全 文 ：Chinese Journal of New Drugs 2015，24(6)
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中国新药杂志 2015 年第 24 卷第 6 期
［基金项目］ 教育部高等学校博士点基金(20100211120002)
［作者简介］ 杨平荣，男，高级工程师，主要从事检验管理研究。联系电话: (0931)7633003，E-mail:ypr681201@ 126． com。共同第一作者:文
娟，女，硕士，主要从事生物技术制药研究。联系电话:(0931)8912560，E-mail:wenj2008@ lzu． edu． cn。
［通讯作者］ 张春江，女，副教授，主要从事生物技术制药研究。联系电话:(0931)8912560，E-mail:chjzh@ lzu． edu． cn。
·实验研究·
异叶青兰提取物抗病毒作用及挥发油成分分析
杨平荣1，文 娟2，金 赟2，丁佳栋2，方 媛2，陈新君2，张春江2
(1 甘肃省药品检验研究院，兰州 730070;2 兰州大学生命科学学院，兰州 730000)
［摘要］ 目的:探讨藏药异叶青兰挥发油、石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物、水提取物抗
腺病毒(ADV)、流感甲型病毒 A /汉防 /359 /95(H3N2)及单纯疱疹病毒 II 型(HSV-2)的作用。方法:细胞
病变法测定提取物的半数有毒浓度及对病毒的半数效应浓度，以治疗系数(TI)为指标评价药效。采用气相
色谱-质谱联用分析挥发油成分。结果:石油醚提取物抗 A /汉防 /359 /95 (TI = 12． 99)、抗单纯疱疹病毒 II
(TI = 6． 48)活性最强。挥发油抗腺病毒 (TI = 7． 77)活性最强。挥发油对单纯疱疹病毒 II型有较强的直接
灭活作用(TI = 3． 1)。挥发油主要成分为桉油精(22． 18%)，桃金娘烯醇(11． 28%)，顺式松油醇(11． 11%)
等。结论:异叶青兰挥发油、石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物、水提取物具有一定的抗腺病毒、
流感甲型病毒 A /汉防 /359 /95(H3N2)及单纯疱疹病毒 II 型的作用。
［关键词］ 藏药异叶青兰;腺病毒;流感甲型病毒 A /汉防 /359 /95(H3N2);单纯疱疹病毒 II 型;抗病毒
活性;气相色谱-质谱联用
［中图分类号］ Ｒ965． 1 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 1003 － 3734(2015)06 － 0669 － 07
Antiviral effect of extracts from Tibetan herbal medicine Dracocephalum
heterophyllum Benth and chemical constituents in the essential oil
YANG Ping-rong1，WEN Juan2，JIN Yun2，DING Jia-dong2，
FANG Yuan2，CHEN Xin-jun2，ZHANG Chun-jiang2
(1 Gansu Institute for Drug Control，Lanzhou 730070，China;
2 School of Life Sciences，Lanzhou University，Lanzhou 730000，China)
［Abstract］ Objective:To analyze components in the essential oil and various extracts from Tibetan herbal
medicine Dracocephalum heterophyllum Benth，and evaluate their antiviral effects． Methods:The essential oil，n-
butanol extract，ethyl acetate extract，aqueous extract and petroleum ether extract were obtained from Dracoceph-
