全 文 ：基金项目：新疆维吾尔自治区科技厅科技支撑计划（２０１２３３１３４）
作者简介：关新莉（１９６９－），女，本科，主管药师，研究方向：药物制剂研究。
通信作者：周晓英，女，硕士，教授，硕士生导师，研究方向：有机化学与天然药物化学，Ｅ－ｍａｉｌ：ｔｉａｎｓｈｕｇｅ＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｍ。
ＨＰＬＣ法测定异叶青兰中迷迭香酸的含量
关新莉１，李　洁２，王东东２，周晓英３
（１新疆博尔塔拉蒙古自治州人民医院药剂科，新疆　博乐　８３３４００；新疆医科大学２中医学院，３药学院，乌鲁木齐　８３００１１）
摘要：目的　建立异叶青兰中迷迭香酸含量的 ＨＰＬＣ测定方法。方法　采用高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）测定
异叶青兰中迷迭香酸的含量。色谱条件：Ｋｒｏｍａｓｉｌ　Ｃ１８柱（４．６ｍｍ ×１５０ｍｍ，５μｍ），流动相为甲醇－１．５％乙酸水
（３８∶６２），流速为１．０ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长为３３０ｎｍ，柱温２５℃。结果　迷迭香酸峰面积与进样量在０．３０５　６～
３．９７２　８μｇ范围内有良好的线性关系 （ｒ＝０．９９９　９），平均回收率为９８．７７％，ＲＳＤ为１．１９％ （ｎ＝６）。结论　
ＨＰＬＣ法操作简单、准确可靠，可用于异叶青兰中迷迭香酸含量的测定。
关键词：异叶青兰；迷迭香酸；高效液相色谱法；含量测定
中图分类号：Ｒ９１７　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９－５５５１（２０１３）０９－１２８４－０３
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｒｏｓｍａｒｉｎｉｃ　ａｃｉｄ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｉｎ　Ｄｒａｃｏｃｅｐｈａｌｕｍ　ｈｅｔｅｒｏｐｈｙｌｌｕｍ
Ｂｅｎｔｈ．ｂｙ　ＨＰＬＣ
ＧＵＡＮ　Ｘｉｎｌｉ　１，ＬＩ　Ｊｉｅ２，ＷＡＮＧ　Ｄｏｎｇｄｏｎｇ２，ＺＨＯＵ　Ｘｉａｏｙｉｎｇ３
（１　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，ｔｈｅ　Ｐｅｏｐｌｅ’ｓ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｂｅｒｔａｌａ　Ｍｏｎｇｏｌ　Ａｕｔｏｎｏｍｏｕｓ　Ｐｒｅｆｅｃｔｕｒｅ，
Ｘｉｎｊｉａｎｇ　Ｂｏｌｅ　８３３４００，Ｃｈｉｎａ；２　Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　ＴＣＭ，３　Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，
Ｘｉｎｊｉａｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｕｒｕｍｑｉ　８３００１１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　 Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｒｏｓｍａｒｉｎｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ
