全 文 ：UPLC法测定小叶黑柴胡的根中柴胡皂苷 a、d含量*
汤芳玲1，2，付珣1，2，朱珍真1，蔡光明1＊＊，袁波2，张卓勇3
(1．中国人民解放军第 302 医院全军中药研究所，北京 100039;
2．沈阳药科大学药学院，沈阳 110016;3．首都师范大学，北京 100048)
摘要 目的:建立超高效液相色谱法检测小叶黑柴胡的根中柴胡皂苷 a、d 含量。方法:采用 Waters Acquity UPLC 系统，使用
ACQUITY UPLC BEHTM C18(50 mm ×2. 1 mm，1. 7 μm)色谱柱，流动相为乙腈 －水，梯度洗脱，流速 0. 6 mL·min
－1，检测波长
203 nm，柱温 30 ℃。结果:柴胡皂苷 a线性范围为 0. 059 ～ 1. 180 μg(r = 0. 9998) ，平均回收率为 96. 7%(RSD = 1. 3%，n = 6) ;
柴胡皂苷 d线性范围为 0. 112 ～ 2. 230 μg(r = 0. 9997) ，平均回收率为 98. 7%(RSD = 1. 5%，n = 6)。结论:该方法操作简便，
结果准确，可用于小叶黑柴胡的质量控制。
关键词:柴胡;柴胡皂苷 a;柴胡皂苷 d;超高效液相色谱法;含量测定
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:0254 － 1793(2011)09 － 1654 － 04
UPLC determination of saikosaponin a，d in roots of Bupleurum smithii
Wolff var． parvifoliaum Shan et Y． Li*
TANG Fang － ling1，2，FU Xun1，2，ZHU Zhen － zhen1，
CAI Guang － ming1＊＊，YUAN Bo2，ZHANG Zhuo － yong3
(1． China Military Institute of Chinese Materia Medica，302 Military Hospital of China，Beijing 100039，China;
2． Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang 110016，China;3． Captial Normal University，Beijing 100048，China)
Abstract Objective:To establish an UPLC method with Photo Diode Array for simultaneous determination of sai-
kosaponin a，saikosaponin d in roots of Bupleurum smithii Wolff var． parvifoliaum Shan et Y． Li．Methods:The an-
alyses were performed on a Waters Acquity UPLC system，an ACQUITY UPLC BEHTMC18(50 mm × 2. 1 mm，1. 7
μm)column was adopted，the mobile phase consisted of acetonitrile － water with gradient elution at the flow rate of
0. 6 mL·min －1，the detection wavelength was set at 203 nm，and the column temperature was 30 ℃ ． Results:The
linear ranges for saikosaponin a，saikosaponin d were 0. 059 － 1. 180 μg(r = 0. 9998)and 0. 112 － 2. 230 μg(r =
0. 9997) ，with their average recoveries(n = 6)of 96. 7%(RSD = 1. 3%)and 98. 7%(RSD = 1. 5%) ，respective-
ly． Conclusion:The method is simple，rapid and accurate，and can be used for the quality control of Bupleurum
