全 文 ：第 26卷 第 8期
2 0 0 9 年 8 月
沈　阳　药　科　大　学　学　报
JournalofShenyangPharmaceuticalUniversity
Vol.26 　No.8
Aug.2009 p.633
收稿日期:2008-10-21
作者简介:张加 (1983 -), 女 (汉族), 吉林长春人 , 硕士研究生 , E-mailzhangjia lillian@ hotmail.com;
毕开顺(1956-),男(汉族),河北丰南人 , 教授 ,博士 , 主要从事中药现代化研究 , Tel.024-23986296, E-mailksbi@
mail.sy.ln.cn。
文章编号:1006-2858(2009)08-0633-03
RP-HPLC法测定不同产地荜澄茄中芦丁的含量
张　加 , 陈晓辉 , 刘　洋 , 谢　普 , 毕开顺
(沈阳药科大学 药学院 ,辽宁 沈阳 110016)
摘要:目的 建立测定不同产地荜澄茄中芦丁含量的 RP-HPLC法。方法 采用 KromasilC
18
色谱柱
(250 mm×4.6 mm, 5μm),以甲醇 -体积分数为 0.05%的磷酸(体积比为 38∶62)为流动相 , 流速
为 1 mL·min-1 , 检测波长为 254 nm。 结果 芦丁的质量浓度在 1.664 ～ 62.400 mg·L-1 (r=
0.999 4)内与色谱峰面积呈良好线性关系 , 平均回收率为 101.2%(RSD=2.3%)。结论 该方法可
作为该药材质量控制的一项指标。
关键词:荜澄茄;芦丁;反相高效液相色谱法;含量测定
中图分类号:R917　　　文献标志码:A
　　荜澄茄是樟科植物山鸡椒 [ Litseacubeba
(Lour.)pers.]的干燥成熟果实 ,有温中散寒 、行
气止痛之功效 [ 1] 。药理学研究表明其有抗菌 、抗
炎 、抗过敏 、平喘 、治疗冠心病和心肌梗塞等作
用 [ 2-3] 。目前 ,对荜澄茄的化学成分研究仅限于
挥发油类和脂肪油类成分 ,其他化学成分的研究
尚未见报道 。为了充分利用我国珍贵的中药材资
源 ,作者对荜澄茄中黄酮类成分进行了研究 ,并建
立了芦丁的含量测定方法 。芦丁(结构式见图 1)
作为黄酮类成分 ,具有抗自由基 、抗脂质过氧化 、
抗病毒等药理活性 , 在药学和食品上倍受关
注 [ 4] 。作者首次建立了荜澄茄中芦丁含量的反
相高效液相色谱测定法 ,并应用于不同产地 15批
荜澄茄药材的含量测定。
Fig.1　Thestructureofrutin
1　仪器与材料
LC-10ATvp高效液相色谱仪(SPD-10Avp
紫外检测器 、LC-10ATvp高压泵 、汉邦科技HB-
230A柱温箱 ,日本 Shimadzu公司), AB135-S天
平(瑞典 MetlerToledo公司), SZ-96自动纯水
蒸馏器(上海亚荣生化仪器厂), UV 265FW型紫
外分光光度计(日本 Shimadzu公司), RE52A旋
转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂), DK98 1型电
热恒温水浴锅(天津市泰斯特仪器有限公司)。
对照品芦丁由作者所在实验室自制(纯度质
量分数大于 98.5%),甲醇(色谱纯 ,山东禹王化
学试剂公司),磷酸(优级纯 ,天津康科德科技有
限公司),水为自制重蒸水 。
15批荜澄茄药材购于江苏 、福建 、广西等省 ,
经沈阳药科大学中药学院孙启时教授鉴定为正
品 。
2　方法与结果
2.1　供试品溶液的配制
取荜澄茄药材粉末约 1 g,精密称定 ,置圆底
烧瓶中 ,加入 20 mL甲醇 ,回流提取 2次 ,每次提
取 20 min,合并提取液并回收溶剂 ,甲醇溶解残渣
并转移至 10 mL量瓶中 ,用甲醇稀释至刻度 ,摇
匀 ,经 0.22 μm微孔滤膜过滤 ,取续滤液备用。
2.2　对照品溶液的配制
称取对照品芦丁适量 ,精密称定 ,加甲醇溶解
并定容 ,配制成质量浓度为 0.208 g·L-1的对照品
