全 文 ：HPLC法同时测定灰毡毛忍冬不同
部位 5个活性成分的含量
滕昱伯，陈 雨，赵友谊* ，王奇志，王 鸣，冯 煦
(江苏省中国科学院植物研究所 /江苏省药用植物研究开发中心，江苏 南京 210014)
摘要 目的:建立以高效液相色谱同时测定灰毡毛忍冬不同部位(花、花蕾、花柄、叶、茎和根)中 5 种活性成分含
量的方法。方法:采用 Phenomenex Gemini C18(250 mm ×4. 6 mm，5 μm)色谱柱;流动相为 0. 4%醋酸水溶液-乙腈，梯
度洗脱，流速 0. 8 mL/min，柱温30 ℃;UV检测波长 λ =330 nm，ELSD检测器条件:载气(氮气)流速 3. 0 L /min，漂移管
温度110 ℃。结果:不同部位各活性成分含量有明显差异，且绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙的含量显著高
于芦丁及 secoxyloganin。结论:该方法能够简便、准确地测定灰毡毛忍冬不同部位中 5个活性成分的含量。
关键词 灰毡毛忍冬;HPLC-UV-ELSD;不同部位;含量测定
中图分类号:R284. 1 /R284. 2 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2012)04-0586-03
收稿日期:2011-10-18
基金项目:“重大新药创制”科技重大专项(2009ZX09103-397) ;江苏省自然科学基金(BK2011424)
作者简介:滕昱伯(1986-) ，男，在读硕士研究生，主要从事天然产物化学研究;E-mail:ybteng86@ hotmail. com。
* 通讯作者:赵友谊，Tel:025-84347084，E-mail:youyizhao@ yahoo. com. cn。
灰毡毛忍冬 Lonicera macranthoides Hand. -Mazz.
为忍冬科忍冬属植物，广泛分布于我国四川、重庆、贵
州、湖南、广西等地，是我国的特有种〔1〕。2010 年版
中国药典将其与红腺忍冬 L. hypoglauca Miq.、华南
忍冬 L. confuse DC.、黄褐毛忍冬 L. fulvotomentosa
Hsu et S. C. Cheng的干燥花蕾或带初开的花一同列
入山银花项下〔2〕。山银花具有清热解毒、疏散风热的
功效，临床用于治疗痈肿疔疮、喉痹、丹毒、热毒血痢、
风热感冒、温热发病等症状。灰毡毛忍冬作为中药山
银花的主要来源，在中药材市场广泛流通，且与传统
中药金银花相比，其药材资源更为丰富;但其化学成
分的研究都大多集中在花及花蕾部位，对根、茎、叶等
部位的研究报导甚少。因此，本实验首次建立了同时
测定灰毡毛忍冬不同部位中酚酸类、黄酮类、环烯醚
萜类、皂苷类的 5 个代表性成分含量的方法，以期为
灰毡毛忍冬及其制剂的有效开发提供科学依据。
1 仪器和材料
1. 1 仪器 Agilent 1100 series 高效液相色谱仪(美
国安捷伦科技公司) ，配置 UV-ELSD 检测器，色谱数
据处理由 Agilent化学工作站完成。Ro-di纯水机(锐
思捷科学仪器有限公司) ;KH2200DB 型数控超声波
清洗器，功率 250 W，频率 25 kHz(昆山禾创超声仪器
有限公司) ;LiBORAR AEL-200 电子分析天平(岛津
公司)。
1. 2 材料 绿原酸(1)、灰毡毛忍冬皂苷乙(2)、川
续断皂苷乙(3)、secoxyloganin(4)、芦丁(5)均为本实
验室分离纯化得到，质量分数达到 98%以上，分离纯
化及结构鉴定均已另发表文章〔3-6〕。灰毡毛忍冬于
2010年 7月采自湖南隆回县，经江苏省中国科学院植
物研究所袁昌齐研究员鉴定为忍冬科忍冬属植物灰
毡毛忍冬 L. macranthoides Hand. -Mazz.，凭证标本现
存放于江苏省中国科学院植物研究所药用植物研究