alum heterophyllum Benth． Their effects on adenovirus A /hanfang /359 /95(H3N2)and herpes simplex virus type 2
were evaluated． The cytotoxicity and the antiviral effectiveness were investigated using cytopathic effect (CPE)．
The therapeutic index (TI)was used to assess antiviral activity． At the same time，the components of volatile oil
were analyzed by gas chromatography-mass spectrometry． Ｒesults:The petroleum ether extract had the strongest
activities against A /hanfang /359 /95(H3N2) (TI = 12． 99)and herpes simplex virus type 2 (TI = 6． 48)． The es-
sential oil had the strongest activity against adenovirus (TI = 7． 77) ，and a direct killing activity against herpes sim-
plex virus type 2 (TI = 3． 1)suggesting it might be a strong direct inactivator． The essential oil contained eucalyp-
tol (22． 18%) ，6，6-dimethyl-bicyclo［3． 1． 1］hept-2-ene-2-methanol (11． 28%) ，cis-terpineol (11． 11%) ，and
so on． Conclusion:The essential oil，n-butanol extract，ethyl acetate extract，aqueous extract and petroleum ether
extract from Tibetan herbal medicine Dracocephalum heterophyllum Benth have antiviral effects against adenovirus，
A /hanfang /359 /95(H3N2)and herpes simplex virus type 2 in vitro．
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［Key words］ Tibetan herbal medicine;Dracocephalum heterophyllum Benth;adenovirus A /hanfang /359 /
95 (H3N2) ;herpes simplex virus type 2;antiviral activity;gas chromatography-mass spectrometry
利用宿主细胞的酶系统进行代谢活动的病毒，
可引起约 75% 的传染病［1］。流感病毒、腺病毒等
可引起人呼吸道感染。其中，流感病毒造成的感染
在全世界范围内爆发流行，给人类的生命和健康造
成了严重危害［2］。腺病毒(adenovirus)也是引起呼
吸道感染和爆发性眼结膜炎的主要因素，同时可引
起人体扁桃体、腺样体和其他淋巴组织的隐性持续
性感染［3］。临床多全身用药，但具有疗程长、不良
反应多等弊端。目前临床上还没有控制病毒的特效
药物，预防和治疗上呼吸道感染成为当前抗病毒研
究的重要任务。单纯疱疹病毒 II 型(herpes simplex
virus type 2，HSV-2)属于 α 疱疹病毒科，可引发生
殖器疱疹(genital herpes，GH)。人体初次感染 HSV
后病毒潜伏于感染者的周围神经节，导致机体终生
携带该病毒［4］。HSV-2 的感染与 HIV-1 血清感染
有着密切的联系。同时，HSV-2 作为一种性传播因