储备液 ,摇匀 ,经 0.22 μm微孔滤膜过滤 ,取续滤
液备用 。
2.3　色谱条件与系统适用性试验
采用 KromasilC18色谱柱(250 mm×4.6 mm,
DOI :10.14066/j.cnki .cn21-1349/r.2009.08.007
5 μm),以甲醇 -体积分数为 0.05%的磷酸(体积
比为 38∶62)为流动相 ,流速为 1 mL·min-1 ,检测
波长为 254 nm,柱温为 35 ℃,进样量 20 μL,分析
时间为 30 min。在上述色谱条件下分析 ,理论塔
板数按芦丁计算不低于5 000,样品中芦丁与相邻
峰分离度大于 1.5,色谱图见图 2。
1— Rutin
Fig.2　HPLCchromatogramsofreferencesubstance(a)andsample(b)
2.4　线性关系试验
分别精密量取芦丁对照品储备液 0.4、2.0、
4.0、6.0、8.0、15.0 mL置 50 mL量瓶中 ,加甲醇
稀释并定容至刻度 ,摇匀 ,得标准系列溶液 ,分别
取标准系列溶液在上述色谱条件下分析。以对照
品溶液质量浓度 ρ为横坐标 ,峰面积 A为纵坐标 ,
得到芦丁的回归方程为:A=1.691 ×107ρ-
1.194 ×104 , r=0.999 4(n=6)。结果表明芦丁
在 1.664 ～ 62.400 mg·L-1内呈良好线性关系。
2.5　精密度试验
取对照品溶液在上述色谱条件下连续进样 6
次 ,结果表明芦丁峰面积的 RSD为 1.0%,表示仪
器精密度良好。
2.6　重复性试验
将同一批荜澄茄样品(No.14)按 “2.1”条方
法制备供试品溶液 6份 ,在上述色谱条件下测定 ,
测得芦丁含量的 RSD为 2.2%,表示该方法重复
性良好 。
2.7　稳定性试验
取同一供试品溶液 ,分别在 0、2、4、8、12 h按
上述色谱条件测定 ,测得供试品芦丁峰面积的
RSD为 1.1%,说明供试品溶液在 12 h内稳定 。
2.8　回收率试验
取已知含量的荜澄茄样品(No.14)9份 ,每份
0.5 g,精密称定 ,每组按低 、中 、高浓度分别精密
加入芦丁对照品溶液 ,每一浓度 3份 ,按 “ 2.1”条
方法操作 ,在上述色谱条件下进行分析 ,计算低 、
中 、高浓度芦丁的回收率 ,结果见表 1。
Table1　Recoveriesoftutin(n=9)
No. moriginal/mg madded/mg mfound/mg Recovery/% x/% RSD/%
1 0.1633 0.08 0.1715 102.5
2 0.1623 0.08 0.1702 98.8
3 0.1610 0.08 0.1692 102.5
4 0.1715 0.16 0.3333 101.1
5 0.1698 0.16 0.3304 100.4 101.2 2.3
6 0.1714 0.16 0.3335 101.3
7 0.1659 0.24 0.4093 101.4
8 0.1690 0.24 0.4094 100.2
9 0.1636 0.24 0.3956 96.7
2.9　样品测定
将不同产地的荜澄茄样品分别按 “2.1”条方
法制备供试品溶液 ,在上述色谱条件测定 ,以外标
法计算样品的含量 ,结果见表 2。
3　讨论
a.检测波长的选择:将对照品溶液在 190 ～
400 nm内进行紫外扫描 ,发现 204、254、360 nm
634 沈　阳　药　科　大　学　学　报 第 26卷　
Table2　Contentsofrutinindifferentsamples(×10 -3 ,
n=3)
No. Location w/% No. Location w/%
1 ZhejiangⅠ 15.130 9 Jiangsu 10.080
2 ZhejiangⅡ - 10 Sichuan 7.077
3 HubeiⅠ 12.010 11 Yunnan 7.940
4 HubeiⅡ 11.580 12 Jiangxi 17.820
