全 文 ：HPLC法测定江西省 3种粗叶木药材中车叶草苷的含量
李 斌 ,万慧芳 ,赖学文 ,刘庆华 ,余邦伟 ,姚鹏程 (江西中医学院中药化学学科组 ,南昌 330006)
【基金项目】 国家自然科学基金(20262003 ,20662006)项目
【作者简介】 李 斌(1970-),女 ,教授。研究方向:中药化学成分研究。Tel:0791-7118993
【摘要】 目的 建立HPLC 法测定江西省省内粗叶木药材中车叶草苷含量。方法 采用 C18柱 , 流动相为乙腈-0.25%磷酸水
溶液 , 检测波长为 240 nm ,柱温为 15℃,流速为 1 mL·min-1。结果 粗叶木药材中车叶草苷在 0.004～ 0.2 g·L-1内线性良好
(r=0.999 9),平均回收率为 98.67%, 3 种粗叶木药材茎中车叶草苷含量均高于根中车叶草苷的含量。结论 该测定方法快
速简便 、结果可靠 , 重现性好 ,可用于粗叶木药材中车叶草苷的含量研究。
【关键词】 粗叶木; 车叶草苷; 含量测定
【文献标识码】B 【文章编号】1007-4406(2009)01-0032-03
Determination of asperuloside from three species of Lasianthus in Jiangxi province
by HPLC method
LI Bin , WAN Huifang , LAI Xuewen , LIU Qinghua , YU Bangwei , YAO Pengcheng (Section of Chemistry of Chinese
Materia Medica , J iangxi University of Traditional Chinese Medicine , Nanchang 330006 , China)
【ABSTRACT】 AIM To establish a HPLC method for determination of asperuloside from three species of Lasianthus
in Jiangxi province.METHODS A Hypersil ODS-C l8 column(250 mm×4.6 mm ,5μm)was adopted as stationary
phase , acetonitrile -0.25% phosphoric acid solution(11∶89 , V/ V)was used as mobile phase.The detection wave-
length was 240 nm.The flow rates were 1.0mL·min-1 , and the temperature of columnwas 15℃.RESULTS Asperulo-
side had a good linearity (r=0.999 9)in the range of 0.004-0.2 g·L-1.The average recovery was 98.67%.The
contents of asperuloside from stems were all higher than those from roots in three different plants.CONCLUSION The
method is simple , sensitive and accurate , and can be used for the quality control of asperuloside from the plant of
Lasianthus.
【KEY WORDS】 HPLC; asperuloside; content determination
长尾粗叶木(Lasianthus acuminatissimus)是茜草
科(Rubiaceae)粗叶木属植物 ,其根俗称“铁骨人参” ,
《全国中草药汇编》记载其功效为“行气活血 、祛湿强
筋 、止痛 ,主治跌打损伤 、风湿关节痛 、腰肌劳损”[ 1] 。
为了阐明长尾粗叶木抗类风湿性关节炎的有效成
分 ,我们对长尾粗叶木进行了系统的化学和药理研
究 ,结果表明车叶草苷(图 1)等环烯醚萜类成分是
长尾粗叶木抗类风湿性关节炎的活性成分[ 2 , 3] 。因
此 ,我们采用 HPLC法对长尾粗叶木药材的根和茎
中车叶草苷进行了含量测定 ,并比较了江西省省内