smithii Wolff var． parvifoliaum Shan et Y． Li．
Key words:Bupleurum(Chinese thorowax root) ;saikosaponin a;saikosaponin d;UPLC;assay
小叶黑柴胡 Bupleurum smithii Wolff var． parvifo-
liaum Shan et Y． Li 为伞形科(Umbelliferae)柴胡属
植物，主要分布于我国的青海、宁夏、山西、内蒙古、
河北等地，并作柴胡药用。宁夏、山西等省的地方药
材标准已将其收录。柴胡具有和解退热、疏肝解郁、
升阳举气之功效［1］，柴胡皂苷类成分是其主要活性
成分，目前对小叶黑柴胡研究报道较多的是茎叶的
研究，而北柴胡的质量控制研究主要是通过测定根
部柴胡皂苷的含量及药材的特征图谱研究。王英华
等［2］曾从小叶黑柴胡中分离得到 5 个皂苷和 2 个皂
苷元。对不同品种柴胡中柴胡皂苷的测定已有文献
报道［3 ～ 7］，本文通过建立超高效液相色谱(UPLC)法
测定小叶黑柴胡中柴胡皂苷 a、d的含量对小叶黑柴
胡进行质量控制。UPLC 法具有柱效高，灵敏度高，
分析时间大大缩短等优点。采用闪式提取器进行样
品的提取，具有高效、快速、简便的特点［8，9］，总之，
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＊
＊＊
北京市政府专项基金项目(No:0853279)
通讯作者 Tel:(010)66933323;E － mail:cgm1004@ vip． sina． com
DOI:10.16155/j.0254-1793.2011.09.010
该方法为小叶黑柴胡提供了高效、可行的质量评价
方法。
1 仪器与试药
美国 Waters 公司 ACQUITYTM超高效液相色谱
仪，含高压二元梯度泵、控温自动进样器、二极管阵
列检测器、Empower 2 色谱工作站;JHBE － 20A型闪
式提取器(北京金鼐科技发展有限公司) ，AL204 型
电子分析天平(梅特勒 －托利多有限公司)。
小叶黑柴胡药材，经解放军 302 医院全军中药
研究所肖小河研究员鉴定为小叶黑柴胡 Bupleurum
smithii Wolff var． parvifoliaum Shan et Y． Li的根;对
照品柴胡皂苷 a、d，昆明科翔生物有限公司，纯度
98%;乙腈为色谱纯，Millipore 超纯水，甲醇、氨水为
分析纯。
2 方法与结果
2. 1 溶液的制备
2. 1. 1 混合对照品溶液 精密称取对照品柴胡皂苷
a、d适量，以甲醇制得浓度分别为 0. 118 mg·mL －1、
0. 223 mg·mL －1的混合对照品溶液。
2. 1. 2 供试品溶液 称取药材粉末(过 20 目筛)
1. 0 g，精密称定，置 100 mL烧杯中，加入 5%氨水 －
甲醇 30 mL，用闪式提取器提取 3 次，每次 2 min，合
并提取液浓缩至干，残渣用甲醇定容于 5 mL 量瓶
中，过 0. 22 μm滤膜即得。
2. 2 色谱条件及系统适用性 采用 ACQUITY UPLC
BEHTM C18(50 mm ×2. 1 mm，1. 7 μm)色谱柱，流动相
为乙腈(A)－水(B) ，梯度洗脱(0 ～ 2 min，5% A→
10%A;2 ～3 min，10%A→15% A;3 ～ 5 min，15% A→
20%A;5 ～9 min，20%A→40%A;9 ～11 min，40%A→
45%A;11 ～14 min，45%A→60%A;14 ～ 18 min，60%
A→100%A) ，流速0. 6 mL·min －1，检测波长203 nm，
柱温 30 ℃。在本色谱条件下柴胡皂苷 a、d 的保留
时间分别为 9. 1 和 10. 7 min，2 个成分分离良好，分
离度均大于 1. 5，理论塔板数大于 70000。色谱图见
图 1。
2. 3 线性关系考察 精密吸取混合对照品溶液
0. 5，1，2，4，8，10 μL，进样测定，以峰面积积分值
(Y)对进样量(X，μg)进行线性回归，得柴胡皂苷 a、
d的线性回归方程分别为:
Y = 7. 600 × 105X + 636. 2 r = 0. 9998
Y = 7. 233 × 105X + 1. 672 × 104 r = 0. 9997
结果表明，柴胡皂苷 a 进样量在 0. 059 ～ 1. 180 μg、