子，也与宫颈癌的发生有关［5］。目前，抗病毒药物
还不能完全抑制或清除潜伏的 HSV。随着耐药株
的报道越来越多，从天然药物中开发新的抗病毒药
物成为临床关注热点。中草药来源广泛，不良反应
少，抗病毒作用日益受到重视。
异叶青兰(Dracocephalum heterophyllum Benth)
为唇形科青兰属多年生草本植物，又名白花枝子花，
药用名有白甜蜜蜜、白花夏枯草、吉孜青保等。异叶
青兰分布于青海、甘肃、新疆、西藏及四川等地，生于
山地草原及半荒漠的多石干燥地区，药源丰富［6］。
其化学成分主要包括挥发油类、黄酮等［7］。异叶青
兰属于清热解毒类中草药，主要用于治疗止咳平
喘［8］、口腔溃疡、热性病头痛、眼翳、黄疸性发热、肝
热、高血压等［9］。
本研究采用采自甘肃甘南的异叶青兰全草，选
择腺病毒、流感甲型病毒 A /汉防 /359 /95(H3N2)
及 HSV-2 病毒作为研究对象，对异叶青兰挥发油、
异叶青兰水提物、异叶青兰正丁醇提取物、异叶青兰
石油醚提取物及异叶青兰乙酸乙酯等分级提取物，
体外抗腺病毒、流感甲型病毒 A /汉防 /359 /95
(H3N2)及 HSV-2 病毒药效学作用进行评价，筛选
出抗腺病毒、流感甲型病毒 A /汉防 /359 /95(H3N2)
及 HSV-2 病毒活性强的提取物，为进一步开发、利
用异叶青兰提取物制备药物奠定基础。
材 料
1 药材
异叶青兰全草采自甘肃甘南，经兰州大学生命
科学学院冯虎元教授鉴定，并保存样本于本实验室。
2 病毒及细胞
腺病毒 (adenovirus，ADV) ，流感甲型病毒 A /
汉防 /359 /95(H3N2) ，狗肾细胞(MDCK) ，人喉癌细
胞(Hep-2) ，单纯疱疹病毒 II 型均由甘肃省疾病控
制中心提供。非洲绿猴肾上皮细胞(Vero)由兰州
生物制品研究所有限责任公司提供。
3 试剂
Dulbeccos Modified Eagle Medium (DMEM，1 L，
GIBCO 试剂公司) ;10 × PBS 缓冲液 (pH 7． 2 ～ 7． 4，
SOLAＲBIO公司) ;胎牛血清(HyClone 公司) ;4-羟乙
基哌嗪乙磺酸(HEPES，Amresco 公司) ;0． 25% 胰蛋
白酶溶液(含 EDTA，1 ×，HyClone公司) ;Albumin Bo-
vine V(蛋白组分5，BIOSHAＲP公司＆ SOLAＲBIO公
司) ;Dimethyl Sulfoxide (DMSO，Amresco 公司)。双
抗［青霉素100 mg·L －1、链霉素100 mg·L －1，生工生物
工程(上海)股份有限公司］。
4 阳性对照药物
阿昔洛韦粉针剂［ACV，商品名为注射用阿昔洛
韦，武汉普生制药有限公司，规格 0． 25 g (以 C8H11
N5O3 计) ，批号:120208-9］。病毒唑 (ＲBV，新乡制
药股份有限公司，批号:20081227)。达菲(上海药
物所，批号:20090712)。
方 法
1 异叶青兰挥发油及 4 种提取物提取
1． 1 异叶青兰挥发油 取适量异叶青兰全草(碎
成约 1 cm长)通水蒸汽蒸馏 1． 5 h，收集馏出液;用
无水乙醚少量多次萃取馏出液，收集有机相;加无水
Na2SO4干燥有机相;将有机相在沸石存在的情况下
常压蒸馏，回收馏出液乙醚，收集烧瓶中黄色油状
物，得到异叶青兰挥发油;挥发油在 － 20 ℃ 保藏，用
前紫外照射 30 min灭菌［10］。
1． 2 异叶青兰 4 种提取物 将异叶青兰在 95% 乙
醇中浸泡 7 d，期间经常搅动浸出有效成分。析出上
清液，用旋转蒸发仪回流蒸发回收 95% 乙醇，得到
总浸膏。总浸膏 500 mL 纯化水溶解，用石油醚萃
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取，石油醚相回流蒸发，收集剩余液体即石油醚提取
物;剩余水相用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯相回流蒸
发，收集剩余液体即乙酸乙酯提取物;剩余水用正丁
醇萃取，正丁醇相回流蒸发，收集剩余液体即正丁醇
提取物［11］;剩余的水相回流蒸发，收集剩余液体即
为水相。收集 4 种提取物室温静置干燥，4 ℃ 保藏，
用前紫外照射 30 min灭菌。
