全 文 ：研究论文
小叶黑柴胡茎叶总黄酮对四氯化碳
所致小鼠急性肝损伤的保护作用
詹雪晶1 , 2 , 蔡霈1 , 蔡光明1＊ , 刘荣华2 , 张卓勇3 , 刘峰群1 (1.解放军第 302医院中药研究所 , 北京　100039;
2.江西中医学院 现代中药制剂教育部重点实验室 , 南昌　330004;3.首都师范大学 , 北京　100048)
摘要:目的　观察小叶黑柴胡茎叶总黄酮 (TFA)对四氯化碳 (CCl4)所致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法　腹
腔注射 0.12%CCl4 橄榄油溶液制备小鼠急性肝损伤模型 , 检测各组小鼠血清谷丙转氨酶 (ALT)、 谷草转氨酶
(AST);同时测定肝组织中丙二醛 (MDA)的含量 、 超氧化物歧化酶 (SOD)的活性。 在光学显微镜下观察肝脏
病理组织学变化。结果　与 CCl4 模型组相比较 , 经 TFA 预防性治疗后 , 小鼠血清中 A LT 、 AST 的活性明显降低
(P<0.01), 同时肝组织中 MDA 的含量明显下降 、 SOD的活力明显增强 (P<0.01)。形态学观察显示 TFA 能明
显改变肝组织的病理变化。结论　TFA 对急性肝损伤小鼠具有保护作用。
关键词:小叶黑柴胡;总黄酮;四氯化碳;急性肝损伤
中图分类号:R965　　　　文献标识码:A　　　　文章编号:1672-2981 (2010)04-0241-03
Protective effect of total flavonoids in the aerial part of Bupleurum
smithii Wolff var1 parvif olium on acute hepatic injury in mice
ZH AN Xue-jing 1 , 2 , CAI Pei , CAI Guang-ming1＊ , LIU Rong-hua2 , ZH ANG Zhuo-yong , L IU Feng-qun1 (1.I nsti-
tute of Chinese Med icine , NO.302 Hosp ital of the Peop le s Liberation Army , Beij ing 100039;2.Key Laborato-
ry of Modern Preparation o f T raditional Chinese Medicine , J iangx i College o f T raditional Chinese Medicine ,
Ministry o f Education , Nanchang 330004;3.Capital Normal University , Bei jing 100048)
Abstract:Objective　 To determine the protectiv e effect o f total flav onoids of the aerial pa rt of B upleurum smithii
Wolff va r1 parv i f olium(TFA)on acute hepatic injur y induced by carbon tetrachlo ride(CCl4)in mice.Methods　All
gr oups except the nomal g roup w ere intraperitoneally injected with 0.12%CCl4 olive oil solution to induce acute hepatic
injury.The contents of ALT , AST in the se rum , M DA content and SOD activity in the liv er w ere measur ed and the
hepatic histo log ical changes we re observed by optical micro scope.Results　Compared with the model g roup , the con-
tents of ALT and AST in the serum we re obviously decrea sed (P<0.01).The content of MDA in the live r w as obvi-
ously decreased (P<0.01), and the activity of SOD in the liv er w as markedly improved (P<0.01)af te r preventive
treatment with TFA.Observ ation of patholog ical slices show ed TFA could im prove hepatic patholog ical change s dis-
tinc tively.Conclusion　TFA has pro tective effect on acute hepatic injury induced by CCl4 in mice.