Ｄｒａｃｏｃｅｐｈａｌｕｍ　ｈｅｔｅｒｏｐｈｙｌｌｕｍ　Ｂｅｎｔｈ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　Ｒｏｓｍａｒｉｎｉｃ　ａｃｉｄ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ＨＰＬＣ．
Ｔｈｅ　ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｃａｒｒｉｅｄ　ｏｕｔ　ｏｎ　ａ　Ｋｒｏｍａｓｉｌ　Ｃ１８ｃｏｌｕｍｎ（１５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）．Ｔｈｅ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ
ｗａｓ　Ｍｅｔｈａｎｏｌ－１．５％ Ａｃｅｔｉｃ　ａｃｉｄ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ（３８∶６２）；ｔｈｅ　ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　１．０ｍＬ／ｍｉｎ；ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｖｅ　ｗａｖｅ－
ｌｅｎｇｔｈ　ｗａｓ　ｓｅｔ　ａｔ　３３０ｎｍ．Ｔｈｅ　ｃｏｌｕｍｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｗａｓ　２５℃．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ　ｃｕｒｖｅ　ｓｈｏｗｅｄ　ｇｏｏｄ
ｌｉｎｅａｒｉｔｙ　ｏｖｅｒ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　０．３０５　６～３．９７２　８μｇ（ｒ＝０．９９９　９）．Ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｗａｓ　９８．７７％ ｗｉｔｈ
ＲＳＤ　１．１９％ （ｎ＝６）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ｒａｐｉｄ，ａｃｃｕｒａｔｅ，ｒｅｌｉａｂｌｅ；ｉｔ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ａｓ　ａ　ｄｅｔｅｒ－
ｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｒｏｓｍａｒｉｎｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　Ｄｒａｃｏｃｅｐｈａｌｕｍ　ｈｅｔｅｒｏｐｈｙｌｌｕｍ　Ｂｅｎｔｈ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｄｒａｃｏｃｅｐｈａｌｕｍ　ｈｅｔｅｒｏｐｈｙｌｌｕｍ　Ｂｅｎｔｈ．；Ｒｏｓｍａｒｉｎｉｃ　ａｃｉｄ；ＨＰＬＣ；ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
　 　 异 叶 青 兰 （Ｄｒａｃｏｃｅｐｈａｌｕｍ　ｈｅｔｅｒｏｐｈｙｌｌｕｍ
Ｂｅｎｔｈ．）为唇形科青兰属植物，又名白花枝子花，在
国外主要分布于中亚、印度、尼泊尔和阿富汗等地，
国内分布于新疆、西藏、青海、甘肃、宁夏、内蒙古，在
新疆主要分布于阿尔泰山、准噶尔西部山地、天山、