2 异叶青兰挥发油气质联用分析
异叶青兰挥发油成分用气相色谱-质谱分析
(Trace DSQ GC-MS联用仪，美国热电公司)。参考文
献［12］已报道的方法并稍作改进，气相色谱条件为:
色谱柱:DB-5 ms(30 m × 0． 25 mm，0． 25 μm) ;载气:
He;流速:1． 0 mL·min －1;柱温:程序升温 40 ～ 250 ℃
(10 ℃·min －1) ，恒温 20 min;进样量:1 μL。质谱条
件:分流模式进样，分流比30∶ 1;进样口温度:250 ℃;
辅助线温度:280 ℃;离子源温度:250 ℃;电离方式:
EI;电子能量:70 eV;电子倍增管电压:1 256 kV;采
集方式:扫描;扫描质量范围:m/z 40→600。
3 异叶青兰挥发油及 4 种提取物体外抗病毒试验
3． 1 病毒感染性 TCID50测定 取对数生长期状态
良好的 Hep-2、MDCK 细胞、Vero 细胞消化计数后接
种入 96 孔板中，于 37 ℃，5% CO2 培养箱中培养
24 h 细胞长成单层。每孔加 0． 1 mL用维持液 10 倍
稀释的 ADV、A /汉防 /359 /95、HSV-2 (10 －1 ～
10 －8) ，每个稀释度 6 孔。同时设置无病毒细胞组。
继续培养，每日观察细胞病变 (cytopathic effect，
CPE)情况，持续 3 ～ 4 d［13 － 14］。细胞病变 (CPE)程
度判定标准:① 表示 25% 的细胞出现病变。② 表
示 25% ～ 50% 的细胞出现病变。③ 表示 50% ～
75% 细胞出现病变。④ 表示 75% ～ 100% 细胞出
现病变。根据 Ｒeed-Muench 法计算病毒的半数毒性
浓度 (TCID50)。
3． 2 细胞毒性测定 待 Hep-2、MDCK 细胞、Vero
细胞在 96 孔板中长成单层，分别加入 5 个不同浓度
的异叶青兰挥发油、4 种异叶青兰提取物及阳性药
物 ACV、ＲBV、达菲，每种浓度 3 孔、每孔 0． 1 mL。
37 ℃，5% CO2 培养箱中培养 3 d，动态观察结果，记
录 CPE［14 － 16］。同时设置无药细胞组。Logit 回归方
法计算药物的半数中毒浓度 (TC50)。
3． 3 体外抗病毒活性检测 将 Hep-2、MDCK 细
胞、Vero 细胞接种 96 孔板使细胞长成单层。用维
持液 将 ADV、A /汉 防 /359 /95、HSV-2 稀 释 成
100TCID50 /0． 1 mL备用。分别设不同浓的实验药物
组、阳性药物对照组、正常细胞对照组及病毒对照
组，均设 3 个复孔。根据病毒的复制周期，测定异叶
青兰挥发油抗 HSV-2 病毒活性时采取不同的给药
方式，实验分 4 个处理组进行:① 增殖抑制法:于单
层细胞孔中加入 100 TCID50 /0． 1 mL 的病毒，37 ℃
吸附 2 h 后，弃上清，每孔加入 0． 2 mL 不同浓度的
含药维持液，37 ℃，5% CO2 培养。② 感染阻断法:
以不同浓度的含药培养液预先与细胞孵育 2 h，弃药
液，再以 100 TCID50 /0． 1 mL的病毒感染细胞，37 ℃
吸附 2 h后，加 0． 2 mL 细胞维持液，37 ℃吸附 2 h
后，加 0． 2 mL 细胞维持液，37 ℃，5% CO2 温箱培
养。③ 等量混合法:100 TCID50 /0． 1 mL 的病毒，
0． 1 mL 药液等量混合加入细胞，置 37 ℃，5% CO2
温箱培养。④ 直接杀灭法:将不同浓度的药液与
100 TCID50 /0． 1 mL的病毒等量混合均匀，置 37 ℃，
5% CO2 培养箱作用 2 h后，再取 0． 2 mL将其感染细
胞，吸附 2 h 后弃上清，每孔加入 0． 2 mL 维持液，
37 ℃，5% CO2 培养
［17 － 18］。异叶青兰挥发油抗
ADV、A /汉防 /359 /95 活性，异叶青兰 4 种提取物抗
ADV、A /汉防 /359 /95、HSV-2 活性，仅采取等量混
合法测定。连续 3 d观察细胞病变程度，按 Logit 回
归方法计算药物的半数效应浓度 (EC50)。药物治
疗指数(TI)按 TI = TC50 /EC50进行计算。
4 统计方法
用 Ｒeed-Muench 法测定病毒 TCID50，药物半数
毒性浓度 TC50和半数效应浓度 EC50用 Logit 回归方