其他 2 种粗叶木药材 ———污毛粗叶木(Lasianthus
hartii)和榄绿粗叶木(Lasianthus japonicus)的根和茎
中车叶草苷的含量 ,为有效控制药材质量及合理利
用植物资源提供参考。
1 仪器与试药
Aglient1200高效液相色谱仪 ,大连依利特 Hy-
persil shim-pack -ODS -C18色谱柱(250 mm ×4.6
mm ,5μm)。车叶草苷对照品(由长尾粗叶木根中分
离得到 , 纯度 >98%);甲醇(分析纯);乙腈(色谱
纯);超纯水 。其他试剂均为分析纯。
·32· 中国临床药学杂志 CHINESE JOURNAL OF CLINICAL PHARMACY 2009 年第 18卷第 1 期
长尾粗叶木药材 2005年 12月采于江西省玉山
县 ,污毛粗叶木药材 2006年 1月采于江西省宜丰
县 ,均经本校赖学文教授鉴定;榄绿粗叶木药材
2006年 2月采于江西省崇仁县 ,经本校刘庆华高级
实验师鉴定。标本存放于本校药学院。
图 1 车叶草苷的化学结构
2 方法与结果
2.1 溶液的配制
2.1.1 对照品溶液 精密称定车叶草苷对照品
0.010 g ,置于25 mL 的容量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释
至刻度 ,配制成质量浓度为 0.4 g·L-1的对照品溶
液。
2.1.2 供试品溶液 分别取长尾粗叶木干燥根或
茎 2 g ,精密称定 ,置 50 mL 圆底烧瓶中。加乙醇 20
mL ,称定重量 ,乙醇回流提取 1 h ,趁热过滤 ,滤液置
50 mL容量瓶中 ,药渣再提取 2 次(每次加 10 mL 乙
醇 ,提取 30 min),滤液置同一容量瓶中 。然后将 3
次提取液置于蒸发皿中蒸干 ,用甲醇溶解蒸发皿中
的残留物 ,转移至 10 mL 容量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,
摇匀 , 0.45 μm滤膜过滤 ,分别得长尾粗叶木根和茎
的供试品溶液。按同样方法制得污毛粗叶木根和茎
的供试品溶液以及榄绿粗叶木根和茎的供试品溶
液。每样品制备 6份溶液备用。
2.2 检测波长的选择 通过对车叶草苷对照品溶
液进行全波长扫描 ,结果表明 ,车叶草苷在 238 nm
处有最大吸收(图 2),因此选择 240 nm为吸收波长
进行含量测定研究。
2.3 色谱条件 色谱柱Hypersil shim-pack-ODS-C18
(250 mm×4.6 mm , 5μm);流动相:乙腈-0.25%磷
酸水溶液(11∶89 , V/ V), 检测波长 240 nm , 流速
1.0 mL·min-1 , 柱温 15℃。对照品及样品色谱图
见图 3。
图 2 车叶草苷对照品紫外吸收图谱
图 3 粗叶木药材中车叶草苷的 HPLC图
A.对照品;B.榄绿粗叶木茎;C.长尾粗叶木茎;D.污毛粗叶木根;E.
污毛粗叶木茎。 1.车叶草苷
2.4 线性关系考察 精密吸取“2.1.1”项配制的对
照品溶液各 0.1 、0.25 、0.5 、1 、3 、5 mL ,置于 10 mL 容
量瓶中 ,用甲醇稀释至刻度 ,分别吸取 10 μL 注入色
谱仪 。以峰面积(y)为纵坐标 ,对照品的质量浓度
(x)为横坐标 ,绘制标准曲线 ,求得回归方程:y =
7 897.7x-0.501 1 , r=0.999 9。结果表明 ,车叶草
苷质量浓度为0.004 ～ 0.2 g·L-1时与峰面积具有良
好的线性关系。
2.5 精密度实验 精密吸取车叶草苷对照品溶液
(质量浓度 0.4 g·L-1)10 μL进样 ,重复进样 6次 ,测
定峰面积 ,计算 RSD为 0.38%(n =6),说明精密度
很好。
2.6 回收率实验 取污毛粗叶木根粉末 2 g ,共 6
份 ,精密称定 ,加入质量相当的车叶草苷对照品 ,按
“2.1.2”项操作 ,在上述色谱条件下进样测定 ,计算
回收率 ,结果见表 1。
2.7 重复性实验 精密吸取污毛粗叶木根样品粉
末 ,按照“2.8”项下方法平行操作 6份 ,计算车叶草
·33· 中国临床药学杂志 CHINESE JOURNAL OF CLINICAL PHARMACY 2009 年第 18 卷第 1期
苷的含量 。结果车叶草苷平均峰面积为 734.48
(n=6),RSD =0.90%(n =6),表明该法重现性良
好。