柴胡皂苷 d进样量在 0. 112 ～ 2. 230 μg 范围内与峰
面积积分值呈良好线性关系。
图 1 混合对照品(A)和山西阳曲小叶黑柴胡样品(B)超高效液相
色谱图
Fig 1 UPLC chromatograms of mixed reference substances(A)and Bup-
leurum smithii Wolff var． parvifoliaum Shan et Y． Li sample from Yan-
gqu，Shanxi(B)
1．柴胡皂苷 a(saikosaponin a) 2．柴胡皂苷 d(saikosaponin d)
2. 4 检测限和定量限 在上述色谱条件下，测得柴
胡皂苷 a、d 检测限(S /N = 3)分别为 1. 416 ng 和
2. 234 ng，定量限(S /N = 10)分别为 4. 720 ng 和
7. 485 ng。
2. 5 精密度试验 取混合对照品溶液，连续进样 5
次，测定峰面积，结果柴胡皂苷 a、d 的 RSD(n = 5)
分别为 0. 77%和 0. 60%，表明仪器精密度良好。
2. 6 重复性试验 取同一小叶黑柴胡样品，按
“2. 1. 2”项下方法平行制备 6 份供试品溶液，以选
定的色谱条件进行样品含量测定，计算柴胡皂苷 a、
d含量的 RSD分别为 1. 5%和 1. 9%，表明方法重复
性良好。
2. 7 稳定性试验 取同一份供试品溶液分别在 0，
2，4，8，12，24 h进行测定，结果柴胡皂苷 a、d峰面积
的 RSD(n = 6)分别为 0. 97%和 0. 84%，表明供试
品溶液在 24 h内稳定性良好。
2. 8 加样回收率试验 称取已知含量的同一小叶
黑柴胡样品(山西阳曲县)粉末适量，6 份，分别精密
加入柴胡皂苷 a、d 浓度分别为 2. 097 mg·mL －1和
2. 705 mg· mL －1 的混合对照品溶液 1 mL，按
“2. 1. 2”项下方法制备供试溶液，以选定的色谱条
件进样测定。结果样品中柴胡皂苷 a、d平均回收率
(n = 6)分别为 96. 7%和 98. 7%，RSD分别为 1. 3%
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和 1. 5%。
2. 9 样品含量测定 按“2. 1. 2”项下方法制备 10
批样品的供试品溶液，在本文色谱条件下进样测定，
采用外标法计算样品中柴胡皂苷 a、d的含量。通过
对照品的保留时间和二极管阵列检测器的检测结
果，确定了样品中柴胡皂苷 a、d的色谱峰，由测定结
果可见不同产地小叶黑柴胡根中的柴胡皂苷 a 含量
差异较小，而柴胡皂苷 d含量差异较大。见表 1。
表 1 10 批小叶黑柴胡根中皂苷 a、d的含量(mg·g －1)
Tab 1 Content of saikosaponin a，d of in 10 Bupleurum smithii Wolff var． parvifoliaum Shan et Y． Li roots
批号
(batch)
来源
(source)
柴胡皂苷 a
(saikosaponin a)
柴胡皂苷 d
(saikosaponin d)
皂苷含量之和
(the total content of saponins)
S1 河北张家口(Zhangjiakou，Hebei) 1. 488 1. 861 3. 349
S2 内蒙海拉尔(Haila’er，Nei Monggol)Ⅰ 2. 227 9. 844 12. 071
S3 内蒙海拉尔(Haila’er，Nei monggol)Ⅱ 1. 828 2. 245 4. 073
S4 青海刚查县(Gangcha，Qinghai) 2. 023 0. 834 2. 857
S5 青海海宴县(Haiyan，Qinghai) 1. 354 6. 596 7. 950
S6 青海大通县(Datong，Qinghai) 2. 438 0. 584 3. 022
S7 青海祁连山草原(Qilianshan，Qinghai) 2. 585 0. 810 3. 395
S8 青海门源县(Menyuan，Qinghai) 2. 915 1. 740 4. 655
S9 山西大同县(Datong，Shanxi) 2. 091 1. 500 3. 591
S10 山西阳曲县(Yangqu，Shanxi) 1. 839 2. 684 4. 523
3 讨论
3. 1 提取条件的选择 柴胡皂苷 a、d 在提取过程