法计算。应用 SPSS 19． 0 软件处理数据。
结 果
1 异叶青兰挥发油气质联用分析结果
用气-质联用对挥发油进行分析，获得的总粒子
流图如图 1 所示。各种成分的保留时间(按先后顺
序)、名称、分子式、相对百分含量及符合度见表 1。
异叶青兰挥发油得率 0． 083% (质量比)。
图 1 异叶青兰挥发油的总离子流图
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表 1 异叶青兰挥发油化学成分
峰号 化合物名称 保留时间 /min 分子式 相对百分含量 /%
1 1，1-二乙氧基乙烷 1，1-diethoxy-ethane 3． 42 C6H14O2 0． 40
2 二丙酮醇 4-hydroxy-4-methyl-2-pentanone 5． 81 C6H12O2 0． 48
3 3-硝基丙酸 3-nitropropanoic acid 6． 04 C3H5NO4 0． 59
4 2-乙氧基戊烷 2-ethoxypentane 6． 25 C7H16O 0． 54
5 2，3-脱氢-1，8-桉树脑 2，3-dehydro-1，8-cineole 8． 51 C10H16O 0． 83
6 1，1，3，3，5，5，7，7，9，9，11，11，13，13，15，15-十六甲基八硅氧烷 1，1，3，
3，5，5，7，7，9，9，11，11，13，13，15，15-hexadecamethyloctasiloxane
8． 82 C16H50O7 Si8 1． 11
7 桉油精 cineol 9． 27 C10H18O 22． 18
8 顺式松油醇 cis-terpineol 9． 94 C10H18O 6． 92
9 2-环丙基-6-甲基庚-5-烯-2-醇 2-cyclopropyl-6-methylhept-5-en-2-ol 10． 21 C10H18O2 0． 70
10 顺式松油醇 cis-terpineol， 10． 46 C10H18O 4． 19
11 1-甲基-4-(2-甲基环氧乙烷基)-7-氧杂双环［4． 1． 0］庚烷 1-methyl-4-(2-
methyloxiranyl)-7-oxabicyclo［4． 1． 0］heptane
10． 61 C10H16O2 0． 52
12 龙脑烯醛 campholenic aldehyde， 10． 87 C10H16O 2． 23
13 6，6-二甲基-2-亚甲基二环［3． 1． 1］-3-庚醇 6，6-dimethyl-2-methylene-bicy-
clo［3． 1． 1］heptan-3-ol
11． 12 C10H16O 4． 13
14 (S)-顺式-马鞭草烯醇 (S)-cis-verbenol 11． 19 C10H16O 4． 91
15 2(10)-蒎烯-3-酮 2(10)-pinen-3-one 11． 45 C10H14O 3． 20
16 α-松油醇 α-terpineol 11． 58 C10H18O 1． 16
17 (1α，2β，5α)-2，6，6-三甲基二环［3． 1． 1］庚烷-3-酮 (1α，2β，5α)-2，6，6-
trimethylbicyclo［3． 1． 1］heptan-3-one
11． 68 C10H16O 4． 03
18 4-(1-甲基乙基)-2-环乙烯-1-酮 4-(1-methylethyl)-2-cyclohexen-1-one 11． 86 C9H14O 4． 74
19 桃金娘烯醇 (-)-myrtenol 11． 97 C10H16O 11． 28
20 马鞭草烯醇 (-)-verbenone 12． 18 C10H14O 1． 32
21 L-香芹醇 (-)-carveol 12． 34 C10H16O 0． 78
22 (1Ｒ，4Ｒ，6Ｒ)-1，3，3-三甲基-2-氧杂二环［2． 2． 2］辛烷-6-醇 (1Ｒ，4Ｒ，
6Ｒ)-1，3，3-trimethyl-2-oxabicyclo［2． 2． 2］octan-6-ol
12． 44 C10H18O2 1． 26
23 4-异丙基苯甲醛 4-(1-methylethyl)-benzaldehyde 12． 71 C10H12O 5． 79
24 水芹醛 phellandral 13． 23 C10H16O 0． 57