Key words:Bupleurum smithii Wolff v ar1 parvi f olium Shan et Y.Li;total flav onoids;CCl4;acute hepatic injury
　　藏药小叶黑柴胡在宁夏青海地区作为柴胡药用[ 1] , 为商
品柴胡的主流品种 , 具有保肝利胆 、 抗炎 、 抗病毒等多种功
效。以往对小叶黑柴胡研究多集中于根部 , 地上部分研究尚
少 , 解放军 302医院中药研究所通过药学研究发现小叶黑柴
胡茎叶含有槲皮素 、 芦丁等多种黄酮类化合物 , 本课题组前
期研究了其地上部分药理活性 , 发现其有很好的退黄利胆作
用 , 并且能明显增强免疫系统的功能[ 2] 。在此基础上 , 本实
验研究了小叶黑柴胡茎叶总黄酮对四氯化碳 (CCl4)造成小
鼠急性肝损伤的保护作用 , 并探讨其可能的作用机制及应用
前景。
1　材料
1.1　仪器与试药
BS120 全自动生化仪 (深圳迈瑞生物医疗电子股份有限
公司), 安捷伦-8453 紫外分光光度计 (美国惠普公司);
　　基金项目:北京市政府专项基金 (编号:0853279)。
作者简介:詹雪晶 , 硕士 , 主要从事生药学研究 , Tel:13426431658。 　　＊通讯作者:蔡光明 , 研究员 , 硕士生导师 , 主要从事药物
分析和药物制剂的研究 , T el:(010) 66933323 , E-mai l:cgm1004@vip.sina.com
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中南药学 2010年 4月第 8卷第 4期　Cent ral S outh Ph armacy.Ap ri l 2010 , Vol.8 No.4
TGL-16C 离心机 (上海安亭科学仪器厂)。
　　原药材小叶黑柴胡地上茎叶 (采自青海西宁市湟中县 ,
经本所肖小河研究员鉴定为小叶黑柴胡 B lsmithii Wol f f
var1 parvifolium shan at Y.L , 标本存放于解放军 302 医院
全军中药研究所标本室);联苯双酯滴丸 (1.5 mg · 丸-1 ,
北京协和药厂 , 批号:08030202)。橄榄油 (国药集团化学
试剂有限公司 , 批号:F20081006);考马斯亮蓝蛋白测定试
剂盒 、 丙二醛 (MDA)测定试剂盒 (批号:20081104)、 超
氧化物歧化酶 (SOD)测定试剂盒 (批号:20090807)(南
京建成科技有限公司);芦丁对照品 (中国药品生物制品检
定所 , 纯度:91.7%, 批号:100080-200306);其余试剂均
为分析纯 , D-101大孔树脂 (天津农药总厂树脂分厂)。
1.2　动物
SPF 级昆明种小鼠 , 18 ～ 22 g [ 中国人民解放军军事医
学科学 院实验动物中心 , 编号:0030489 , 许可证号:
SCXK- (军), 2007-004] 。
2　方法
2.1　TFA 的制备
小叶黑柴胡原药材 (取自青海省西宁市湟中县)用
85%乙醇浸泡 1 h , 提取 3 次 , 提取时间 1 h , 将提取液过
滤 , 于 60 ℃, -0.08 Mpa 减压浓缩至相对密度为 1.0 ～
1.1 , 加入水稀释至 10倍体积 , 放置 , 产生沉淀 , 过滤 , 收
集滤液 , 即为粗提物。 粗提物上 D-101 型大孔吸附树脂
柱 , TFA 的比上柱量为 3.89 mg· mL-1 , 比吸附量为 3.31
mg·m L-1 , 水洗脱 , 以 Molishi反应为阴性判定水洗脱终
点;70%乙醇洗脱 , 收集洗脱液 , T LC 检测芦丁不再出现
来判定终点 , 70 ℃真空干燥 , 得到原料药粉。以芦丁为对
照品 , 利用紫外测定原料药粉中总黄酮的含量为 62%[ 3-4] ,
根据山西省中药材标准 (1987 年版)[ 5]小叶黑柴胡原药材用
量 (3 ～ 9 g), 确定 TFA 3 个用药剂量 (300 、 150、 75 mg·
kg -1)。
2.2　TFA 对 CCl4 所致急性肝损伤小鼠的保护作用[ 6]
昆明种小鼠 60 只 , 雌雄各半 , 随机分成正常对照组 ,
CCl4 模型组 , 阳性药组联苯双酯组 (150 mg· kg -1), TFA
高 、 中 、 低 (300 、 150、 75 mg · kg-1) 3 个剂量组 , 每组