中易受酚类或酸类成分影响转化为皂苷 b1、b2，故采
用弱碱性溶剂提取，考察了 5%氨水 －甲醇、3%吡
啶 － 甲醇、2%氢氧化钾 － 甲醇 3 种溶剂，结果用
5%氨水 －甲醇提取最优。同时采用正交试验法对
提取溶剂的用量、提取次数及提取时间进行了考察，
结果采用闪式提取法，按 30 倍量溶剂进行提取，每
次 2 min提取 3 次时提取效率最优［10］。本文所用的
闪式提取法吸收了传统的粉碎、搅拌、振动、浸渍、萃
取等技术的优点，具有提取效率高、提取溶剂用量
少、常温操作、环保等优点。对中药有效成分能达到
一种高效、快速提取的目的。
3. 2 色谱条件的优化［3 ～ 7］
3. 2. 1 检测波长的选择 本实验采用二极管阵列
检测器对柴胡皂苷 a、d进行全波长扫描，在 203 nm
波长处吸收最强，故选其为检测波长。
3. 2. 2 流动相的选择 皂苷为紫外末端吸收，为消
除甲醇本底吸收引起基线漂移的干扰，选择乙腈 －
水为流动相，而柴胡皂苷 a、d的极性差异较大，故选
择梯度洗脱。
3. 2. 3 小叶黑柴胡与北柴胡、UPLC 与 HPLC 的比
较分析 本实验同时与北柴胡进行了比较分析，发
现小叶黑柴胡的特征色谱峰比北柴胡多，并且在柴
胡皂苷 a、d的保留时间附近有吸收很高的干扰峰;
通过优化色谱条件使柴胡皂苷 a、d 得到较好的分
离，在 UPLC 条件下分析时间为 20 min，而在 HPLC
的液相色谱条件下，使小叶黑柴胡中柴胡皂苷 a、d
达到完全分离需要 70 min的分析时间，在此也体现
了 UPLC在分析速度上的优越性。
3. 3 小结 由测定结果可见不同产地小叶黑柴胡
的柴胡皂苷 a含量差异较小，而柴胡皂苷 d 含量差
异较大。本实验建立的同时测定柴胡皂苷 a、d含量
的 UPLC 法，具有简便、可行的特点，可用于小叶黑
柴胡根部分的质量控制。
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(本文于 2011 年 3 月 7 日修改回
檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾
)
金少鸿主编关于《药物分析杂志》刊庆计划说明(摘要)
《药物分析杂志》是我国药检领域首批学科带头人创办的学术期刊。她的前身是 1951 年开始编印
的《药检通讯》，后来也用过《药检工作通讯》的刊名，1981 年正式注册为《药物分析杂志》。
早在 20 世纪 50 年代初，涂国士先生等一大批留学海外的学子，怀着对祖国的热爱，为推动科学进
步的爱国热情，回到祖国，投身于新中国的建设。他们是新中国药检事业的首批专业人员，是参与了当
时国家药检所的创建的首批人才。早在 1950 年刚刚建立国家药检机构时，他们就担负起了引领全国药
物分析技术不断进步的责任和义务。当时新中国刚刚建立，在药物检测、科研、教学、培训等工作中，他
们面临缺教材，缺资料，缺标准资料的困难，而且也发现工作中时时取得的研究成果、检测经验，才是培
养药检科学技术工作者最好的知识信息，是当时教材中缺乏和不可多得的内容。
为及时收集领域内的最新研究成果，共享药物检测分析经验，为国家尽快培养检验人才。1951 年
就开始编印《药检工作通讯》，不定期在系统内发行，为促进本系统学术发展发挥了重要的作用。
随着学科技术发展向更广泛的领域渗透，和国家对科技期刊管理的不断完善。1981 年在原《药检
工作通讯》的基础上，正式注册创办了《药物分析杂志》，在国内外公开发行，为引领药物检测学科发展
发挥了更广泛的作用。
从中国药检办刊历史看，我们的学术期刊已是 60 年，仅以中国药学会《药物分析杂志》冠名发行也
有 30 年。几十年来，《药物分析杂志》秉承百花齐放、百家争鸣、追求前沿、促进推广的办刊理念，以
科学技术研究成果惠及药物分析领域为主线，为药物分析学科发展搭建着学术平台。
时值刊庆之际，我们感谢老一代办刊人为我们创建了平台，打下了坚实的基础;感谢广大作者专家
多年来的为我刊送来了凝聚您辛勤汗水的科研杰作;感谢广大读者朋友多年来对本刊的鼎力支持热心
关注;感谢各届编委专家多年来付出的智慧劳动。是你们成就我们在追求特色中铸造精品。有你们的
支持与关心，我们有信心传承药物分析学术作风，攀登学科发展高峰，为科学发展再立新功。
2011 年 1 月 26 日
—7561—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2011，31(9)