开发中心。乙腈(色谱纯)由美国 Tedia 公司提供;甲
醇(色谱纯)由南京化学试剂有限公司提供;冰乙酸
(分析纯)由上海实意化学试剂有限公司提供。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 采用 Phenomenex Gemini C18(250
mm × 4. 6 mm，5 μm)色谱柱，流动相为 0. 4%醋酸
(A)-乙腈(B) ，梯度洗脱〔7，8〕(0 ～ 15 min，90% ～ 85%
A;15 ～21 min，85% ～77% A;21 ～35 min，77% ～72%
A;35 ～40 min，72% ～68. 5% A;40 ～48 min，68. 5% ～
50% A;48 ～53 min，50% ～33% A;53 ～60 min，33%
～20% A)，流速 0. 8 mL /min。UV检测:绿原酸及芦
丁，λ =330 nm;ELSD检测:灰毡毛忍冬皂苷乙、川续
断皂苷乙、secoxyloganin，雾化室温度110 ℃，漂移管
温度110 ℃，N2 流速 3. 0 L /min;进样量:10 μL。
2. 2 对照品溶液的制备 精密称取对照品绿原酸
2. 5 mg、灰毡毛忍冬皂苷乙 3 mg、川续断皂苷乙 1
mg、芦丁 1 mg、secoxyloganin 1 mg，置同一 10 mL 容
量瓶中，加 50%甲醇定容至刻度，制成浓度分别为
0. 25、0. 3、0. 1、0. 1、0. 1 mg /mL的混合对照品溶液。
2. 3 供试品溶液的制备 精密称取各部位样品粉
末 0. 5 g，置具塞锥形瓶中，精密加入 50%甲醇，称
定重量，超声处理(功率 250 W，频率 25 kHz)40
min，放冷，再称定重量，用 50%甲醇补足损失的重
量，摇匀，0. 45 μm滤膜滤过，取续滤液，即得。
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2. 4 线性关系的考察 分别吸取混合对照品溶液
5、10、15、20、25 μL，按“2. 1”项下色谱条件测定。
其中绿原酸及芦丁以峰面积 Y 对相应的浓度 X 进
行线性回归，而灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙、
secoxyloganin则分别以峰面积 Y 对相对应的浓度 X
的 lg对数进行线性回归。5 个成分的线性方程见
表 1。
表 1 5 种对照品线性关系
成分 线性方程 R
2
(n = 5)
线性范围
/μg
1 绿原酸 Y1 = 2955. 3X1 － 134. 5 0. 9996 1. 25 ～ 6. 25
2 灰毡毛忍冬皂苷乙 Y2 = 2. 6401lgX2 + 2. 3983 0. 9158 1. 50 ～ 7. 50
3 川续断皂苷乙 Y3 = 1. 7629lgX3 + 2. 8883 0. 9999 0. 50 ～ 2. 50
4secoxyloganin Y4 = 1. 8409lgX4 + 2. 6341 0. 9997 0. 50 ～ 2. 50
5 芦丁 Y5 = 1597. 8X5 + 4. 23 0. 9999 0. 50 ～ 2. 50
2. 5 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液 10
μL，连续进样 6 次，测定峰面积，按“2. 1”项下条件
测定含量。结果各标准品含量的 RSD 均小于
2. 62%，表明精密度良好。
2. 6 稳定性试验 取灰毡毛忍冬的同一供试品溶
液，在前述色谱条件下分别在 0、2、4、6、8、10、24 h
进样 10 μL，各标准品含量的 RSD 均小于 2. 98%。
结果表明供试品溶液在 24 h内稳定。
2. 7 重复性试验 取灰毡毛忍冬的同一供试品 5
份，按“2. 3”项下方法提取，按上述色谱条件测定含
