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苏合香不同提取方法的气相色谱-质谱研究



全 文 :胞和血红蛋白含量。
3. 3 对环磷酰胺所致小鼠白细胞减少的影响 结果见表 3。
表 3 毛木耳对环磷酰胺所致贫血小鼠的影响(珋x ± s)
分组 n
给药量
/ g·kg -1
WBC
/ × 1012·L -1
正常对照 10 - 6. 71 ± 1. 66
模型对照 10 - 1. 96 ± 0. 42**
毛木耳低剂量 9 0. 75 2. 37 ± 0. 65
毛木耳中剂量 10 1. 5 2. 52 ± 0. 62△
毛木耳高剂量 12 3 2. 60 ± 0. 63△
与正常对照组比较,**P < 0. 01;与模型对照组比较,△P < 0. 05
与正常对照组比较,注射环磷酰胺造模后小鼠白细胞含量显
著降低(P < 0. 01)。灌胃 10 d后随着剂量的增加,小鼠白细胞含
量明显增加,中剂量和高剂量组分别较模型组增加 28. 5%和
32. 6%,与模型组比具有明显差异(P < 0. 05)。表明毛木耳能升
高白细胞减少症小鼠白细胞含量。
4 讨论
本次实验选用不同贫血模型探讨了毛木耳的补血作用。毛
木耳能提高贫血模型小鼠红细胞、血红蛋白、白细胞含量,具有升
高全血的作用。
乙酰苯肼作为一种强氧化剂对红细胞有较缓慢的损伤作用,
可在红细胞膜代谢过程中破坏 SOD、GSH 等组成的抗氧化保护
系统,从而导致溶血性贫血[6]。而环磷酰胺作为一种细胞毒制
剂可抑制骨髓造血功能,使造血细胞减少[7]。此复合模型可造
成动物溶血性贫血并使贫血时间延长。试验结果显示毛木耳具
有升高 APH + CTX所致的溶血性贫血小鼠红细胞数量,并呈剂
量依赖性,高剂量效果显著。因此推测毛木耳可能通过降低乙酰
苯肼诱导的红细胞膜氧化损伤,同时刺激骨髓造血功能达到升高
红细胞数量的作用。
失血性贫血模型小鼠的主要表现为红细胞和血红蛋白数量
显著下降,但可促进骨髓造血干细胞造血[8],毛木耳能升高失血
性小鼠外周血红细胞和血红蛋白数量。表明毛木耳能进一步增
强骨髓造血干细胞的造血功能从而使小鼠贫血症状得到缓解。
本文证实了毛木耳的补血作用,但其补血有效部位及其相关
作用机制尚有待进一步研究。毛木耳目前是我国的主栽食用菌
之一,栽培范围广、产量大,但其下游加工产品长期缺乏。通过对
木耳升血补血功效及其物质基础的研究,将有利于相关产品的开
发,促进毛木耳产业发展。
参考文献:
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收稿日期:2011-12-06; 修订日期:2012-03-29
基金项目:国家“973”重点基础研究发展规划项目(No. 2007CB512606)
作者简介:彭 颖(1986-) ,女(汉族) ,四川崇州人,现为成都中医药大学药学院在读硕士研究生,,学士学位,主要从事中药药效物质基础及质量标准
研究工作.
* 通讯作者简介:夏厚林(1964-) ,男(汉族) ,四川大竹人,现任成都中医药大学教授,博士学位,主要从事中药药效物质基础及质量标准研究工作.