25 (-)-桃金娘烯基乙酸酯 (-)-myrtenyl acetate 13． 39 C12H18O2 2． 26
26 4-(2，2-二甲基-6-亚甲基环己基)丁醛 4-(2，2-dimethyl-6-methylenecyclo-
hexyl)butanal
14． 05 C13H22O 0． 83
27 乙酸香叶酯 geranyl acetate 14． 49 C12H20O2 0． 95
28 波旁烯 bourbonene 14． 66 C15H24 0． 99
29 反式-Z-环氧化红没药烯 trans-Z-bisabolene epoxide 15． 53 C15H24O 0． 32
30 1，6，6-三甲基-7-(3-氧代丁-1-烯基)-3，8-二氧杂三环［5． 1． 0． 0(2，4) ］辛
烷-5-酮 1，6，6-trimethyl-7-(3-oxobut-1-enyl)-3，8-dioxatricyclo［5． 1． 0． 0
(2，4) ］octan-5-one
15． 91 C13H16O4 0． 54
31 1，2，3，4，4a，5，6，8-八氢-7-甲基-4-亚甲基-1-(1-甲乙基)-萘 1，2，3，4，4a，
5，6，8a-octahydro-7-methyl-4-methylene-1-(1-methylethyl)-naphthalene
16． 31 C15H24 0． 42
32 二氢猕猴桃内酯 5，6，7，7a-tetrahydro-4，4，7a-trimethyl-2(4H)-benzofura-
none
16． 65 C11H16O2 0． 38
33 环氧石竹烯 (-)-β-caryophyllene epoxide 16． 80 C15H24O 0． 65
34 环氧石竹烯 (-)-β-caryophyllene epoxide 17． 22 C15H24O 2． 61
35 ［1Ｒ-(1Ｒ* ，3E，7E，11Ｒ* ) ］-1，5，5，8-四甲基-12-氧杂二环［9． 1． 0］十二
碳-3，7-二烯［1Ｒ-(1Ｒ* ，3E，7E，11Ｒ* ) ］-1，5，5，8-tetramethyl-12-ox-
abicyclo［9． 1． 0］dodeca-3，7-diene
17． 55 C15H24O 1． 00
36 1，2，3，4，4α，7，8，8α-八氢-1，6-二甲基-4-(1-甲基乙基)-1-萘醇 1，2，3，4，
4α，7，8，8α-octahydro-1，6-dimethyl-4-(1-methylethyl)-1-naphthalenol
17． 88 C15H26O 0． 90
37 四氢-5-三甲基-5-(4-甲基-3-环己烯-1-基)-2-呋喃甲醇，tetrahydro-5-trim-
ethyl-5-(4-methyl-3-cyclohexen-1-yl)-2-furanmethanol
18． 03 C15H26O2 1． 69
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中国新药杂志 2015 年第 24 卷第 6 期
续表 1
峰号 化合物名称 保留时间 /min 分子式 相对百分含量 /%
38 甜没药醇 bisabolol 18． 35 C15H26O 1． 52
39 环氧石竹烯 (-)-β-caryophyllene epoxide 18． 52 C15H24O 0． 37
40 植酮 fitone 19． 96 C18H36O 0． 73
从异叶青兰挥发油中初步鉴定了 40 个化合
物。其中有 19 个组分含量大于 1%，占挥发油总
量的 87. 53%。桉油精(22． 18%)、桃金娘烯醇
(11. 28%)、顺式松油醇 (11． 11%)等 3 种组分占
挥发油总量的 44． 57%。
2 病毒毒力 TCID50
细胞接种病毒后，3 d 左右出现圆缩、死亡和脱
落等细胞病 (CPE)。如表 2 所示，ADV的 TCID50为
10 －3． 64，即每孔接种 0． 1 mL 滴度为 10 －3． 64的病毒，
可使 50% Hep-2 细胞发生明显病变。A /汉防 /359 /
95 的 TCID50为 10
－2，即每孔接种 0． 1 mL 滴度为
10 －2的病毒，可使 50% MDCK 细胞发生明显病变。