10 只。实验开始时 , TFA 高 、 中 、 低 3 个剂量组和阳性药
对照组按 0.1 m L/10 g 灌胃给药 , 用蒸馏水补足 0.5 mL , 1
次· d-1 , 连续 7 d。模型组和正常对照组分别给予相同体积
的生理盐水。于第 7 日给药 1 h 后 , 每鼠按 10 mL· kg -1的
剂量腹腔注射 0.12% CCl4 橄榄油溶液 , 正常对照组给等体
积的橄榄油溶液。禁食不禁水 16 h 后 , 摘眼球取血 , 分离
血清待测。全自动生化仪测血清 ALT 、 AST 的活力。取小
鼠肝脏右叶 0.5 g 左右 , 按重量体积比 1∶9 加生理盐水制
成 10%的组织匀浆液 , 按照试剂盒说明检测 SOD的活力和
MDA 的含量。
2.3　病理学观察
取肝左叶同一部位组织 , 用常规石蜡包埋 , 切片 , HE
染色 , 光镜下观察肝组织的病理变化。
2.4　统计学处理
采用 SPSS 11.5 分析应用软件处理分析数据 , 组间样本
比较采用 t检验。
3　结果
3.1　TFA对 CCl4 所致急性肝损伤小鼠血清影响
腹腔注射 CCl4 可引起急性肝损伤 , 表现在小鼠血清
ALT 、 AST 的明显的升高 , 结果显示 , TFA 可使其升高的
ALT 、 AST 活性显著降低 (P <0.01), 提示 TFA 对 CCl4
可引起急性肝损伤有很好的保护作用 , 与对照药联苯双酯的
作用相似 , 结果见表 1。
表 1　TFA 对急性肝损伤小鼠 ALT和 AST的影响
Tab 1　Effect of TFA on ALT, AST in mice with acute hepatic injury
组别
(g rou p)
剂量
(d ose)
/mg· kg -1
n
AL T
/ U · L -1
AST
/U · L-1
正常组 - 10 52.5±5.5 61.9±6.9
模型组 - 10 231.4±142.5＊＊ 156.5±107.6＊＊
联苯双酯组 150 10 72.6±40.3## 102.4±30.3##
高剂量组 300 10 88.5±31.7## 82.6±21.2##
中剂量组 150 10 85.7±54.9## 89.5±20.6##
低剂量组 75 10 201.1±89.8 138.5±32.3##
　　注:与正常组相比 , ＊＊P<0.01;与模型组相比 , ##P<0.01。
　　 note:Com pared wi th the normal cont rol , ＊＊ P <0.01 , com-
pared wi th the model group , ##P<0.01.
3.2　TFA对 CCl4 所致急性肝损伤小鼠肝组织的影响
从实验结果可见 , 模型组小鼠肝组织中的 MDA 的含量
明显升高 (P <0.01), SOD 的活性显著下降 (P <0.01),
提示肝脏出现脂质过氧化物。而 TFA (300 mg · kg-1)能
明显的降低肝脏组织中 MDA 的含量 (P <0.01)和提高
SOD的活力 (P<0.01), 提示 TFA有很好的抗氧化和清除
自由基的能力 , 结果见表 2。
表 2　TFA对急性肝损伤小鼠肝组织中 MDA 和SOD的影响
Tab 2　Effect of TFA onMDA, SOD in liver homogenates frommice withacute
hepatic injury
组别
(g rou p)
剂量
(d ose)
/mg· kg -1
n
MDA
/ nmol·mg-1·prot
SOD
/ U·mg-1· prot
正常组 - 10 0.88±0.34 24.93±2.67
模型组 - 10 1.54±0.30＊＊ 18.81±2.20＊＊
联苯双酯组 150 10 0.97±0.36## 25.00±3.67##
高剂量组 300 10 0.92±0.45## 26.15±14.22##
中剂量组 150 10 1.17±0.18## 18.63±2.77
低剂量组 75 10 1.23±0.24## 23.50±4.17#
　　注:与正常组相比 , ＊＊ P < 0.01;与模型组相比 , # P <
0.05 , ##P<0.01。
　　 note:Com pared wi th the normal cont rol , ＊＊ P <0.01;com-
pared wi th the model group;#P<0.05 , ##P<0.01.