苏合香不同提取方法的气相色谱 -质谱研究
彭 颖,夏厚林* ,周 颖,王 建,黄立华
(成都中医药大学,四川 成都 611137)
摘要:目的 考察苏合香不同提取方法的化学成分异同。方法 应用气相色谱 -质谱联用技术,分析比较溶剂提取部位
(石油醚和乙醚提取)、水蒸气蒸馏提取挥发油、顶空固相微萃取挥发性成分的异同。结果 苏合香溶剂提取鉴定出 27 个
化合物(其中石油醚部位 23 个化合物、乙醚部位 10 个化合物) ,水蒸气蒸馏提取的挥发油鉴定出 42 个化合物,顶空固相
微萃取鉴定出 28 个化合物。3 种方法所得成分中皆含有 α -蒎烯、莰烯、Bornyl Cinnamate 2 和马苄烯酮等 10 种化学成
分,溶剂提取与水蒸气蒸馏所得的成分中有 14 种相同成分,水蒸气蒸馏提取与顶空固相微萃取有 24 个相同成分。结论
3 种提取方法中,水蒸气提取法所得成分最多,提示该法可作为获取苏合香挥发性成分的主要方法。
关键词:苏合香; 溶剂提取; 水蒸气蒸馏; 顶空固相微萃取; 气相色谱 -质谱联用
DOI标识:doi:10. 3969 / j. issn. 1008-0805. 2012. 07. 036
中图分类号:R284. 2 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2012)07-1675-03
The GC -MS Research on Different Extraction Methods of Styrax
PENG Ying,XIA Hou-lin* ,ZHOU Ying,WANG Jian,HUANG Li-hua
(Chengdu University of Traditional Chinese Medicine,Chengdu 611137,China)
Abstract:Objective To identify the differences and similarities of chemical components obtained through different extraction
methods about Styrax.Methods Applying the GC - MS technology,the author analyzed and compared the similarities and differ-
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2012 VOL . 23 NO. 7 时珍国医国药 2012 年第 23 卷第 7 期
ences among solvent extraction (by petroleum ether and ethylether.) ,extraction of volatile oils through steam distillation and ex-
traction of volatile components through HS - SPME. Results 27 compounds were identified through the extraction of the solvent of
Styrax,including 23 compounds in the part of petroleum ether and 10 compounds in the part of ethylether. 42 compounds were i-
dentified during the volatile oils extracted by steam distillation. 28 compounds were identified through SPME. The components ob-
tained through three methods all included 10 chemical constitutions such as α - pinene,Camphene,Bornyl Cinnamate 2 and
(-)- Verbenone. 14 components obtained through solvent extraction were the same as those obtained through steam distillation.
24 components obtained through steam distillation extraction were the same as those obtained by SPME. Conclusion The steam
distillation is the main method to study the volatile components of Styrax.
Key words:Styrax; Solvent extraction; Steam Distillation; HS - SPME; GC - MS
