全 文 ：中国药房 2007年第 18卷第 9期 China Pharm acy 2007 Vol.18 N o.9 · 693·
高效液相色谱法测定小叶黑柴胡中槲皮素与异鼠李素的含量
周 伟 1 ,2 * ,蔡光明 1 #,黄鹤慧 1 ,何桂霞 2 ,刘鄂湖 1 ,2 ,朱海升 1 ,熊含晖 1 ,2(1.解放军 302医院全军中药研究所 ,北
京市 100039;2.湖南中医药大学药学院 ,长沙市 410007)
中图分类号 R284.1;R927.2 文献标识码 A 文章编号 1001-0408(2007)09-0693-03
摘 要 目的:建立以高效液相色谱法测定小叶黑柴胡茎叶中槲皮素 、 异鼠李素含量的方法 。方法:色谱柱为 Kromasil C 18
(250mm×4.6mm , 5μm),流动相为甲醇-0.4%磷酸溶液(55∶45),流速为 1.0mL ·min -1 ,检测波长为 256nm 。结果:槲皮素的线
性范围为 0.08 ～ 0.40μg(r=0.999 6), 平均回收率为 101.02%(RSD=1.53%);异鼠李素的线性范围为 0.06 ～ 0.30μg(r=
0.999 2),平均回收率为 101.26%(RSD=2.95%)。结论:本法操作简便 、准确 、重现性好 ,可用于小叶黑柴胡药材的质量控制 。
关键词 高效液相色谱法;小叶黑柴胡;槲皮素;异鼠李素;含量测定
*硕士研究生。研究方向:中药活性成分。电话:010-66933324。
E-mail:zyxy zw@126.com
#通讯作者:研究员。研究方向:新药开发。电话:010-66933323。
E-mail:cm g1004@vip.sina.com
Determination of the Contents of Quercetin and Isorhamnetin in Bupleurum.smithii var.parvi folium Shan
et Y.Li by HPLC
ZHOU Wei , CA I Guangming , HUANG Hehui , LIU Ehu , ZHU Haisheng , XIONG Hanhui(PLA I nsti tute of
Chinese Ma teria M edica , 302 Hospi tal of PLA ,Beijing 100039 , China)
ZHOU Wei , HE Guixia , LIU Ehu , XIONG Hanhui(School of Pharmacy , Hunan U niversi ty o f TCM , Chang-
sha 410007 ,China)
ABSTRACT OBJECTIVE:To est ablish an HPLC method for dete rmining the content s of Querce tin and Iso rhamnetin in
B upleurum.sm ithii var.parv if oli um Shan e t Y.Li.M ETHODS:The HPLC w as perfo rm ed on Kromasil co lumn C 18
(250mm×4.6mm , 5μm), using methano l-0.4%phosphoric acid(55∶45)as mobile phase , w ith flow ra te at 1.0mL ·min -1 and
de tection w aveleng th a t 256nm.RESULTS:The linear range o f Querce tin w as 0.08 ～ 0.40μg(r=0.999 6), with an average
recovery ra te of 101.02%(RSD=1.53%);that o f I so rham netin w as 0.06 ～ 0.30μg(r=0.999 2), with an average recovery
ra te of 101.26%(RSD=2.95%).CONCLUSION :This m ethod is simple and accurate w ith good reproducibility .It is suitable
fo r the quality cont rol of Bup leur um.smi thii var.parv if oli um Shan et Y.Li.