昆仑山、帕米尔高原的山地草原［１］。药用部位地上
部分，有平肝、清热作用，主要用于治疗黄疸性发烧、
肝热、热性病头痛、眼翳、口腔溃疡、支气管炎、高血
压等多种病症［２］。异叶青兰含有挥发油类、多糖类、
有机酸类、黄酮类、萜类等化学成分［３－９］。从异叶青
兰提取物中分离鉴定出的迷迭香酸是其活性成分之
一，具有广泛的药理作用，如抗氧化、抗肿瘤、抗真
菌、降血压、抗过敏、抗 ＨＢＶ、心肌保护及冠心病治
疗等作用［１０－１４］。本实验参考文献［１５］建立高效液
相色谱法（ＨＰＬＣ），测定异叶青兰中迷迭香酸含量，
有助于异叶青兰的进一步保护，为其开发提供参考。
１　仪器与试药
１．１　仪器　高效液相色谱仪ＬＣ－６ＡＤ、ＣＢＭ－２０Ａ
色谱工作站、ＳＰＤ－２０Ａ型紫外检测器、ＳＩＬ－２０Ａ型
自动进样器、ＣＴＯ－１０ＡＳｖｐ型柱温箱（日本岛津公
　第３６卷　第９期 新 疆 医 科 大 学 学 报 Ｖｏｌ．３６　Ｎｏ．９
　２０１３年９月 Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｘｉｎｊｉａｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｅｐ．２０１３
司），ＸＳ１０５型电子天平（德国，梅特勒－托利多）。
１．２　样品与试剂　甲醇为色谱纯，其他均为分析
纯，水为娃哈哈饮用纯净水，迷迭香酸对照品（ｓｉｇ－
ｍａ－ＡＬＤＲＩＣＨ，批号：ＣＦＡＥ－５３６９５４－５Ｇ），异叶青兰
全株采集于新疆和田地区，由新疆维吾尔自治区中
医医院李永和主任药师鉴定为唇形科植物异叶青兰
（Ｄｒａｃｏｃｅｐｈａｌｕｍ　ｈｅｔｅｒｏｐｈｙｌｌｕｍ　Ｂｅｎｔｈ．），阴干全
株异叶青兰并粉碎，即得供试样品。
２　方法与结果
２．１　色谱条件　色谱柱：Ｋｒｏｍａｓｉｌ　Ｃ１８柱（４．６ｍｍ
×１５０ｍｍ，５μｍ），流动相：甲醇－１．５％乙酸水
（３８∶６２），检 测 波 长 ３３０ｎｍ，柱 温 ２５℃，流 速
１．０ｍＬ／ｍｉｎ。在上述色谱条件下，迷迭香酸与供试
品中其他组分色谱峰可达到基线分离，分离度复合
要求，迷迭香酸峰理论塔板数不低于２０００，迷迭香
酸及异叶青兰供试样品色谱图见图１。
２．２　对照品溶液的制备　称取迷迭香酸对照品
７．６４ｍｇ，用甲醇定容于２５ｍＬ棕色量瓶中，分别取
０．５、２．０、３．５、５．０、６．５ｍＬ用甲醇定容于１０ｍＬ棕
色量瓶中，制成一系列不同浓度的溶液。
２．３　供试品溶液的制备　精密称定干燥药材粉末
约１ｇ，置于５０ｍＬ具塞锥形瓶中，加入甲醇１０ｍＬ，
称取重量，浸泡３０ｍｉｎ，用超声避光提取（功率
５００Ｗ，频率４０ＫＨｚ）３０ｍｉｎ，取出放冷，再次称取
重量，减失的重量用甲醇补足，摇匀，用０．４５μｍ微
孔滤膜滤过，即得供试品溶液。
２．４　线性关系考察　精密吸取对照品溶液１５μＬ，
然后进样分析，以对照品的进样量（Ｘ，μｇ）为横坐
标，峰面积积分值（Ｙ）为纵坐标，进行性线性拟合，
绘制标准曲线，得迷迭香酸线性回归方程为Ｙ ＝
２３７３　４１８　Ｘ－２０４　２６８（ｒ＝０．９９９　９），结果表明，迷迭
香酸进样量在０．３０５　６～３．９７２　８μｇ范围内，峰面积
与进样量呈现良好的线性关系。
　　
ａ：对照品 　　　　　　　　ｂ：异叶青兰供试样品
图１迷迭香酸标准品及样品的ＨＰＬＣ色谱图
２．５　精密度试验　精密吸取迷迭香酸对照品溶液
１０μＬ，连续进样５次，结果迷迭香酸峰面积ＲＳＤ为
１．２６％，表明仪器精密度较好。
２．６　稳定性试验　取同一异叶青兰供试品溶液，分
别于０、２、４、６、８、１０、１２、２４ｈ进样１５μＬ测定，结果