苏合香为金缕梅科植物苏合香树 Liquidambar orientalis Mill.
的树干渗出的香树脂经加工精制而成。苏合香性温、味辛,归经于
心、脾,具有开窍、破秽、止痛之功效,用于中风痰厥、卒然昏倒、胸
腹冷痛、惊痫、湿疟[1],是芳香开窍药中使用频率较高的一味药。
应用水蒸气蒸馏[2]和超临界萃取[3]对苏合香进行 GC - MS 的研
究已有报道,但是有关苏合香溶剂提取和顶空固相微萃取 GC -
MS研究还未见报道,且前期课题组药理实验结果表明苏合香的有
效部位为石油醚部位和乙醚部位,因此,本次采用溶剂提取极性较
低的成分,而水蒸气蒸馏为挥发性成分研究最常用提取方法,顶空
固相萃取为现在新兴的挥发性成分研究方法,所以在此重点采用
溶剂提取、水蒸气蒸馏和顶空固相微萃取对苏合香进行 GC - MS
比较研究,以期为进一步研究苏合香挥发性成分奠定基础。
1 仪器与试药
气相色谱 -质谱联用仪:Agilent GC6890 / Agilent MS5973;色
谱柱:HP - INNOWax (19091N - 133) ,30 m × 0. 25 mm ×0. 25
μm;SPME手动进样手柄;75 μm Carboxen /PDMS萃取头(Supelco
公司) ;挥发油提取器;索氏提取器。所用试剂均为分析纯。
药材经成都中医药大学卢先明教授鉴定苏合香为金缕梅科
植物苏合香树 Liquidambar orientalis Mill.的树干渗出的香树脂的
加工精制品。并按《中国药典》(2010 年版)苏合香项下检验,肉
桂酸含量为 5. 12%,符合药典要求。
2 方法
2. 1 样品制备方法
2. 1. 1 溶剂提取 取苏合香 1 g,加石油醚至提取完全,减压回收
溶剂,加醋酸乙酯定容至 10 ml。作为苏合香石油醚部位;经石油
醚提取后的残渣加乙醚提取完全,减压回收溶剂,加乙酸乙酯定
容至 10 ml。作为苏合香乙醚部位。
2. 1. 2 水蒸气蒸馏提取 取苏合香药材 50 g,经常规水蒸气蒸馏提
取得苏合香油状物 0. 9 ml,收油率为 1. 8%。收集油层,干燥备用。
2. 1. 3 顶空固相微萃取(HS - SPME)使用前先将 SPME 的萃
取头在 GC的进样口以 250℃的温度老化 40 min,取苏合香样品
0. 5 g置于 5 ml 样品瓶中,盖上盖子,插入萃取头,150℃下顶空
萃取 15 min,取出后立即插入 GC进样口,解吸 5 min。
2. 2 实验条件
2. 2. 1 质谱条件 电离方式为 EI 源,电离能量为 70 eV,离子源
温度为 230℃,四极杆温度为 150℃,传输线温度为 150℃,电子倍
增器电压为 1 765 V,质量扫描范围为 20 ~ 450 amu。
2. 2. 2 色谱条件 进样口温度:250 ℃;程序升温条件:初始温度
为 50℃,以 6℃·min -1升温至 170 ℃,再以 5 ℃·min -1升温至
220 ℃,最后以 20 ℃·min -1升温至 270 ℃;(HS - SPME 所用的
温度为 150℃,未采取程序升温)载气:高纯氦气;载气流量:1. 0
ml·min -1;无分流进样;进样量:1 μl(除采用 HS - SPME制备的
样品)。
3 结果
经气相色谱数据处理系统,以面积归一化法测得挥发油各组
分相对含量。得苏合香石油醚部位、乙醚部位、苏合香挥发油和
顶空固相微萃取的总离子流图。对总离子流图中的各峰质谱扫
描后得到质谱图,经计算机质谱数据系统(G1033A,D 01.
00NlST98 标准质谱检索库)检索,人工谱图解析,并查对有关资
料,苏合香溶剂提取石油醚部位鉴定出 23 个化合物、乙醚部位
10 个化合物,水蒸气蒸馏提取的挥发油鉴定出 42 个化合物,顶
空固相微萃取鉴定出 28 个化合物。结果见表 1 ~ 4。
表 1 ~ 2 为苏合香石油醚部位和乙醚部位鉴定出的成分,因
提取过程是经石油醚乙醚依次提取,故各自所含成分相对较少,
在此将表 1 ~ 2 中的成分进行合并,合并后的化学成分种类作为
溶剂提取所得的成分种类,合并后苏合香溶剂提取得鉴定出的
27 个化学成分。对苏合香溶剂提取、水蒸气蒸馏及顶空固相萃
取所得成分进行比较,两者之间存在共有成分见表 5。
表 1 苏合香石油醚部位主要化学成分
序号 t /min 化合物 分子式
分子

相对含量
(%)
1 2. 67 丙酸乙酯 ethyl prpionate C5H10O2 102 3. 38
2 3. 21 α -蒎烯 Alpha -Pinene C10H16 136 6. 54
3 3. 70 莰烯 Camphene C10H16 136 5. 18
4 4. 22 β -蒎烯 Beta -Pinene C10H16 136 4. 85
5 4. 72 1,2 -二甲苯 1,2 - dimethylbenzene C8H10 106 0. 9
6 4. 49 1,3 -二甲苯 1,3 - dimethylbenzene C10H14 134 0. 87
7 5. 60 (-)-柠檬烯 l - Limonene C10H16 136 1. 82