量，结果表明各标准品含量的 RSD 均小于 2. 45%，
表明重复性良好。
2. 8 加样回收率试验 取已知含量的灰毡毛忍冬
药材 0. 5 g，精密称定，分别精密加入对照品适量，按
供试品项下方法制备，测定各标准品的含量计算回
收率，结果见表 2。
表 2 5 种成分回收率试验结果(n =6)
成分 样品含量/mg
加入量
/mg
测定值
/mg
平均
回收率
/%
RSD
/%
1 22. 86 0. 80 23. 63 99. 7 2. 31
22. 86 1. 00 23. 87
22. 86 1. 20 24. 07
2 40. 75 0. 80 41. 54 101. 9 2. 76
40. 75 1. 00 41. 76
40. 75 1. 20 42. 01
3 4. 43 0. 80 5. 24 99. 2 3. 06
4. 43 1. 00 5. 43
4. 43 1. 20 5. 57
4 tr 0. 80 0. 77 94. 8 1. 31
tr 1. 00 0. 94
tr 1. 20 1. 13
5 tr 0. 80 0. 78 98. 1 2. 50
tr 1. 00 0. 96
tr 1. 20 1. 21
tr:traces
2. 9 样品测定 精密称取各样品 0. 5 g，按“2. 3”项
下方法制备供试品溶液。样品含量在线性范围内时直
接进样 10 μL，通过回归方程计算含量。结果见表 3。
表 3 不同部位中 5 种样品的含量(%)
成分 花 花蕾 花柄 叶 茎 根
1 4. 57 ± 0. 04 6. 84 ± 0. 03 6. 43 ± 0. 07 0. 59 ± 0. 03 0. 85 ± 0. 10 0. 19 ± 0. 02
2 8. 15 ± 0. 08 9. 14 ± 0. 18 2. 86 ± 0. 06 2. 21 ± 0. 05 0. 77 ± 0. 03 tr
3 0. 88 ± 0. 09 1. 38 ± 0. 09 0. 41 ± 0. 02 ND ND 0. 56 ± 0. 01
4 ND 1. 05 ± 0. 05 ND ND ND ND
5 ND ND ND ND ND ND
ND:not detected;tr:traces
3 讨论
3. 1 本实验首次建立了 HPLC 同时测定灰毡毛忍
冬不同部位 5 个活性成分含量的方法。该方法简
便、灵敏、准确，对灰毡毛忍冬药材的化学成分研究
有一定的指导意义。
3. 2 从实验数据可以看出，不同部位各活性成分
含量差别较明显。主要活性成分绿原酸在花蕾、花、
花柄、茎、叶、根 6 个部位均有分布，各部位含量:花
蕾 ＞花柄 ＞花 ＞茎 ＞叶 ＞根;灰毡毛忍冬皂苷乙在
各个部位也有发现，各部位含量:花蕾 ＞花 ＞花柄 ＞
叶 ＞茎 ＞根;川续断皂苷乙亦存在于花蕾、花、花柄、
根中，各部位含量:花蕾 ＞花 ＞根 ＞花柄。由此，笔
者对灰毡毛忍冬化学成分的利用可以不仅仅局限在
花及花蕾部位，对根、茎、叶等部位可以进一步开发，
以便最大限度的利用灰毡毛忍冬资源。
3. 3 忍冬属植物化学成分主要包括有机酸类、黄
酮类、环烯醚萜类、皂苷等，作为主要化学成分的绿
原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙在各部位含量均很高;川续
断皂苷乙在叶、茎中未有发现，且在根中含量也很
少;芦丁及 secoxyloganin在根中均未检测到，这可能
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与不同化学物质在不同部位的积累程度有关，当然
提取溶剂浓度、提取时间等因素也有待进一步考察。
参 考 文 献
［1］徐炳声 . 中国植物志［M］. 第 72 卷 . 北京:科学出版
社，1988:244.
［2］国家药典委员会 . 中华人民共和国药典［S］. 一部 . 北
京:中国医药科技出版社，2010:28.