迷迭香酸标准品峰面积ＲＳＤ为２．５９％，表明供试
品溶液在２４ｈ内基本稳定。
２．７　重复性试验　称取异叶青兰样品５份，按
“２．３”项下方法配制成供试液，并在上述色谱条件下
进样１５μＬ进行测定。结果供试品中迷迭香酸含量
的ＲＳＤ为１．１７％，表明该实验方法的重复性较好。
２．８　加样回收率试验　分别称取６份已知含量异叶
青兰药材粉末０．５ｇ，分别置于５０ｍＬ具塞锥形瓶中，
精密称取迷迭香酸对照品２ｍｇ置５０ｍＬ棕色量瓶中，
用甲醇定容至刻度。每个具塞锥形瓶中分别准确对照
品溶液５ｍＬ和甲醇５ｍＬ，按“２．３”项下方法制成供试
品溶液，在上述色谱条件下进样１５μＬ测定，结果计算
得到平均回收率为９８．７７％，ＲＳＤ为１．１９％，见表１。
２．９　样品含量测定　分别精密吸取供试品溶液
１５μＬ，注入液相色谱仪，在上述色谱条件下进行测
定，每样平行测定３份，计算样品中迷迭香酸的含量，
结果民丰县产异叶青兰迷迭香酸含量较高，见表２。
表１　加样回收率试验结果
编号 样品称量／ｇ 样品含量／ｍｇ 加入对照品量／ｍｇ 实测总量／ｍｇ 回收率／％ 平均回收率／％ ＲＳＤ／％
１　 ０．５０４　０　 ０．２１２　 ０．２００　 ０．４１２　 １００．１６
２　 ０．５０１　５　 ０．２１１　 ０．２００　 ０．４０８　 ９８．６９
３　 ０．５０１　８　 ０．２１１　 ０．２００　 ０．４０５　 ９７．１２　 ９８．７７　 １．１９
４　 ０．５０１　８　 ０．２１１　 ０．２００　 ０．４１０　 ９９．６２
５　 ０．５００　７　 ０．２１０　 ０．２００　 ０．４０９　 ９９．３５
６　 ０．５０３　９　 ０．２１２　 ０．２００　 ０．４０７　 ９７．６８
５８２１　第９期 关新莉，等：ＨＰＬＣ法测定异叶青兰中迷迭香酸的含量
表２　样品含量测定结果（ｎ＝３）
样品编号 产地 迷迭香酸含量／（ｍｇ／ｇ） ＲＳＤ／％
１ 和田地区民丰县 ０．４２　 １．９５
２ 和田地区策勒县 ０．４０　 ２．３７
３ 和田地区于田县 ０．２９　 １．１３
３　结论
波长扫描结果表明迷迭香酸在 ２８０ｎｍ 和
３３０ｎｍ处有吸收峰，异叶青兰样品进样发现，样品
在３３０ｎｍ 处目标峰分离度较好，无干扰，故选定
３３０ｎｍ为检测波长。３批样品皆采集自昆仑山山
脉，含量测定结果表明，民丰县产异叶青兰迷迭香酸
含量较高，可能与植物生长的海拨、光照、降水量有
一定的关系。
在甲醇溶液中迷迭香酸比较稳定，由于对光线
和高温敏感，因此实验操作过程中应避免光线和高
温，采用棕色容量瓶储存测定。测定异叶青兰中迷
迭香酸的含量使用的是高效液相色谱法，样品处理
简单，色谱峰保留时间适宜，分离度良好，为异叶青
兰中迷迭香酸的定量分析提供依据。
参考文献：
［１］　新疆植物志编辑委员会．新疆植物志：第四卷［Ｍ］．乌鲁木齐：
新疆科学技术出版社，２００４：２６５．
［２］　秦波，鲁润华，汪汉卿，等．异叶青兰挥发性化学成分研究
［Ｊ］．天然产物研究与开发，１９９９，１２（１）：４．
［３］　陈昭辉，李玉莲，赵庆春，等．异叶青兰提取工艺的研究［Ｊ］．
中国现代应用药学，１９９８，１５（５）：１０．
［４］　杨丽娜，邢建国，何承辉，等．维药香青兰的化学成分与药理
作用评价［Ｊ］．世界临床药物，２０１３，３４（４）：２２６－２３１．
［５］　师炜，柴尔峰．异叶青兰低极性成分分析［Ｊ］．甘肃教育学院
学报，２０００，１４（４）：５０－５１．
［６］　任爱梅．异叶青兰化学成分及抑菌活性研究［Ｊ］．中草药，
２０１１，４２（４）：６６４－６６７．