8 6. 08 3 -乙基甲苯 3 - ethyltoluene C9H12 120 1. 25
9 6. 44 1,2,3 -三甲苯 1,2,3 - trimethylbenzene C9H12 120 1. 1
10 7. 14 1,3,5 -三甲苯 1,3,5 - trimethylbenzene C9H12 120 3. 5
11 8. 20 1,2,4 -三甲苯 1,2,4 - trimethylbenzene C9H12 120 0. 99
12 11. 72 樟脑 Camphor C10H16O 152 4. 78
13 12. 77 长叶烯(+)-Longifolene C15H24 204 3. 18
14 13. 32 反式石竹烯 Beta -Caryophyllene C15H24 204 2. 75
15 13. 40 4 -萜烯醇 4 -Terpinenol C10H18O 154 1. 22
16 13. 93 桃金娘烯醛 Myrtenal C10H14O 150 0. 87
17 14. 40 反式松香芹醇(-)-Trans -Pinocarveol C10H16O 152 1. 75
18 15. 26 合成左旋龙脑 L(-)-Borneol C10H18O 154 1. 45
19 15. 41
马苄烯酮 4,6,6 -Trimethyl - bicyclo
[3. 1. 1]Hept -3 -En -2 -One 4,6,
6 -Trimethyl - bicyclo[3. 1. 1]
Hept -3 -En -2 -One
C10H14O 150 2. 50
20 12. 99 桃金娘烯醇 Myrtenol C10H16O 152 1. 05
21 20. 26 石竹烯氧化物 Caryophyllene Oxide C15H24O 220 2. 99
22 25. 12 苯甲酸苄酯 benzyl benzoate C14H12O2 212 8. 81
23 27. 74 Bornyl Cinnamate 2 C19H24O2 284 28. 61
表 2 苏合香乙醚部位主要化学成分
序号 t /min 化合物 分子式
分子

相对含量
(%)
1 2. 63 丙酸乙酯 ethyl propionate C5H10O2 102 3. 49
2 3. 19 α -蒎烯 Alpha - Pinene C10H16 136 4. 42
3 3. 68 莰烯 Camphene C10H16 136 3. 23
4 4. 22 桧烯,香松烯 Sabinene C10H16 136 1. 86
5 11. 73 樟脑 Camphor C10H16O 152 1. 78
6 15. 41
马苄烯酮 4,6,6 - Trimethyl - bicyclo
[3. 1. 1]Hept - 3 - En -2 - One
C10H14O 150 1. 57
7 27. 00 氢化肉桂酸 Benzenepropanoic acid C9H10O2 150 24. 93
8 27. 74 肉桂酸肉桂酯 Cinnamyl Cinnamate C18H16O2 264 10. 05
9 28. 51 棕榈酸 Palmitic Acid C16H32O2 256 2. 05
10 27. 74 Bornyl Cinnamate 2 C19H24O2 284 38. 22
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时珍国医国药 2012 年第 23 卷第 7 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2012 VOL. 23 NO. 7
表 3 苏合香水蒸气蒸馏主要化学成分
序号 t /min 化合物 分子式
分子

相对含量
(%)
1 3. 06 三环烯 Tricylene C10H16 136 0. 70
2 3. 22 α -蒎烯 Alpha - Pinene C10H16 136 18. 00
3 3. 75 莰烯 Camphene C10H16 136 15. 83
4 4. 32 β -蒎烯 Beta - Pinene C10H16 136 14. 41
5 4. 45 桧烯,香松烯 Sabinene C10H16 136 0. 12
6 4. 49 马鞭草烯 Verbenene C10H14 134 0. 58
7 5. 30 松油烯 Alpha - Terpinene C10H16 136 0. 18
8 5. 69 柠檬烯 Limonene C10H16 136 6. 37
9 5. 78 桉叶油醇 Cineole C10H18O 154 0. 27
10 5. 91 1. 3 -二乙基苯 1,3 - Diethylbenzene C10H14 134 0. 17
11 6. 44 γ -萜品烯;松油烯 Gamma - Terpinene C10H16 136 0. 23
12 6. 94 4 -异丙基甲苯 4 - Isopropyltoluene C10H14 134 2. 84