3.3　肝脏组织病理观察
正常组小鼠肝脏组织结构正常 , 外观呈红褐色 , 质地软
而富有弹性 , 无变性 , 坏死等病理变化。模型组小鼠肝脏体
积变大 , 质脆 , 边缘钝而厚 , 表面呈黄褐色。显微镜下观
察 , 肝小叶结构破坏 , 中央静脉周围肝细胞变性坏死 , 伴炎
细胞浸润 , 汇管区周围肝细胞气球样变性。联苯双酯对照组
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C ent ral S outh Ph arm acy.Ap ri l 2010 , Vol.8 No.4　中南药学 2010年 4月第 8卷第 4期
小叶中央静脉周围个别肝细胞水样变性 , 伴炎细胞浸润。
TFA 剂量组肝脏略有水肿 , 质地柔软;镜下见肝小叶结构
基本完整 , 细胞排列较整齐 , 肝细胞轻度水肿 , 中央静脉周
围肝细胞轻度变性坏死 (见图 1)。
图 1　各组小鼠组织切片 (HE×200)
Fig 1　Staining of liver t iss ues
A.正常组对照组 (normal cont rol group);B.模型对照组 (m odel
g rou p);C.阳性药联苯双酯组 (high grou p of T AF);D.TFA 给
药组 (TFA g rou p)(300 mg· k g -1)
4　讨论
CCl4 是一种毒性很强的化学物质 , 进入机体后 , 在肝脏
内经肝细胞色素 P450激活, 生成三氯甲基自由基 (CCl3 ·)
和氯自由基 (Cl·), 导致肝微粒体的脂质过氧化[ 7] 。由于
脂质过氧化反应增强而抗氧化能力降低导致自由基增多 , 进
而攻击脂质细胞膜 , 引起肝细胞脂质过氧化性损伤 , 使肝细
胞变性坏死 , 细胞内 ALT 、 AS T 大量释放[ 8-9] 。肝脏外观呈
土黄色 , 病理检查可见肝脏炎症细胞浸润 、 脂肪变性 、 混浊
肿胀 、 气球样变和肝细胞坏死[ 8] 。
有文献[ 9]报道化合物中的酚羟基是抗脂质过氧化作用的
功能基团 , 小叶黑柴胡茎叶所含黄酮类化合物主要有槲皮
素 、 芦丁等[ 10]含有酚羟基结构基团 , 因而发现 TFA 具有保
肝护肝作用。本实验结果显示 , TFA 能显著降低血清 A LT
和 AST 活力 (P <0.01), 能明显的降低肝脏组织中 MDA
的含量 (P<0.01)和提高 SOD 的活力 (P <0.01), 以此
增强肝细胞抗氧化 、 清除自由基 、 抑制脂质过氧化的能力。
TFA 明显降低肝组织中 MDA 的含量机制是其所含酚羟基
的抗脂质过氧化作用 , 直接捕捉 、 清除自由基 , 生成自由基
中间体 , 阻断或终止自由基连锁反应链 , 从而阻止或抑制氧
自由基反应和脂质过氧化反应 , 最终抑制脂质过氧化终产物
MDA 的生成[11] 。TFA 同时明显提高肝脏 SOD 活力 (P <
0.01), 这与黄酮类化合物参与调节和提高体内抗氧化酶的
活性有关[ 12-13] 。实验结果发现 , TFA 中剂量组在降低血清
ALT 方面优于高剂量组和低剂量组 , 而在降低肝组织 MDA
方面却落后高剂量和低剂量;高剂量组在降低血清 AST 和
提高肝组织 SOD活性方面优于其他 2 个剂量组 , 说明 TFA
在保肝降酶方面没有明显的剂量依赖性 , 也可能由于小鼠自
身耐受力不同导致结果没有规律性。病理学检查表明 , TFA
能明显预防急性肝损伤 , 减轻肝细胞形态结构的损伤 , 提示
TFA 具有保护损伤肝细胞的作用。
综上所述 , 小叶黑柴胡茎叶总黄酮保肝降酶作用明显 ,
对 CCl4 所致急性肝损伤小鼠有很好的保护作用。
参考文献
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(收稿日期:2010-01-19;修回日期:2010-02-24)
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