表 1 回收率实验结果
药材
量/g
药材中
含车叶
草苷的
量/mg
车叶草苷
对照品
加入量/
mg
测得量/
mg
回收率/
%
平均回
收率/ % RSD/ %
2.031 1 0.95 0.76 1.70 99.12
2.013 2 0.94 0.76 1.69 97.37 98.67 0.94
2.026 3 0.94 0.95 1.88 97.89
2.032 4 0.95 0.95 1.89 98.95
2.125 0.94 1.12 2.05 98.70
2.003 7 0.93 1.12 2.04 100.00
2.8 样品测定 精密吸取“2.1.2”项配制的各供试
品溶液 10 μL进样分析 ,测定峰面积 ,根据回归方程
计算各样品中车叶草苷的含量。结果表明 ,榄绿粗
叶木茎的平均含量是 43.92 μg·g-1;长尾粗叶木茎
的平均含量为 148.11 μg·g-1;污毛粗叶木根和茎的
平均含量分别是 456.85μg·g-1和 1 420.01μg·g-1 ,
而榄绿粗叶木和长尾粗叶木根中车叶草苷的含量均
较低而不出峰。
3 讨论
车叶草苷等环烯醚萜类成分是长尾粗叶木抗类
风湿性关节炎的活性成分[ 2 , 3] ,且至今尚无其含量
测定的研究报道 ,我们首次对车叶草苷的含量进行
了比较研究 。本研究表明 ,我省 3种粗叶木药材茎
中车叶草苷含量均高于根中车叶草苷的含量 ,推测
粗叶木茎的抗类风湿性关节炎作用可能强于根的作
用;而目前民间使用粗叶木药材时根茎一同入药 ,采
挖药材多连根拔起 ,对资源的破坏极大。因此 ,本研
究为保护植物资源提供了有力的科学依据 ,在今后
粗叶木药材的开发利用中 ,应积极倡导使用植物的
茎和枝 ,而不必破坏根部。
在供试品溶液制备过程中 ,曾比较了甲醇加热
回流提取和乙醇加热回流提取的效果 ,结果表明用
前者提取的成分种类较多 ,HPLC方法不能有效分离
车叶草苷 ,因此采用乙醇加热回流提取方法;而且笔
者对长尾粗叶木化学成分进行系统分离时采用乙醇
回流提取法 ,与该供试品提取方法一致。
本实验色谱条件中柱温选择 15℃,峰形及分离
度均较好 。而在其他温度时 ,如 20℃、25℃,虽分别
调整流速 ,但峰形或分离度不佳 。
本实验曾选用不同的流动相 ,如甲醇-0.25%
磷酸水溶液(15∶85 , V/V)等 ,结果以本实验条件所
得的峰形较好 ,结果为最佳。我们所建立的粗叶木
药材中车叶草苷的含量测定方法快速简便 、结果可
靠 ,重现性好 ,可用于该药材的质量控制研究。
【参考文献】
[ 1] 国家中医药管理局中华本草编委会.中华本草[M] .第 6卷.上
海:上海科学技术出版社 , 1999:446.
[ 2] 李斌 , 张东明, 罗永明.长尾粗叶木根化学成分的研究 Ⅰ[ J] .
中国中药杂志 , 2006 , 31(2):133.
[ 3] Li B, Zhang DM , Luo YM , et al.Three new and anti-tumor an-
thraquinone glycosides from Lasianthus acuminatissimus merr[ J] .Chem
Pharm Bull , 2006 , 54(3):297.
(2008-01-14 收稿)
【基金项目】 江苏省临床药学研究基金(L07003)
【作者简介】 王丽彬(1980-),女 ,实习研究员。主要从事临床药学研究。Tel:13913972852;E-mail:wanglibin1999@gmail.com
【通讯作者】 欧 宁(1956-),主任药师 ,硕士生导师。 Tel:025-83718836-6976
从极少量人血凝块中快速提取基因组 DNA的方法
王丽彬 ,欧 宁 (南京医科大学第一附属医院药剂科 ,南京 210029)
【摘要】 目的 建立从极少量血凝块中快速提取基因组 DNA的方法 , 并对其应用价值进行评价。方法 分别对 TIANamp 基
因组 DNA 提取试剂盒和 TaKaRa 全能基因组 DNA提取试剂盒进行方法改良 ,并提取 DNA ,比较 2 种方法提取 DNA 的含量和纯
度;并用人 P450酶系的 CYP3A4＊4 引物对提取的 DNA进行 PCR扩增 , 检测生物活性。结果 用 TaKaRa 全能基因组 DNA 提
·34· 中国临床药学杂志 CHINESE JOURNAL OF CLINICAL PHARMACY 2009 年第 18卷第 1 期