13 7. 12 萜品油烯 Terpinolene C10H16 136 0. 17
14 9. 33烯丙基甲苯 1 - allyl - 2 - methyllbenzene C10H12 132 0. 22
15 11. 26 龙脑烯醛 Campholenic Aldehyde C10H16O 152 0. 56
16 11. 34 α -咕巴烯 (-)- Alpha - Copaene C15H24 204 0. 49
17 11. 46 长叶环烯 (+)- Longicyclene C15H24 204 0. 23
18 11. 81 樟脑 Camphor C10H16O 152 5. 87
19 11. 95 苯甲醛,安息香醛 Benzaldehyde C7H6O 106 0. 76
20 12. 85 长叶烯 (+)- Longifolene C15H24 204 2. 57
21 12. 99 左旋乙酸冰片酯 L - Bornyl Acetate C12H20O2 196 0. 76
22 13. 42 反式石竹烯 Beta - Caryophyllene C15H24 204 3. 36
23 13. 98
(-)-桃金娘烯醛
(香桃木醛) (-)- Myrtenal
C10H14O 150 1. 62
24 14. 38 苯乙酮 Acetophenone C8H8O 120 1. 51
25 14. 44
反式松香芹醇(-)
- Trans - Pinocarveol
C10H16O 152 1. 0
26 14. 64 异龙脑 Isoborneol C10H18O 154 0. 16
27 15. 23
3,7 二甲基 -1,6 -辛二烯
-3 -醇丙酸酯 Linalyl Propionate
C13H22O2 210 1. 21
28 15. 31 合成左旋龙脑 L(-)- Borneol C10H18O 154 1. 83
29 15. 47
马苄烯酮 4,6,6 - Trimethyl - bicyclo
[3. 1. 1[Hept - 3 - En -2 - One
C10H14O 150 2. 76
30 15. 66 B -瑟林烯 β - Selinene C15H24 204 0. 11
31 15. 94 香芹酮 Carvone C10H14O 150 0. 4
32 16. 34 δ -杜松烯(+)- Delta - Cadinene C15H24 204 0. 28
33 16. 70 3'甲基苯乙酮 3'- Methylacetophenone C9H10O 134 0. 17
34 16. 95 桃金娘烯醇 Myrtenol C10H16O 152 1. 1
35 17. 72 葛缕醇 Carveol l C10H16O 152 0. 54
36 17. 97
2 -(4 -甲基苯基)丙 -2 -
醇 2 -(4 - Methylphenyl)Propan - 2 - ol
C10H14O 150 0. 63
37 18. 24 香芹醇 Cis - Carveol C10H16O 152 0. 09
38 18. 35 氢化肉桂酸 3 - Phenylpropionic Acid C9H10O2 150 0. 19
39 20. 28 石竹烯氧化物 Caryophyllene Oxide C15H24O 220 1. 54
40 21. 20 肉桂醛 Cinnamaldehyde C9H8O 132 0. 14
41 22. 26 斯巴醇(+)Spathulenol C15H24O 220 0. 11
42 29. 12 Bornyl Cinnamate 2 C19H24O2 284 1. 27
表 4 苏合香顶空固相微萃取主要化学成分
序号 t /min 化合物 分子式
分子

相对含量
(%)
1 1. 37 α -蒎烯 Alpha - Pinene C10H16 136 15. 97
2 1. 44 莰烯 Camphene C10H16 136 13. 28
3 1. 50 β -蒎烯 Beta - Pinene C10H16 136 12. 82
4 1. 64 柠檬烯 Limonene C10H16 136 3. 99
5 1. 73 γ -萜品烯;松油烯 Gamma - Terpinene C10H16 136 0. 51
6 1. 79 4 -异丙基甲苯 4 - Isopropyltoluene C10H14 134 1. 17
7 2. 32烯丙基甲苯 1 - allyl - 2 - methyllbenzene C10H12 132 0. 83
8 2. 58 α -咕巴烯 (-)- Alpha - Copaene C15H24 204 0. 75
9 2. 75 苯甲醛,安息香醛 Benzaldehyde C7H6O 106 8. 03
10 2. 94 左旋乙酸冰片酯 L - bornyl acetate C12H20O2 196 0. 48
11 3. 00 长叶烯 (+)- Longifolene C15H24 204 2. 93
