] 　单　宇 ,冯　煦 , 董云发 , 等. 柴胡属植物化学成分及药理研
究新进展 [ J] . 中国野生植物资源 , 2004, 23(4):5
(收稿日期:2006-06-08;修回日期:2006-10-10)
(本文编辑　梁爱君)
440 　解放军药学学报　 2006年 12月　第 22卷　第 6期　　　Pharm J Ch in PLA　Vol 22　 No6　Dec 2006