［７］　凯赛尔·阿不拉，敏德．香青兰生药学研究［Ｊ］．中国民族医
药杂志，２００７，１３（１２）：３４－３６．
［８］　翁剑锋，陈浩．维药香青兰研究新进展［Ｊ］．江西中医学院学
报，２０１１，２３（２）：８１－８３．
［９］　余江柳，艾来提·苏里坦．异叶青兰总黄酮提取工艺研究［Ｊ］．
生物技术，２００７，１７（５）：７９－８１．
［１０］　孙峋，汪靖超，李洪涛，等．迷迭香酸的抗菌机理研究［Ｊ］．
青岛大学学报：自然科学版，２００５，１８（４）：４１－４５．
［１１］　吴建章，郁建平，赵东亮，等．迷迭香酸的研究进展［Ｊ］．天
然产物研究与开发，２００５，１７（３）：３８３－３８８．
［１２］　曹树稳，余燕影，温辉梁，等．迷迭香提取物的抗乳腺癌活性
研究［Ｊ］．营养学报，２００１，２３（３）：２２５－２２９．
［１３］　王虹，刘敏，顾建祥，等．迷迭香酸对Ｄ－半乳糖致衰老小鼠抗氧
化作用的研究［Ｊ］．中国老年学杂志，２００９，２９（５）：５４９－５５１．
［１４］　苏平，王根女，吴丹，等．迷迭香酸的生理活性功能及其来源
研究进展［Ｊ］．食品与发酵工业，２００８，３４（１２）：１３５－１３８．
［１５］　王东东，刘宏炳，宋海龙，等．ＨＰＬＣ法测定阜康阿魏根和
叶中阿魏酸的含量［Ｊ］．新疆医科大学学报，２０１２，３５（９）：
１１３９－１１４２．
［收稿日期：２０１３－０６－０３］
（本文编辑　施洋

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　　洋甘菊因产地不同、功效不同而分为罗马甘菊
和德国甘菊［１０］。目前，国内市场上出售洋甘菊产品
主要是洋甘菊精油和洋甘菊花茶，新疆伊犁地区种
植的品种是罗马甘菊，和田地区种植的品种是德国
甘菊，研究德国洋甘菊中６种微量元素的含量对补
充生物体内的元素具有重要的意义。
参考文献：
［１］　新疆卫生厅．维吾尔药标准：上册［Ｓ］．乌鲁木齐：新疆科技卫
生出版社，１９９３：２５５．
［２］　郑金臣，全山丛，张虹，等．值得重视的归化药用和香料植物－母
菊（洋甘菊）［Ｊ］．中草药，１９９６，２７（９）：５６８－５７１．
［３］　李涛，王元忠，虞泓，等．火焰原子吸收光谱法测定中草药川东
獐牙菜中的八种微量元素［Ｊ］．光谱学与光谱分析，２００７，２７
（１２）：２５９８－２６００．
［４］　王新平．火焰原子吸收光谱法测定中草药剑花中的８种微量元
素［Ｊ］．光谱学与光谱分析，２００５，２５（２）：２９３－２９５．
［５］　付川，祁俊生．原子吸收光谱法测定中药中微量元素［Ｊ］．光谱
学与光谱分析，２００３，２３（３）：６１７－６１８．
［６］　薛国庆，刘青，韩玉琦，等．火焰原子吸收法测定栽培小茴香中
１３种金属元素含量［Ｊ］．光谱学与光谱分析，２００６，２６（１０）：
１９３５－１９３８．
［７］　周晓英，王东东，辛禄德，等．微波消解－ＦＡＡＳ法测定新疆６种
红枣中的８种金属元素［Ｊ］．新疆医科大学学报，２０１０，３３（１１）：
１３１２－１３１３．
［８］　田树革，周晓英，徐暾海，等．微波消解－ＦＡＡＳ法测定维药唇香
草中十种金属元素［Ｊ］．光谱学与光谱分析，２００９，２９（７）：１９９３－
１９９６．
［９］　单振芬．微量元素与人体健康［Ｊ］．微量元素与健康研究，２００６，
２３（３）：６６－６７．
［１０］　韩松林，李新霞，勉强辉，等．薄层生物自显影技术比较新疆２
种洋甘菊抗氧化活性［Ｊ］．中国中药杂志，２０１３，３８（２）：１９３－
１９７．
［收稿日期：２０１３－０４－０９］
（本文编辑　施洋）
６８２１ 新 疆 医 科 大 学 学 报 第３６卷