12 3. 08 反式石竹烯 Beta - Caryophyllene C15H24 204 1. 67
13 3. 31 苯乙酮 Acetophenone C8H8O 120 2. 62
14 3. 46 2 -茨醇 Borneol C10H18O 154 2. 50
15 3. 63
马苄烯酮 4,6,6 - Trimethyl - bicyclo
[3. 1. 1]Hept - 3 - En -2 - One
C10H14O 150 2. 52
16 3. 90 桃金娘烯醇 Myrtenol C10H16O 152 0. 59
17 4. 07 葛缕醇 Carveol l C10H16O 152 0. 47
18 4. 14
2 -(4 -甲基苯基)丙 -
2 -醇 p - cymen - 8 - ol
C10H14O 150 0. 23
续表 4
序号 t /min 化合物 分子式
分子

相对含量
(%)
19 5. 15 3 -苯丙醇 3 - phenyl - 1 - propanol C9H12O 136 0. 46
20 5. 24 肉桂醛 Cinnamaldehyde C9H8O 132 0. 51
21 6. 29 肉桂醇 cinnamyl alcohol C9H10O 134 0. 93
25 6. 71 石竹烯氧化物 Caryophyllene Oxide C15H24O 220 0. 64
26 7. 24 苯甲酸 Benzoic acid C7H6O2 122 8. 42
27 7. 97 氢化肉桂酸 3 - Phenylpropionic Acid C9H10O2 150 4. 88
28 10. 25 Bornyl Cinnamate 2 C19H24O2 284 3. 52
表 5 苏合香不同提取方法的 GC - MS共有化学成分
成分 溶剂提取 水蒸气蒸馏 顶空固相微萃取
α -蒎烯 Alpha - Pinene + + +
莰烯 Camphene + + +
β -蒎烯 Beta - Pinene + + +
丙酸乙酯 ethyl prpionate + - -
樟脑 Camphor + + -
反式松香芹醇(-)- Trans - Pinocarveol + + -
合成左旋龙脑 L(-)- Borneol + + -
桧烯,香松烯 Sabinene + + -
柠檬烯 Limonene - + +
γ -萜品烯;松油烯 Gamma - Terpinene - + +
4 -异丙基甲苯 4 - Isopropyltoluene - + +
烯丙基甲苯 1 - allyl - 2 - methyllbenzene - + +
α -咕巴烯 (-)- Alpha - Copaene - + +
苯甲醛,安息香醛 Benzaldehyde - + +
左旋乙酸冰片酯 L - bornyl acetate - + +
长叶烯 (+)- Longifolene + + +
反式石竹烯 Beta - Caryophyllene + + +
苯乙酮 Acetophenone - + +
马苄烯酮 4,6,6 - Trimethyl - bicyclo[3. 1. 1]
Hept - 3 - En -2 - One
+ + +
桃金娘烯醇 Myrtenol + + +
葛缕醇 Carveol l - + +
2 -(4 -甲基苯基)丙 -
2 -醇 p - cymen - 8 - ol
- + +
肉桂醛 Cinnamaldehyde - + +
石竹烯氧化物 Caryophyllene Oxide + + +
氢化肉桂酸 3 - Phenylpropionic Acid + + +
Bornyl Cinnamate 2 + + +
“ +”代表检测出含有此成分,“ -”代表未检测出此成分
从表 5 可见苏合香经溶剂提取,水蒸气蒸馏和顶空固相微萃
取 3 种方法的鉴定结果中都含有 α -蒎烯、β -蒎烯、莰烯、马苄
烯酮、氢化肉桂酸、桃金娘烯醇、长叶烯、反式石竹烯、石竹烯氧化
物和 Bornyl Cinnamate 2 等 10 种物质;溶剂提取与水蒸气蒸馏所
得的成分中有 14 种相同成分,水蒸气蒸馏与顶空固相微萃取所
得的成分中有 24 种相同成分。
4 讨论
3 种提取方法中,水蒸气提取法所得成分最多,其测得的化
学成分与姚发业等学者的研究结果相近,提示该法可作为获取苏
合香挥发性成分的主要方法。至于该种方法是否是提取挥发油
方法最优方法,尚待今后结合相关药效进行深入研究。
参考文献:
[1] 国家药典委员会.中国药典,一部[S].北京:中国医药科技出版社,
2010:153.
[2] 姚发业,邱 芹,崔兆杰,等.苏合香挥发油的化学成分[J].药物分
析杂志,2005,25(7) :859.
[3] 姚发业,邱 芹,刘国鹏,等.超临界二氧化碳萃取分析苏合香化学
成分[J].中草药,2005,36(8) :1149.
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2012 VOL . 23 NO. 7 时珍国医国药 2012 年第 23 卷第 7 期