HSV-2 的 TCID50为 10
－1． 7。
表 2 病毒毒力 TCID50
病毒 ADV A /汉防 /359 /95(H3N2) HSV-2
TCID50 10 －3． 64 10 － 2 10 －1． 7
3 异叶青兰挥发油及 4 种提取物对 Hep-2 细胞的
毒性及抗 ADV作用
在进行样品的抗病毒实验时选用药物的浓度均
低于半数毒性浓度，以排除样品本身细胞病变效应
的干扰，保证结果的正确性和可靠性。由表 3 数据
可知，异叶青兰挥发油、石油醚提取物、乙酸乙酯提
取物、正丁醇提取物、水提取物都具有一定抗 ADV
活性。异叶青兰水提物对 Hep-2 的细胞毒性最低，
半数中毒浓度 (TC50)为 1 300． 16 g·L
－1。乙酸乙
酯及正丁醇提取物对 Hep-2 的细胞毒性最高位，
TC50为 158． 68 g·L
－1。异叶青兰挥发油抗 ADV 活
性最高，其药物治疗指数 (TI 值)为 7． 77。乙酸乙
酯提取物抗 ADV 活性最低，其 TI 值为 2． 16。
表 3 异叶青兰提取物抗 ADV 活性
提取物
TC50
/g·L －1
ADV
EC50 /g·L －1 TI
挥发油 348． 37 44． 81 7． 77
正丁醇提取物 158． 68 50． 63 3． 13
乙酸乙酯提取物 158． 68 73． 44 2． 16
水提取物 1 300． 16 256． 84 5． 06
石油醚提取物 348． 37 58． 77 5． 93
阿昔洛韦 697． 851 3． 338 209． 06
4 异叶青兰挥发油及 4 种提取物对 MDCK 的毒
性作用及抗 A/汉防 /359 /95
由表 4 数据可知，异叶青兰水提物抗 A /汉防 /
359 /95 数据未具体检测到，异叶青兰挥发油、正丁
醇提取物、乙酸乙酯提取物及石油醚提取物都具有
一定抗 A /汉防 /359 /95 活性。异叶青兰水提物对
MDCK 的细胞毒性最低，TC50 ＞ 1 000 mg·L
－1。乙酸
乙酯提取物对 MDCK 的细胞毒性最高位，TC50为
37． 04 mg·L －1。异叶青兰石油醚提取物抗 A /汉防 /
359 /95 活性最高，其 TI 值为 12． 99。乙酸乙酯提取
物抗 A /汉防 /359 /95 活性最低，其 TI 值为 3． 00。
表 4 异叶青兰提取物抗 A /汉防 /359 /95 活性
提取物
TC50
/mg·L －1
A /汉防 /359 /95(H3N2)
EC50 /mg·L －1 TI
挥发油 222． 22 57． 64 3． 86
正丁醇提取物 160． 25 28． 75 5． 57
乙酸乙酯提取物 37． 04 12． 35 3． 00
水提取物 ＞ 1 000 ＞ 1 000 —
石油醚提取物 80． 12 6． 17 12． 99
达菲 1 260 3． 70 340． 54
病毒唑 1 164． 1 6． 41 181． 61
5 异叶青兰 4 种提取物对 Vero 的毒性作用及抗
HSV-2 作用
异叶青兰挥发油，石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水
等提取物都具有一定抗 HSV-2 活性，TI 值为 0． 94 ～
6． 48 之间。异叶青兰石油醚提取物对 Vero 的细胞
毒性最低，TC50为 348． 71 g·L
－1。乙酸乙酯提取物
对 Vero 的细胞毒性最高位，TC50为 87． 34 g·L
－1。异
叶青兰石油醚提取物抗 HSV-2 活性最高，其 TI 值
为 6． 48。乙酸乙酯提取物抗 HSV-2 活性最低，其 TI
值为 0． 94。见表 5。
表 5 异叶青兰提取物抗 HSV-2 活性
提取物 TC50 /g·L －1 EC50 /g·L －1 TI
正丁醇提取物 112． 22 46． 72 2． 40
乙酸乙酯提取物 87． 34 92． 6 0． 94
水提取物 179． 74 65． 23 2． 76
石油醚提取物 348． 71 53． 81 6． 48
阿昔洛韦 697． 85 3． 34 209． 06
Chinese Journal of New Drugs 2015，24(6)
674
中国新药杂志 2015 年第 24 卷第 6 期
6 异叶青兰挥发油对 Vero 细胞的毒性作用及抗