［3］贾晓东，冯煦，赵兴增，等 . 灰毡毛忍冬的化学成分研究
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［4］贾晓东，冯旭，董云发，等 . 灰毡毛忍冬中皂苷类成分的
研究［J］. 中草药，2007，38(10) :1452-1455.
［5］陈雨，赵友谊，吴双，等 . 灰毡毛忍冬花蕾水溶性化学成
分研究［J］. 中药材，2012，35(2) :231-234.
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Lonicera isolation and structural determination of seven gly-
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tion of iridoids，phenolic acids，flavonoids，and saponins in
Flos Lonicerae and Flos Lonicerae Japonicae by HPLC-
DAD-ELSD coupled with principal component analysis
［J］. J Sep Sci，2007，30:3181-3192.
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screening of natural antioxidants from chinese herb Flos
Lonicerae Japonicae by DPPH-HPLC-DAD-TOF /MS［J］.
J Sep Sci，2008，31:3519-3526.
酒大黄中 5 种蒽醌类成分一测多评方法的建立
张德培1，罗源生1，贺凡珍2
(1. 广东广弘药材有限公司，广东 广州 510080;2. 中山大学生命科学学院，广东 广州 510275)
摘要 目的:建立酒大黄药材中 5 种蒽醌成分一测多评的分析方法。方法:以大黄素为内标，采用相对校正因
子法对芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚进行定量分析，实现一测多评。结果:相对校正因子法计
算的含量值与外标法实测值一致。结论:一测多评法具有准确、简便等特点，值得推广应用。
关键词 酒大黄;蒽醌;一测多评;校正因子
中图分类号:R284. 1 /R284. 2 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2012)04-0588-03
收稿日期:2011-11-29
作者简介:张德培(1953-) ，男，主管中药师，主要从事中药学方面的研究。
* 通讯作者:罗源生，Tel:13902274192，E-mail:gdsycgs@ vip. 163. com。
大黄为蓼科植物掌叶大黄 Rheum palmatum
L. 、唐古特大黄 Rheum tanguticum Maxim. ex Balf. 或
药用大黄 Rheum officinale Baill. 的干燥根及根茎。
酒大黄为其临床常用炮制品，善清上焦血分热
毒〔1〕。有文献〔2〕曾采用外标法测定酒大黄中 5 种
蒽醌类成分，外标法具有准确度高的优点，但必须有
足够量、高纯度的化学对照品，应用受到一定限制。
为解决这一矛盾，笔者建立了酒大黄中 5 种蒽醌成
分的一测多评法，该法具有准确、简便等特点，值得
推广应用。
1 仪器与材料
Dionex P680 型高效液相色谱仪(ASI-100 自动
进样器，P680 四元梯度泵，PDA-3000 检测器) ;Di-
onex U3000 型高效液相色谱仪(WPS-3000 自动进
样器，DGP-3600SD 双三元泵，DAD-3000 二极管阵
列检测器) ;色谱柱:Agilent HC-C18(4. 6 mm × 250
mm，5 μm) ，Dionex C18(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，
Shiseid C18 (4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ;Sartorius
BP211D型电子天平;KQ 3200E 超声提取器(昆山
市超声仪器有限公司) ;Simplicity SIMS00000 超纯
水器(美国 Millipore 公司)。
酒大黄样品来源:安徽百草园药业销售公司
(编号:20100726-1)、亳州凯利中药饮片有限公司
(编号:20100726-2)、安国市药兴药材有限公司(编
号:20100726-3)。
芦荟大黄素(批号:110795-200806)、大黄酸(批
号:110757-200206 )、大 黄 素 (批 号:110756-
200110)、大黄酚(批号:110796-201017)、大黄素甲
醚(批号:110758-200912)对照品均购自中国药品生
物制品检定所。甲醇(美国 Burdick ＆ Jackson) ，甲
醇(广东光华化学厂有限公司) ，水为超纯水;其余
试剂均为分析纯。
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