5 GuangxiⅠ 2.357 13 Hunan 6.082
6 GuangxiⅡ 6.862 14 Fujian 33.410
7 GuangxiⅢ 5.600 15 Guangdong 10.590
8 GuangxiⅣ 5.359
处有 3个最大吸收峰。考虑到在短波长处样品中
其他成分的干扰较大 ,结合供试品溶液中芦丁在
3种波长下的液相色谱分离效果 ,选择 254 nm作
为检测波长 。
　　b.流动相的选择:作者曾尝试甲醇 -水系统
作为流动相 ,结果芦丁色谱峰存在拖尾现象 ,又考
查了甲醇 -醋酸 、甲醇 -磷酸 、甲醇 -磷酸二氢钾
-磷酸系统 ,发现甲醇 -磷酸和甲醇 -磷酸二氢
钾 -磷酸系统改善拖尾现象明显 ,但长时间使用
缓冲盐系统容易对色谱柱和仪器造成损伤 ,故选
择既保护仪器又有良好分离效果的甲醇 -体积分
数为0.05%的磷酸溶液系统作为流动相。
c.提取工艺考查:作者以芦丁的含量为指
标 ,考查提取工艺 。采用加热回流提取法考查了
水 、甲醇 、乙醇 、乙酸乙酯 、氯仿的提取效率 ,结果
表明甲醇提取效率高 。以甲醇作为提取溶剂比较
了加热回流提取和超声提取两种提取方法 ,结果
加热回流提取芦丁更完全 。采用正交实验设计 ,
选择溶剂用量 、提取时间和提取次数 3个因素 ,每
个因素进行 3水平考察 ,用 L9(34)正交表进行实
验设计的优选 ,通过直观分析和方差分析 ,最后确
定提取工艺为 20倍量甲醇加热回流提取 2次 ,每
次 20 min。
d.作者收集了 15批不同产地的荜澄茄样
品 ,首次对荜澄茄中黄酮类成分芦丁进行了含量
测定 ,测定结果表明各产地荜澄茄中芦丁含量差
异较大:福建产地的荜澄茄中芦丁含量是广西 Ⅰ
产地含量的近 14倍 ,而浙江 Ⅱ产地的荜澄茄中未
检测到芦丁 。作者建立的荜澄茄中芦丁含量的高
效液相色谱测定法 ,简单 、准确 、可靠 ,可以作为荜
澄茄质量控制的一项指标 。
参考文献:
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进展 [ J] .医药导报 , 2007, 26(7):758-760.
DeterminationofthecontentofrutininLitseacubeba
byRP-HPLC
ZHANGJia, CHENXiao-hui, LIUYang, XIEPu, BIKai-shun
(SchoolofPharmacy, ShenyangPharmaceuticalUniversity, Shenyang110016, China)
Abstract:ObjectiveTodescribeamethodfordeterminingrutininLitseacubebabyRP-HPLC.Methods
ThedeterminationwascariedoutoverKromasilC18 column(250 mm×4.6 mm, 5 μm).Themobilephase
consistedofmethanol-0.05%(w)phosphoricacidaqueoussolution(V∶V=38∶62).Theflowratewas
1 mL·min-1 , anddetectionwavelengthwassetat254 nm.ResultsGoodlinearitywasobservedintherange
of1.664 -62.400 mg·L-1(r=0.999 4)forrutin.Theaveragerecoveryofrutinwas100.5%(RSD=
1.0%).ConclusionsThemethodissimple, accurateandreliable;itcanbeusedforthequalitycontrolof
Litseacubeba.
Keywords:Litseacubeba;rutin;RP-HPLC;contentdetermination
635第 8期 张　加等:RP-HPLC法测定不同产地荜澄茄中芦丁的含量