KEY WORDS HPLC;Bupleurum .smithi i var.parv ifolium S han e t Y.Li;Quercetin;I so rhamnetin;Content dete rmination
表 1 芍药苷的加样回收率试验结果(n=5)
Tab 1 Results of recovery test for Paeoniflor in(n =5)
样品含量/mg 加入量/mg 测得量/mg 回收率/ % / % RSD/ %
4.789 5 4.271 0 9.016 5 98.97
98.91 0.34
4.762 8 4.271 0 8.983 8 98.83
4.768 5 4.271 0 8.999 8 99.07
4.764 7 4.271 0 9.005 4 99.29
4.770 4 4.271 0 8.972 6 98.39
x
量 ,结果见表 2 。
表 2 样品含量测定结果
Tab 2 Results of sample content determinat ion
批号 芍药苷含量/mg ·粒-1
050602 2.42
050603 2.36
050604 2.32
3 讨论
乳核内消软胶囊由浙贝母 、当归 、赤芍 、漏芦 、茜草 、香附 、
柴胡 、橘核 、夏枯草 、丝瓜络、郁金 、甘草等 12味中药组成 。在制
备工艺中 ,当归 、香附 、柴胡 、郁金 4味药先行提取挥发油 ,药渣
再与其它药味一起水提 。但挥发油易挥发散失 , 因此笔者将其
制成软胶囊 ,有利于较完全地保存挥发油 。
赤芍为乳核内消软胶囊处方中的君药 , 含有赤芍总苷等成
分 ,其中芍药苷是其有效成分 ,也具有一定的活性 。本文以该成
分为指标 , 通过鉴别赤芍并测定其含量来控制乳核内消软胶囊
质量 ,方法精密度好、准确性高 ,具有较强的专属性 。
在测定乳核内消软胶囊中的芍药苷含量时 , 若直接采用甲
醇超声提取 ,获得的含量测定值较低 ,不易将芍药苷提取完全;
改用回流法提取后 ,虽可显著改善提取效果 ,但干扰成分也多 ,
故采用中性氧化铝柱处理提取液 , 并用正己烷去除植物油 , 从
而获得了满意效果 。
综上所述 ,本文所建标准可用于本制剂的质量控制 。
参考文献
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(收稿日期:2006-05-24 修回日期:2006-09-15)
· 694· Ch ina Pharmacy 2007 Vo l.18 No.9 中国药房 2007年第 18卷第 9期
图 1 高效液相色谱
A.对照品溶液;B.供试品溶液;1.槲皮素;2.异鼠李素
Fig 1 HPLC
A.reference solut io n;B.tes t samp le solut ion;1.Quercet in;2.I so_
rhamnet in
中药小叶黑柴胡 B upleur um.sm ithii var.parv if oli um
Shan et Y.Li为伞形科(Umbelliferae)柴胡属植物的茎叶 , 主
要分布于我国的山西 、内蒙古 、甘肃 、青海 、宁夏等地 ,并作柴胡
药用 , 其中宁夏柴胡为商品柴胡的主流品种 [1 ] , 商品药材的名
称为黑柴胡。小叶黑柴胡茎叶中主要成分为黄酮 [2 ] ,具有利胆 、
镇痛 、解热 、抗菌 、止咳 、祛痰作用 [3 ,4 ] 。目前 ,对小叶黑柴胡茎叶
尚无合理 、完善的质量控制指标及方法 。为解决这一问题 ,笔者
采用药效跟踪的方法确认了小叶黑柴胡利胆的药效部位 , 然后
对该部位进行了植化分离 , 首次从中分离得到槲皮素和异鼠李
素 (另文报道)。本实验在此基础上建立了高效液相色谱
(HPLC)法同时测定小叶黑柴胡中槲皮素与异鼠李素的含量 ,
方法简便 、准确 , 可作为小叶黑柴胡茎叶药材以及含有小叶黑
柴胡茎叶复方制剂的质量控制方法之一 。
1 仪器与试药
1100 型高效液相色谱仪 , 包括 G1314A 紫外检测器 、
Chemstations化学工作站(美国 Agilent 公司);8452A 紫外分
光光度计(美国惠普公司);AL204电子分析天平(瑞士梅特勒
-托利多仪器有限公司);甲醇(色谱纯 ,美国 Fisher 公司);槲
皮素标准品 (中国药品生物制品检定所 , 批号 :100081-
200406);异鼠李素标准品 (中国药品生物制品检定所 , 批号:
110860-200406);小叶黑柴胡采自青海海北自治州;其余试剂
均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱:Kromasil C18(250mm ×4.6mm ,5μm);流动相:甲
醇-0.4%磷酸溶液(55∶45);检测波长:256nm ;柱温:室温;
流速:1.0mL ·min -1;进样量:10μL 。在该色谱条件下 ,槲皮素
与异鼠李素对照品保留时间分别约为 6.1 、10.1min , 供试品色
谱中槲皮素、异鼠李素峰与杂质峰分离良好 ,详见图 1。
2.2 供试品溶液的制备
称取小叶黑柴胡(过 40目筛)1.0g , 精密称定 , 加石油醚
25mL , 水浴回流 3h , 弃去石油醚 , 残渣挥干石油醚 , 加甲醇-
25%盐酸(4∶1)溶液 25mL , 水浴回流 2h , 提取液移至 50mL
量瓶中 , 加甲醇稀释至刻度 , 摇匀 , 精密吸取 5mL 至 25mL 量
瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,得供试品溶液 。
2.3 对照品溶液的制备
称取槲皮素 16mg 、异鼠李素 12mg , 精密称定 , 置 200mL
量瓶中 ,用甲醇溶解并定容 ,摇匀 ,得对照品溶液 。
2.4 标准曲线的绘制
精密吸取 “2.3” 项下对照品溶液 0.5 、 1.0 、 1.5 、 2.0 、
2.5mL , 移至 5mL 量瓶中 , 用甲醇稀释至刻度 , 各进样 10μL ,
以色谱峰面积 (A)对浓度 (C)进行线性回归 , 回归方程分别
为 ,槲皮素:A=33 745C —23.458(r=0.999 6),线性范围为
0.08×10 -3 ～ 0.40×10 -3mg ;异鼠李素:A=25 918C —6.125
(r=0.999 2),线性范围为 0.06×10 -3 ～ 0.30×10 -3mg 。
2.5 精密度试验
吸取标准品溶液 10μL进样 , 在上述色谱条件下重复进样
6次 。结果 ,槲皮素平均峰面积为 3 085.32 ,相对标准差(RSD)
为 1.73%;异鼠李素平均峰面积为 1 741.39 ,RSD=1.62%。
2.6 重现性试验
取同一批药材 5份 ,分别按“2.9”项下方法操作 。结果 ,槲
皮素的 RSD=1.88%,异鼠李素的 RSD=1.54%。
2.7 稳定性试验
取同一供试品溶液 ,于制备后 0 、2 、4 、8 、12h测定 1次 。结
果 ,槲皮素的 RSD=0.67%,异鼠李素的 RSD=0.49%,表明
供试品溶液在配制后 12h内稳定 。
2.8 加样回收率试验
称取已知含量的样品 0.5g 共 6份 ,精密称定 ,分别加入槲
皮素、异鼠李素对照品适量 , 按上述方法测定 , 计算回收率 , 结
果详见表 1 、表 2。
表 1 槲皮素的加样回收率试验结果
Tab 1 Results of recovery test of quercetin
样品含量/mg 加入量/mg 测得量/mg 回收率/% /% RSD/ %
1.501 8 1.200 0 2.737 9 103.01
101.02 1.53
1.501 2 1.200 0 2.699 3 99.84
1.500 6 1.200 0 2.714 8 100.35
1.501 5 1.200 0 2.686 7 98.77
1.499 4 1.200 0 2.714 7 101.28
1.500 0 1.200 0 2.734 1 102.84
x
表 2 异鼠李素的加样回收率试验结果
Tab 2 Results of recovery test of isorhamnetin
样品含量/mg 加入量/mg 测得量/mg 回收率/% / % RSD/ %
0.185 2 0.180 0 0.372 1 103.83
0.185 1 0.180 0 0.360 1 97.22
0.185 1 0.180 0 0.368 7 102.00 101.26 2.95
0.185 2 0.180 0 0.359 9 97.06
0.184 9 0.180 0 0.371 0 103.39
0.185 0 0.180 0 0.372 3 104.06
x
2.9 样品含量测定
分别精密吸取槲皮素与异鼠李素对照品溶液和供试品溶
液各 10μL , 注入液相色谱仪中 , 按上述色谱条件测定 , 结果详
见表 3。
表 3 小叶黑柴胡中槲皮素与异鼠李素的含量测定结果(n=3)
Tab 3 Results for determinat ion of the contents of
quercetin and isorhamnetin in Bupleurum.smithii var.parv_
ifolium Shan et Y.Li(n=3)
样品来源 批号 槲皮素/% 异鼠李素/ %宁夏湟中县 20050712 0.30 0.037
宁夏大通县 20060309 0.39 0.043
宁夏湟源县 20060510 0.33 0.038
3 讨论
检测波长的确定:按紫外-可见分光光度法 [5 ] 在 200 ～
400nm 波长范围内进行全波长扫描 ,发现槲皮素与异鼠李素在
256nm 与 370nm 波长处均有最大吸收 。其中 , 在 256nm 波长
处杂质干扰少 , 目标峰与其它相邻色谱峰分离度较好 , 故选择
256nm 做为测定波长 。
提取方法的确定:对小叶黑柴胡茎叶中槲皮素与异鼠李素
中国药房 2007年第 18卷第 9期 China Pharm acy 2007 Vol.18 N o.9 · 695·
*主任药师。研究方向:中药制剂。电话:0335-5360366。E-
mail:lcl281@163.com
·中药应用·
肾炎清片的制备与疗效观察
罗朝利 *,张文生 ,郭 蓉 ,邢建华 ,王 冬(北京军区北戴河疗养院 ,秦皇岛市 066105)
中图分类号 R983;R692.3;R283.64 文献标识码 A 文章编号 1001-0408(2007)09-0695-03
摘 要 目的:制备并观察肾炎清片的疗效 。方法:将 1 200例慢性肾小球肾炎 、急性肾小球肾炎 、隐匿性肾小球肾炎 、紫癜性肾炎
患者 ,随机分成治疗组与对照组 ,分别进行临床疗效观察和减少糖皮质激素不良反应的研究 。在进行疗效观察时 ,对照组采取常规