HSV-2 的作用
结果表明，异叶青兰挥发油对 Vero 细胞的半数
有毒浓度 (TC50)为 138． 92 g·L
－ 1。实验通过增殖
抑制法、感染阻断法、等量混合法及直接杀灭法，分
别探讨药物对病毒细胞内增值抑制、对病毒吸附感
染的阻断及对病毒的直接灭活等作用。结果表明，
异叶青兰挥发油对 HSV-2 的治疗指数 2． 39 ～ 3． 1
之间，直接杀灭法测得 TI 值为 3． 1，提示其对 HSV-2
有较强的直接灭活作用。见表 6。
表 6 异叶青兰挥发油抗 HSV-2 活性
提取物
TC50
/g·L －1
增殖抑制法 感染阻断法 等量混合法 直接杀灭法
EC50 /g·L －1 TI EC50 /g·L －1 TI EC50 /g·L －1 TI EC50 /g·L －1 TI
挥发油 138． 92 50． 35 2． 76 52． 37 2． 65 58． 15 2． 39 44． 81 3． 1
阿昔洛韦 302． 06 0． 33 912． 33 0． 33 912． 33 0． 33 912． 33 0． 33 912． 33
讨 论
现代药理学研究表明，清热解毒类中草药具有
较强的直接灭活或抑制病毒作用，益补散结类中草
药则能通过促进机体免疫功能达到抗病毒作用［1］。
从中草药中筛选有效抗病毒药物成为一大热点。研
究表明异叶青兰、甘青乌头等藏药对通常抗生素难
抑制的耐药菌抑制效果较好，尤其是对耐药表皮葡
萄球菌和真菌白色念珠菌抑制效果很强［19］。任爱
梅［20］通过杯碟法发现，异叶青兰全草中所含有的
10α-羟基刺参-4-酮具有抑制金黄色葡萄球菌的作
用。本研究结合民间用药的事实，选取藏药异叶青
兰，通过实验室方法提取其挥发油、石油醚提取物、
乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物、水提取物。用细胞
病变法测定其抗 ADV、抗 A /汉防 /359 /95 及抗
HSV-2 3 种病毒的作用。
在抗病毒活性测定中，起初用 MTT 法测定提取
物抗病毒活性，由于提取物本身的色素含量，干扰了
MTT 显色，MTT 法没有成功，故改为传统细胞病
变法。
结果表明，异叶青兰挥发油，石油醚、乙酸乙酯、
正丁醇、水等提取物都具有一定抗 ADV、抗 A /汉
防 /359 /95 及抗 HSV-2 活性。异叶青兰石油醚提取
物抗 A /汉防 /359 /95 活性最高，其 TI 值为 12． 99。
异叶青兰石油醚提取物抗 HSV-2 活性最高，TI 值为
6． 48。异叶青兰挥发油抗 ADV 活性最高，TI 值为
7． 77。异叶青兰挥发油对 HSV-2 的治疗指数
2． 39 ～ 3． 1 之间，直接杀灭法测得 TI 值为 3． 1，提示
其对 HSV-2 有较强的直接灭活作用。在提取物分
级分离中，石油醚极性低，而水蒸汽蒸馏法获得的挥
发油大多为低极性成分，二者抗病毒活性较好，符合
了化学成分来源的相似性。
气-质联用检测鉴定了异叶青兰挥发油中的 40
种化合物。3 种含量较高的化合物为桉油精
(22. 18%)、桃金娘烯醇(11． 28%)、顺式松油醇
(11. 11%)。桉油精具有抗菌、杀虫、疏风解热、祛
湿解毒作用，同时对多种药物具有良好的透皮渗透
作用［21］。桉叶油对革兰阳性菌有抑菌作用，而桉叶
油复合液对革兰阳性、阴性菌均有较强抑菌作
用［22］。孟大威等［22］研究发现，草果精油对芽孢杆
菌、白葡萄球菌、大肠杆菌、米曲霉、根霉及青霉有明
显的抗菌活性，而草果精油的主要成分桉油精(含
量 48． 03%)对上述 6 种菌几乎没有抗菌活性。因
此，本实验中有抗病毒活性的是桉油精，还是异叶青
兰挥发油其他成分综合作用的结果，需要进一步
研究。
志谢:感谢兰州大学化学化工学院李亚副教授在挥发油
提取与分析中给予的热情帮助;感谢甘肃省疾病控制中心按
法定程序提供测试用病毒株及细胞株。
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编辑:赵文锐 /接受日期:
檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴
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编辑:韩培 /接受日期:2014 － 12 － 30