控制活动量、降压 、利尿治疗;治疗组除此之外 ,加用肾炎清片 , 8片·次 -1 , 3次 ·d -1。在进行减少糖皮质激素不良反应的研究时 ,
对照组给予糖皮质激素治疗;治疗组同上 。疗程分别为 3mo 和 2mo 。结果:2组间存在显著性差异(P<0.01)。结论:肾炎清片对于
降低急性肾小球肾炎 、慢性肾小球肾炎 、隐匿性肾小球肾炎 、紫癜性肾炎等原因所致血尿有明显作用;同时对减少糖皮质激素治疗
过程中的不良反应具有明显疗效 。
关键词 肾炎清片;肾炎;疗效观察
Preparation and Observations on the Curative Effects of Shenyanqing Tablet
LUO Chaoli ,ZHANG Wensheng ,GUO Rong , XING Jianhua , WANG Dong(Beidaihe Convalescent Home of
Beijing M ilitary Command , Qinhuangdao 066105 , China)
ABSTRACT OBJECTIVE:To study the curative effects of Shenyanqing tablet.M ETHODS:1 200 patients w ith ch ronic
glom erulonephritis , acu te glomerulonephritis , la tent g lomerulonephritis and purpura g lomerulonephritis were randomized into
the trea tment g roup and cont rol g roup , and separately studied on curative effects and reduction of adverse reaction o f g luco-
cor ticostero id. In the study of curative effec ts , the contro l g roup received no special t reatm ent except that on reducing pres-
sure and diuresis , and the trea tment g roup w as given Shenyanqing table t , 8 table ts ·d -1 , tid , in addition to receiving same
treatment as that fo r the cont rol g roup.In the study of reducing adverse reaction o f glucocor ticostero id , the con trol g roup (the
treatment g roup w as the same as the met hod above)w as given normal glucocorticosteroid t reatm ent fo r 3 months and 2 months
respectively.RESULTS :I t has significant dif ference (P <0.01)betw een the tw o groups.CONCLUSIONS :Shenyanqing tab_
le t has an obvious effect on hematuria caused by chronic g lomerulonephr itis , acu te glomerulonephritis , la tent g lomeru-
lonephritis and purpura g lomerulonephritis.I t can also reduce t he adverse reaction o f g lucocorticoste roid.
KEY WORDS Shenyanqing table t;Nephritis;Observa tion of curative ef fect
的提取 , 笔者曾采用超声提取 、热回流提取 、浸渍法 3种方法 ,
结果超声提取及浸渍法提取效果较差 , 槲皮素与异鼠李素含量
较低;热回流提取效果较好 ,槲皮素与异鼠李素含量较高 。本实
验采用酸水解法 , 酸水解法的 3个主要条件为盐酸浓度、水解
时间 、水解温度 。文献 [6 ]报道黄酮苷水解时温度过高或过低均
导致水解不完全 , 故本实验确定水解温度为 85℃, 盐酸浓度参
考《中国药典》方法 [ 7 ]———采用 25%盐酸 ,在此条件下主要对水
解时间进行选择 。将药材分别水解 0.5 、1.0 、1.5 、2.0h ,发现随
着水解时间的增长 , 槲皮素与异鼠李素的含量逐渐增加 , 到
1.5h时达到最大 , 2.0h反而有所下降 ,这可能是由于水解时间
过长 , 使化合物结构发生变化所致 , 故最终选择水解温度为
1.5h 。
由表 3可知 , 小叶黑柴胡茎叶中槲皮素与异鼠李素含量较
高 , 槲皮素含量高于异鼠李素 。但槲皮素与异鼠李素多成苷存
在 ,如不水解 ,槲皮素与异鼠李素含量会很低 。
参考文献
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(收稿日期:2006-08-03 修回日期:2006-10-18)